張兆成 劉恩昌 史 輝 （山東省昌樂縣畜牧獸醫(yī)局 262400）

鴨坦布蘇病毒屬于黃病毒科、黃病毒屬、恩塔亞病毒群。該病主要以體重、食欲、產(chǎn)蛋率下降與高熱，甚至停產(chǎn)以及部分死亡為特征。該病原傳播迅速且發(fā)病范圍極廣，全國大部分省市蛋鴨曾受到嚴(yán)重影響。

1 病毒的流行病學(xué)

鴨感染后主要表現(xiàn)站立不穩(wěn)，臥地不起等神經(jīng)癥狀，但與其他黃病毒屬病毒不同的是該病毒可導(dǎo)致蛋鴨產(chǎn)蛋下降。根據(jù)報(bào)道，該類病毒的傳播主要媒介是節(jié)肢動物。該病感染主要以產(chǎn)蛋鴨群為主，還包括商品肉鴨、肉用種鴨，現(xiàn)有報(bào)道在種鵝和野鴨體內(nèi)也分離到該病毒。

2 病毒的培養(yǎng)特性

經(jīng)研究表明鴨坦布蘇病毒可以在雞胚、鴨胚、鴨胚成纖維細(xì)胞、雞胚成纖維細(xì)胞及部分傳代細(xì)胞系(如DF1)中增殖并增殖到較高的滴度，經(jīng)尿囊腔接種雞胚或者鴨胚后2～6d可以致死胚體。經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)，病毒可以對成纖維細(xì)胞引起明顯的病變。

3 臨床診斷

臨床上該病主要以產(chǎn)蛋驟降和一系列明顯的病理變化為診斷依據(jù)，鴨發(fā)病后采食量下降甚至廢絕、體溫升高、精神委頓，喜臥、排綠色稀便，可見有神經(jīng)癥狀，部分可見有軟腳現(xiàn)象。剖解病鴨后可見病鴨脾臟明顯腫大，呈花斑樣病變，嚴(yán)重可出現(xiàn)壞死點(diǎn)，腎臟腫大，蛋鴨可見卵泡破裂，卵巢出血，卵泡膜明顯增厚、渾濁。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 病毒分離鑒定

一般將發(fā)病鴨的脾臟研磨離心后取上清經(jīng)尿囊腔接種8日齡SPF雞胚，接種后2～6d雞胚死亡，死亡時間在第4天相對比較集中。死亡雞胚主要表現(xiàn)為尿囊膜明顯增厚，胚體水腫出血。胚體肝臟腫大，有壞死灶。分離毒株在雞胚、鴨成纖維細(xì)胞及DF1細(xì)胞上均可正常生長，一般2d左右即可導(dǎo)致細(xì)胞病變，產(chǎn)生CPE，檢測鴨坦布蘇病毒最為經(jīng)典的方法就是病原的分離鑒定，但這種診斷方法影響因素多、工作量較大且耗時較長，所以在臨床應(yīng)用上該方法具有一定的局限性。

4.2 血清學(xué)檢測

4.2.1 傳統(tǒng)的血清學(xué)方法 這種方法最經(jīng)典的就是中和實(shí)驗(yàn)，它的主要原理可以歸納為：血清中的中和抗體可以與病毒相互作用，從而導(dǎo)致病毒失去吸附細(xì)胞的能力或者使其侵入或者脫殼的能力受到抑制，繼而喪失對敏感細(xì)胞和易感動物的感染力。這種方法多被用于動物免疫水平和疫苗效價(jià)的評價(jià)。進(jìn)行中和實(shí)驗(yàn)需要采集急性期和恢復(fù)期血清進(jìn)行檢測，檢測診斷費(fèi)時費(fèi)力，不能達(dá)到早期快速診斷的目的，特異性和敏感性不高，雙份標(biāo)本的采集有困難。

4.2.2 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是一種靈敏、簡單、快速并且適合于大規(guī)模檢測的診斷方法。ELISA可以檢測抗體，也可以檢測抗原。該方法具有很大的優(yōu)點(diǎn)，使用的抗原全部為滅活過的病毒，所以沒有病毒的擴(kuò)散等問題，同時該法不需要實(shí)驗(yàn)動物也不需要大量的細(xì)胞，減少了人力物力，這就使鴨坦布蘇病毒的診斷從特定的實(shí)驗(yàn)室走向了普通的實(shí)驗(yàn)室。

4.2.3 間接免疫熒光法(IFA) 免疫熒光技術(shù)是將免疫學(xué)方法與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。在熒光顯微鏡下可檢測出熒光素所發(fā)出的熒光，從而可從細(xì)胞上定位出抗原。鴨坦布蘇病毒抗體的檢測可通過該方法來實(shí)現(xiàn)。雖然這種方法特異性強(qiáng)、靈敏性高，但是在操作上較為復(fù)雜，不適宜作為臨床快速診斷的方法。

4.3 分子生物學(xué)診斷方法

鴨坦布蘇病毒全基因序列測定取得的進(jìn)展、分子生物學(xué)及生物信息學(xué)的發(fā)展，為鴨坦布蘇病毒的快速基因檢測提供了依據(jù)。

4.3.1 RT-PCR 是經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄將RNA模板轉(zhuǎn)化為cDNA，再以其為模板進(jìn)行擴(kuò)增，從而獲得所要的基因片段?，F(xiàn)多以該病毒的NS5和E基因?yàn)槟康幕?。該方法可從臨床病鴨上快速敏感的檢測出該病，且結(jié)果快速、簡單，特異性高，這為鴨坦布蘇病毒病的診斷提供了科學(xué)的檢測手段。

4.3.2 套式RT-PCR 是應(yīng)用兩對引物對目的基因片段進(jìn)行兩次擴(kuò)增，即先應(yīng)用一對外部引物對目的基因進(jìn)行第一次擴(kuò)增，再將第一對擴(kuò)增產(chǎn)物作為模板，用第二對內(nèi)部引物對其進(jìn)行擴(kuò)增，這種方法具有較高的特異性和敏感性。套式PCR比一般的PCR敏感性高10倍，并且還具有快速、特異等優(yōu)點(diǎn)。

4.3.3 實(shí)時熒光定量RT-PCR 實(shí)時熒光定量反轉(zhuǎn)錄PCR這種技術(shù)在近幾年才發(fā)展起來，它即擺脫了普通PCR中所存在的不可準(zhǔn)確定量和假陽性污染等缺點(diǎn)，又提升了自 身的靈敏性，是一種既快速又可靠的病毒檢測技術(shù)。該方法檢測范圍廣，可對多種樣品進(jìn)行檢測。這種方法的特異性較好，但成本高。

5 鴨坦布蘇病毒病的防控

2010年鴨坦布蘇病毒屬于首次爆發(fā)和流行，所以目前針對該病還沒有有效的治療和免疫防治措施，所以要做到盡可能的減少養(yǎng)殖業(yè)的損失就要以預(yù)防為主，防治結(jié)合。目前，針對發(fā)病鴨群應(yīng)采取如下措施：（1）提高管理人員的素質(zhì)，強(qiáng)調(diào)生物安全措施意識，做好飼養(yǎng)人員的生活安排，管理人員和飼養(yǎng)人員必須時刻要盡量隔離開。（2）注意消毒，特別要對用具設(shè)備和運(yùn)輸車輛，減少發(fā)病鴨場與健康鴨場的人員和車輛的流動。（3）對發(fā)病鴨場的種蛋做好消毒工作，同時加強(qiáng)衛(wèi)生管理、墊料的消毒和處理、同時將病死鴨進(jìn)行生物處理或者焚燒。（4）針對健康鴨群主要是做好消毒工作，減少對鴨群的應(yīng)激，特別是在疫苗接種的時候，注意天氣變化，盡量保持鴨舍內(nèi)溫度的適宜，避免突然升降溫，及時采取保溫措施。在疫苗方面，針對鴨坦布蘇病毒的滅活苗、基因工程苗和減毒活疫苗等尚在研發(fā)中。