許莉，王曉華，趙美瑾，魏漢蓮

（1.遼寧省中藥研究所，遼寧沈陽 110163；2.朝陽市喀左縣結(jié)核病防治所，遼寧朝陽 122300）

五味子多糖的研究進(jìn)展

許莉1，王曉華2，趙美瑾1，魏漢蓮1

（1.遼寧省中藥研究所，遼寧沈陽 110163；2.朝陽市喀左縣結(jié)核病防治所，遼寧朝陽 122300）

摘 要：從提取分離、分級純化、含量測定、藥理作用等方面對五味子多糖進(jìn)行概述。五味子多糖的提取方法由一般的水提醇沉法，發(fā)展到堿水法、微波提取法等；五味子多糖的分級純化多使用不同濃度乙醇，并用石油迷等有機(jī)溶劑除去蛋白，現(xiàn)已進(jìn)一步分離得到幾個(gè)單一化合物；五味子多糖的含量測定一般采用苯酚-硫酸或硫酸-蒽酮等比色法；五味子多糖藥理作用的研究涉及消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及抗氧化、抗衰老、抗腫瘤等多方面。

關(guān)鍵詞：五味子多糖；提取分離；分級純化；藥理作用

五味子為木蘭科植物五味子（Schisandra chinensis（Turcz.）Baill.）的干燥成熟果實(shí)，習(xí)稱“北五味子”。性酸、甘、溫，歸肺、心、腎經(jīng)，具有收斂固澀，益氣生津，補(bǔ)腎寧心之功效。用于久咳虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗盜汗，津傷口渴，短氣脈虛，內(nèi)熱消渴，心悸失眠[1]。五味子的主要活性成分有木脂素、多糖、萜類等，早期對五味子的研究主要集中在脂溶性成分木脂素的提取、分離純化和藥理作用等方面。對五味子多糖的研究始于20世紀(jì)90年代，在五味子多糖的提取、分離純化、含量測定、藥理作用等方面都有研究，下面就這幾個(gè)方面進(jìn)行綜述[2]。

1 提取分離

五味子多糖是極性大分子化合物，一般常采用水提醇沉的提取方法，但具體步驟又有區(qū)別。楊婷婷等[3]采用水提4次、每次半個(gè)小時(shí)，用無水乙醇和95%的乙醇反復(fù)洗滌處理。洪建躍等[4]采用水提法，以提取液中多糖含量為考察指標(biāo)，選用提取時(shí)間、提取次數(shù)、提取溫度及料液比作為考察因素，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化，確定提取五味子多糖的最佳工藝條件為：煎煮4 h，加水25倍，溫度100℃。范榮軍等[5]采用單因素實(shí)驗(yàn)研究了三種不同溶劑對五味子中多糖提取效率的影響，發(fā)現(xiàn)醇堿法對五味子多糖的提取效率最高，是水提法得率的1.12倍，是堿水法得率的1.06倍，由此確定堿水法是提取五味子多糖的最佳工藝。孟憲軍等[6]應(yīng)用超聲波技術(shù)對遼五味子多糖進(jìn)行提取研究，并將超聲波提取法和傳統(tǒng)浸提方法進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)超聲波提取法比傳統(tǒng)提取法效率高出36.58%，并確定超聲波提取的最佳提取工藝條件為：以體積分?jǐn)?shù)60%的乙醇作為溶劑，超聲波功率 400 W，固液比（g∶mL）為 1∶25，提取溫度55℃，提取時(shí)間40 min，遼五味子多糖的提取率可達(dá)到22.30%，并通過紅外光譜分析，確證超聲波浸提沒有使遼五味子多糖的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。

2 分離純化

起初對五味子多糖的分離純化研究，大多采用水溶醇沉、沉淀用氯仿-正丁醇除蛋白，再向其水溶液中加入不同濃度乙醇分級的方法[7]，有研究表明：在不同濃度乙醇沉淀物中，以15%濃度乙醇的沉淀物最多（占沉淀總量的65.9%）、60%濃度乙醇的沉淀物其次（占沉淀總量的24%）[8]。用正丁醇和氯仿去蛋白之后，還有采用斐林試劑去除可溶性的還原糖、茚三酮試劑去除氨基酸，最后得到的五味子多糖含量為85.56%[9]。目前對五味子多糖的研究已深化到分離出單一化合物。孟憲軍等[10]將水提醇沉后的粗多糖用酶法與三氯乙酸-正丁醇法結(jié)合脫蛋白，將脫蛋白后的五味子多糖分別經(jīng)DEAE-cellulose 52層析柱、Sephadex S-300柱層析，將多糖分離成3種多糖組分SCP-BⅠ、SCP-BⅡ、SCP-BⅢ；經(jīng)Sephadex S-300凝膠柱層析后，均為對稱而且單一峰，并經(jīng)紫外光譜分析，SCP-BⅠ、SCPBⅡ、SCP-BⅢ在280、260nm處無吸收，證明SCP-BⅠ、SCP-BⅡ、SCP-BⅢ多糖為均一組分。

3 含量測定

五味子多糖的含量測定通常采用比色法。經(jīng)水提醇沉法提取五味子多糖，或用石油醚、乙醇等有機(jī)溶劑先脫脂，再用水提醇沉法提取，之后經(jīng)純化處理，再測定含量。薛梅等[11]用苯酚-硫酸比色法測定含量為11.98%，平均回收率為102.13%。譚曉虹等[12]測得北五味子中多糖含量為6.57%，平均回收率為99.78%，RSD=1.54%。張?zhí)m杰等[13]用稀堿水、水溶液提取，經(jīng)醇析、Savage法脫蛋白等步驟，用苯酚-硫酸比色法測定五味子粗多糖含量為6.1%。范榮軍等[5]采用硫酸-蒽酮法考察了三種不同溶劑提取方法得到的五味子多糖的含量，結(jié)果分別為：蒸餾水提取液對五味子多糖的提取率最低，為7.68%，堿水提取液比蒸餾水提取液的得率高出5.86%，為8.13%，而醇堿提取液對五味子多糖的提取率最高，為8.61%。

4 保健作用

4.1 保肝作用

高善軍等[14]將五味子粗多糖多次灌胃給藥，對四氯化炭中毒小鼠肝中丙二醛含量具有明顯降低作用，亦能顯著抑制小鼠肝勻漿脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，能促進(jìn)正常小鼠的膽汁分泌和部分肝切除后肝的再生，表明北五味子粗多糖的保肝作用與其抗脂質(zhì)氧化、促進(jìn)肝再生和利膽作用有關(guān)。睢大員[15]、曾靖[16]等以200、400mg/kg五味子多糖灌胃四氯化炭肝損傷小鼠，可使小鼠SGPT含量降低，可使肝糖原含量顯著升高。

4.2 升高白細(xì)胞和增強(qiáng)免疫作用

羅基花等[17]通過給腹腔注射環(huán)磷酰胺的小鼠灌胃不同劑量的五味子粗多糖，尾靜脈采取，檢測外周白細(xì)胞下降率的實(shí)驗(yàn)研究，表明五味子粗多糖可對抗環(huán)磷酰胺所致白細(xì)胞減少。李巖等[18]通過研究發(fā)現(xiàn)北五味子粗多糖灌胃給藥，能增加環(huán)磷酰胺所致免疫抑制小鼠胸腺和脾臟重量，表明北五味子粗多糖具有增強(qiáng)免疫功能的作用。苗明三等[19]通過觀察五味子多糖對正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能、溶血素形成、溶血空斑形成及淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響，發(fā)現(xiàn)五味子多糖可顯著提高正常小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)、促進(jìn)溶血素及溶血空斑形成、促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，表明五味子多糖有較好的免疫興奮作用。

4.3 抗氧化作用

門紅軍等[20]實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)老年大鼠血清丙二醛（MDA）含量明顯高于青年大鼠，而超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性明顯低于青年大鼠，表明老年大鼠體內(nèi)自由基代謝異常，而不同劑量（100、200、400 mg/kg）的五味子粗多糖能顯著降低老年大鼠血清MDA含量，升高SOD、CAT和GSH-Px活性。孟憲軍等[6]采用烘箱法對遼五味子多糖的抗油脂氧化性進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)遼五味子多糖對油脂具有較強(qiáng)的抗氧化性能，同時(shí)發(fā)現(xiàn)抗壞血酸對遼五味子多糖具有協(xié)同抗氧化作用。

4.4 抗衰老、抗疲勞作用

孫文娟等[21]通過北五味子粗多糖按100、200、400 mg/g連續(xù)灌胃3 d～7 d，觀察小鼠的存活時(shí)間、連續(xù)游泳時(shí)間和免疫器官重量實(shí)驗(yàn)，以及大鼠連續(xù)灌胃20 d，測血清過氧化脂質(zhì)（LPO）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，觀察北五味子粗多糖的抗衰老作用，發(fā)現(xiàn)北五味子粗多糖能明顯提高小鼠耐氧及抗疲勞能力，增加正常小鼠免疫器官重量，并明顯增強(qiáng)小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，可明顯降低老年大鼠LPO含量，提高SOD活性，說明北五味子粗多糖具有抗衰老作用。苗明三等[22]通過五味子多糖對衰老模型小鼠胸腺及脾臟組織的影響實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)五味子多糖可使衰老小鼠已萎縮的胸腺及脾臟明顯增大變厚，胸腺皮質(zhì)細(xì)胞數(shù)及脾淋巴細(xì)胞數(shù)明顯增加，脾小結(jié)增大，使衰老小鼠已退行性變的神經(jīng)細(xì)胞恢復(fù)正常，表明五味子多糖不僅可提高衰老小鼠的免疫功能，也可明顯促進(jìn)衰老小鼠神經(jīng)細(xì)胞的發(fā)育，說明五味子多糖具有良好的抗衰老作用。栗爽等[23]實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)：五味子粗多糖溶液能顯著延長小鼠游泳時(shí)間和小鼠缺氧存活時(shí)間。按100、200、300 mg/kg的不同劑量給予小鼠，耐缺氧時(shí)間分別為9.52、12.08、16.81 min，而空白和陽性對照組分別為6.57、10.29 min；缺氧存活時(shí)間分別為 40.98、43.76、47.24 min，而空白和陽性對照組分別為30.91、43.15 min，其中高劑量組比空白組顯著提高游泳和缺氧存活時(shí)間，表明五味子粗多糖具有一定的抗疲勞作用。

4.5 抑制腫瘤作用

黃玲等[24-26]采用腫瘤移植的動物模型，對瘤體包埋、制片、HE染色，觀察到五味子多糖可在一定程度上使瘤細(xì)胞退變、凋亡，使瘤內(nèi)炎細(xì)胞增多，瘤周浸潤部瘤細(xì)胞部分退變，有輕度抑瘤形態(tài)學(xué)表現(xiàn)；并進(jìn)一步探討了五味子多糖對S180荷瘤小鼠作用機(jī)制與機(jī)體抗氧化作用的關(guān)系：五味子多糖能顯著增高荷瘤小鼠血液總超氧化物岐化酶（SOD），顯著降低荷瘤小鼠血液丙二醛（MDA），說明五味子多糖能提高荷瘤小鼠SOD的活力，抑制自由基的產(chǎn)生，具有一定的抗脂質(zhì)過氧化作用；還研究了五味子多糖的抑瘤率以及對免疫器官（脾臟、胸腺）的影響：結(jié)果發(fā)現(xiàn)濃五味子多糖（400 ng/kg）的抑瘤率達(dá)到48.5%，稀五味子多糖（200 mg/kg）的抑瘤率也達(dá)到31.4%。一般認(rèn)為，抑瘤率大于30%即可判定其抗腫瘤有效，說明五味子多糖能抑制S180荷瘤小鼠腫瘤的增長，且濃五味子多糖有較顯著的抑瘤作用，濃五味子多糖合并環(huán)磷酰胺抑瘤率達(dá)74.5%，比單純用環(huán)磷酰胺抑瘤率69.5%有所提高，說明五味子多糖合并環(huán)磷酰胺有協(xié)同抑瘤作用。王艷杰等[27]以腹腔注射、腋下注射接種的方式，進(jìn)行荷瘤小鼠的生命延長率實(shí)驗(yàn)和抑瘤實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：五味子粗多糖能夠抑制荷瘤小鼠腫瘤的生長，其高、中劑量組能夠延長H22、S180荷瘤小鼠的生存時(shí)間，并能抑制S180荷瘤小鼠腫瘤的增長，其高劑量組抑瘤率達(dá)到45.4%，而生命延長率和抑瘤率實(shí)驗(yàn)中，不同給藥途徑的低劑量組與空白對照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，初步證實(shí)了五味子粗多糖的抗腫瘤作用與劑量有一定的相關(guān)性。

4.6 抗突變作用

王艷杰[28]、陳文靜[29]、李明珠[30]等通過觀察五味子多糖對環(huán)磷酰胺所致小鼠骨髓姐妹染色單體交換實(shí)驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn)、微核實(shí)驗(yàn)的影響，證實(shí)五味子多糖具有抗突變性。

4.7 抑菌作用

范榮軍等[31]以紙片瓊脂擴(kuò)散法測定不同溶劑提取的五味子多糖對實(shí)驗(yàn)菌株的抑菌效果，結(jié)果五味子多糖對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、銅綠假單胞菌、肺炎白氏克雷菌、枯草桿菌等幾種菌均有不同程度的抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、肺炎白氏克雷菌的抑制作用較強(qiáng)，且3種不同溶劑提取的五味子多糖對不同菌種的抑制作用沒有顯著性差異。其中陰性對照實(shí)驗(yàn)可知溶劑蒸餾水對幾種菌種均無任何抑制作用，陽性對照實(shí)驗(yàn)顯示0.08 mg/mL的多糖對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、銅綠假單胞菌、肺炎白氏克雷菌、枯草桿菌的抑制作用均優(yōu)于2 000 U/mL的青霉素鈉，而對大腸桿菌的抑制作用卻是相反。

4.8 鎮(zhèn)痛作用

劉丹娜等[32]以縮足和舔足時(shí)間之和作為傷害性反應(yīng)的行為學(xué)指標(biāo)，研究不同劑量五味子多糖灌胃給藥對小鼠酒石酸銻鉀扭體反應(yīng)和大鼠甲醛致痛行為的抑制作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)五味子多糖灌胃給藥對于小鼠的扭體反應(yīng)具有顯著的抑制作用，且呈一定的劑量依賴性，劑量 20、50、100 mg/kg的扭體次數(shù)分別為（27.80±5.81）次，（24.90±3.75）次和（15.30±3.43）次，與對照組（32.90±7.40）次相比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。50、100 mg/kg五味子多糖可顯著降低甲醛第一時(shí)相和第二時(shí)相的傷害性反應(yīng)表達(dá)，而20 mg/kg五味子多糖對甲醛疼痛雙相反應(yīng)無抑制作用，說明五味子多糖灌胃給藥對于小鼠扭體試驗(yàn)和大鼠甲醛試驗(yàn)兩種不同性質(zhì)的病理性痛都有鎮(zhèn)痛作用。

4.9 降脂減肥作用

高曉旭等[33]通過肥胖小鼠體重變化實(shí)驗(yàn)、肥胖小鼠體內(nèi)脂肪指數(shù)變化實(shí)驗(yàn)、對肥胖小鼠生化指標(biāo)影響的實(shí)驗(yàn)、對蛋黃性小鼠總膽固醇和甘油三酯影響的實(shí)驗(yàn)、對四氧嘧啶小鼠總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白影響的實(shí)驗(yàn)的研究表明：北五味子多糖具有明顯的減肥作用，而且降低肥胖小鼠體重的功能不隨服用劑量的增加而加強(qiáng)，北五味子多糖200 mg/kg劑量組對肥胖小鼠脂肪指數(shù)降低效果最好，能明顯降低血清中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、血糖（GLU）含量，對肥胖小鼠血清中高密度脂蛋白（HDL）有明顯的升高作用，且200 mg/kg劑量組效果最好；北五味子多糖200 mg/kg劑量組對蛋黃造成小鼠總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）升高的抑制作用強(qiáng)于100 g/kg劑量組，劑量減少至50 mg/kg時(shí)則無此作用；北五味子多糖100 mg/kg劑量組對四氧嘧啶小鼠總膽固醇（TC）、低密脂蛋白（LDL）升高有明顯的抑制作用；50、100、200 mg/kg劑量組都能明顯促進(jìn)高密脂蛋白（HDL）升高，且并非用量越大效果越好。

5 結(jié)論與建議

從以上文獻(xiàn)資料可以看出，對五味子多糖的研究起步較晚，制備方法相對簡單，多采用水提醇沉法，但目前已研究應(yīng)用微波方法提取，并已分離出幾個(gè)單體化合物；藥理活性方面研究較廣泛，涉及到保肝、升白細(xì)胞和增強(qiáng)免疫、抗氧化、抗衰老、抗疲勞、抗突變、抑制腫瘤、抑菌、鎮(zhèn)痛、降脂減肥等，但研究對象只限于粗多糖，尚未研究單體化合物的藥理作用，并且藥理實(shí)驗(yàn)多停留在行為學(xué)、器官和組織水平，藥理機(jī)制研究相對缺乏等等；含量測定方法均為測定總糖的比色法，不能真實(shí)地反映多糖含量。未來如果能制備出五味子多糖單體化合物，并對其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行深入研究，對藥理作用機(jī)理進(jìn)一步探討，研制出安全、有效的中藥新藥應(yīng)用于臨床，以及具有保健作用的食品、飲料等應(yīng)用于人們的日常生活，為人類的健康保駕、護(hù)航，對五味子資源的利用將更加廣泛。

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Advances in Research of Polysaccharide from Schisandra

XU Li1，WANG Xiao-hua2，ZHAO Mei-jin1，WEI Han-lian1
（1.Liaoning Institute of Traditional Chinese Medicine， Shenyang 110163， Liaoning， China；2.Liaoning Kazuo County of The Prevention and Treatment of Tuberculosis， Chaoyang 122300， Liaoning， China）

Abstract：Schisandra Polysaccharide from extraction， separation， classication，purification， assay， pharmacological effects and other aspects were summarized.The extraction methods of Schisandra polysaccharide developed from general water extraction and alcohol precipitation method， to alkaline water，microwave methods，etc； Schisandra polysaccharide grading purifying was used different concentrations of ethanol， and the protein was removed by petroleum fans and other organic solvents； several single compounds are further isolated now；the determination of the amount of polysaccharide Schisandra in commonly used Phenol-sulfuric acid or sulfuric acid-anthrone colorimetry；Schisandra polgsaccharide pharmacological research involvde the digestive system，cardiovascular system，central nervous system as well as antioxidant， anti-aging， anti-tumor， etc.

Key words：schisandra polysaccharide；extraction and separation；classification purifying；pharmacological effects

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.07.034

許莉（1966—），女（漢），副教授，碩士，主要從事保健品研究與開發(fā)及教學(xué)工作。

2012-07-10