性控精液人工授精試驗

李同豹，殷元虎

(黑龍江省畜牧研究所，黑龍江 齊齊哈爾161005)

目前，我國奶業(yè)和養(yǎng)牛業(yè)發(fā)展速度較快，但隨之而來的奶牛飼養(yǎng)問題和弊病也相應出現(xiàn)很多。其中最為突出的現(xiàn)象是為追求高生產力而使奶牛日糧精料飼喂比例過高，造成奶牛的繁殖疾患較多、繁殖效率下降較大，以及盲目追求快速發(fā)展而只注重數(shù)量不注重質量所導致的高產奶牛數(shù)量相對較少、良種牛比例較低、奶牛遺傳素質總體水平不高。因此，當前在提高奶牛生產性能的同時，進一步提高奶牛的繁殖效率和增加良種奶牛的飼養(yǎng)比例及數(shù)量是急需解決的問題。自然狀態(tài)下，受性別比率的制約，1 頭奶牛終生只能提供3 ～4 頭母犢，獲得優(yōu)質高產奶牛數(shù)量是有限的，這使優(yōu)良奶牛種群擴繁受到很大的限制。性控精液人工授精的母犢出生比率達90%以上，可近乎成倍提高奶牛的繁殖效率、加快良種奶牛的擴繁速度，不僅使奶牛的繁殖在性別上實現(xiàn)了人為控制而且使奶牛繁殖的數(shù)量和質量也實現(xiàn)了人為控制，既可以提高養(yǎng)殖效益，又可以進一步地縮短世代間隔、滿足育種選擇強度的需要，其市場前景普遍看好。但性控精液因單位劑量有效精子數(shù)量較少、活力較低、在體內存活時間較短，人工授精受胎率較低，影響了其人工授精的應用效果，需要改進和優(yōu)化輸精方法、提高輸精效率。

本試驗通過對人工授精方法的改進和優(yōu)化、母牛子宮環(huán)境的改善、人為激素調節(jié)、日糧蛋白質營養(yǎng)水平調控及同期發(fā)情等試驗研究，觀察比較各項措施對性控精液人工授精情期受胎率的影響，對提高奶牛性控精液人工授精的情期受胎率和輸精效率進行了探討。

1 材料與方法

1.1 試驗時間與地點

2009 ～2012年分別在黑龍江省齊梅奶牛場、依安縣三興鎮(zhèn)東安村振安奶牛場進行奶牛性控精液人工授精試驗。

1.2 受配奶牛

選擇體況良好、生殖系統(tǒng)與發(fā)情周期正常的大于16月齡的育成牛，無流產、難產記錄、生殖系統(tǒng)及子宮內環(huán)境優(yōu)良的經產母牛，且各項試驗的試驗牛盡量選擇年齡、體重、胎次、泌乳階段、泌乳量等生理情況相近的牛只。

1.3 精液與藥品

性控凍精來源于黑龍江省大慶市田豐生物工程有限公司，為流式細胞分離儀分離后冷凍保存的X 精子。性控凍精的規(guī)格為0.25 mL/支，有效精子數(shù)2 ×106，活力＞0.3，X 精子含量≥90%。

促排3 號(LHRH-A3) 為寧波第二激素廠生產，規(guī)格為25 mg/支; 用于子宮凈化的藥物為醫(yī)用鹽酸環(huán)丙沙星注射液，規(guī)格為50 ml/瓶; 氯前列醇鈉為寧波市激素制品有限公司生產，0.5 mg/支。

1.4 輸精

加強對受配奶牛的發(fā)情觀察，以靜立接受爬跨的奶牛判斷為發(fā)情。輸精前，對發(fā)情奶牛進行直腸檢查，判斷出卵泡為何側發(fā)育。從液氮罐中取出凍精細管，立即置于39 ～40℃水浴10 ～20 s 解凍。擦干后剪去一端，取1 滴精液滴于載玻片上，蓋上蓋玻片鏡檢，活力＞0.3 的裝入輸精槍中，準備授精。輸精劑量均為0.25 mL/支細管，每頭1 支。

1.5 試驗方法

采用單因素對比設計，分別進行不同輸精部位、不同輸精時間、輸精時肌注不同劑量LHRH-A3、輸精前對經產母牛進行子宮投藥凈化處理和不同蛋白質水平日糧飼喂后性控精液人工授精試驗。重復試驗3 次，試驗分組與數(shù)量情況見表1。

表1 試驗分組與數(shù)量

1.6 妊娠診斷

在輸精后的28 d ，使用B 超進行初次妊娠診斷，60 d 進行直腸檢查復診，確定妊娠。

1.7 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS、SAS 統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析，P ＜0.05 為差異顯著。

2 結果與分析

2.1 輸精部位對情期受胎率的影響

試驗牛靜立接受爬跨后8 ～12 h 進行直檢，判斷卵泡的發(fā)育情況，在卵泡即將排卵前分別于子宮體、子宮角基部及子宮角深部3 個部位進行性控精液輸精。結果: 輸精于子宮體部位的情期受胎率顯著低于后兩個部位; 輸于子宮角深部受胎率略高于子宮角基部，但差異不顯著(表2) 。說明性控精液人工輸精部位在子宮角比較適宜，但為方便操作和避免宮角損傷，輸于子宮角基部為宜。

表2 性控精液不同子宮輸精部位對情期受胎率的影響

2.2 輸精時間對情期受胎率的影響

試驗牛分別于靜立發(fā)情后12 h 前、12 ～14 h、14 ～18 h、18 h 以后4 個時間段于子宮角基部進行性控精液輸精。結果: 育成牛在12 ～14 h 間情期受胎率較高，與其它時間段差異極顯著(表3) ; 經產牛在12 ～18 h 間的受胎率顯著高于其它時間段(表4) 。說明性控精液輸精時間，育成牛在發(fā)情后12 ～14 h，經產牛在發(fā)情后12 ～18 h 較為適宜。

表3 育成牛性控精液輸精時間對情期受胎率的影響

表4 經產牛性控精液輸精時間對情期受胎率的影響

2.3 肌注LHRH-A3對情期受胎率的影響

在試驗牛發(fā)情后12 ～18 h 進行子宮角基部性控精液輸精，同時隨機肌肉注射LHRH-A350 mg、25 mg 和不注射對照。結果:低劑量25 mg LHRH-A3處理組的情期受胎率顯著高于另外兩組，高劑量50 mg 組與未處理組差異不顯著(表5) 。說明LHRH-A3低劑量處理可以顯著提高奶牛性控精液人工授精的情期受胎率。

表5 LHRH-A3 處理對性控精液輸精情期受胎率的影響

2.4 子宮凈化處理對情期受胎率的影響

對選擇的經產牛隨機子宮內投注鹽酸環(huán)丙沙星100 mL 進行子宮凈化處理，并于發(fā)情后12 ～18 h 進行子宮角基部輸精。結果:凈化處理組的情期受胎率顯著高于對照組(表6) 。說明對經產牛進行子宮凈化處理，可以很好地改善經產牛的子宮受胎環(huán)境，提高經產牛性控精液人工授精的情期受胎率。

表6 子宮凈化處理對性控精液輸精情期受胎率的影響

2.5 日糧蛋白質水平對情期受胎率的影響

試驗分別設置低、中、高梯度的兩組(A為育成牛組，B 為經產牛組)6 種蛋白質水平日 糧: A1(9.88%) 、A2(12.66%) 、A3(14.06%) 和B1(13.80%) 、B2(16.19%) 、B3(17.80%) 。在試驗母牛發(fā)情周期的中后期開始進行分組飼喂，并于發(fā)情12 ～18 h 進行子宮角基部輸精。結果: 中等梯度蛋白質水平的日糧組的情期受胎率顯著高于其他兩組，低水平組與高水平組的差異也顯著(表7、表8) 。試驗表明: 飼喂中等或中等稍低蛋白質水平的日糧可以顯著提高性控精液人工授精情期受胎率。

表7 日糧蛋白質水平對育成牛性控精液輸精情期受胎率的影響

表8 日糧蛋白質水平對經產牛性控精液輸精情期受胎率的影響

2.6 同期發(fā)情處理對情期受胎率的影響

使用氯前列醇鈉進行同期發(fā)情處理，并于發(fā)情后12 ～18 h 進行子宮角基部輸精。結果: 同期發(fā)情處理組與自然發(fā)情對照組情期受胎率差異不顯著(表9) 。表明同期發(fā)情處理對奶牛性控精液人工授精情期受胎率無不良影響。

表9 同期發(fā)情處理對性控精液情期受胎率的影響

3 結論與討論

3.1 性控精液與常規(guī)精液授精的方法應有所不同，輸精部位應該在有優(yōu)勢卵泡發(fā)育側子宮角內。本試驗表明在子宮角深部和子宮基部性控精液輸精的情期受胎率差異不顯著，但子宮角深部輸精必須是技術熟練的人員操作，否則易造成宮角損傷而致效果相反。所以，性控精液的人工授精部位還是應該在宮角的基部，以保證效果和便于操作。

3.2 在適當?shù)臅r間進行性控精液人工授精非常關鍵。本試驗表明，性控精液的授精時間育成牛應該在靜立接受爬跨后12 ～14 h，經產牛在12 ～18 h。這個時間的差異也許是因為青年母牛排卵時間比成年母牛早的關系; 當然由于個體不同而排卵時間存在著很大的差異，因此要求操作人員要有成熟的卵泡直檢技術，盡可能將個體排卵時間估算準確。

3.3 在母牛發(fā)情后12 ～18 h 時采用注射促排卵的LHRH-A3的辦法促進成熟卵子及時排出而盡快地與精子結合完成受精過程，從而可提高性控精液人工授精的受胎率。本試驗小劑量LHRH-A3的效果顯著，這可能是因為性控精液輸精時間比較晚，大劑量的LHRH-A3有造成個別牛的卵泡黃體化而未排卵的可能。

3.4 良好的子宮內環(huán)境是高受胎率的必要保證。本試驗也驗證了子宮凈化處理對性控精液人工授精的效果提高顯著。子宮凈化處理在性控精液的應用上的報道較少，可能是性控精液試驗多數(shù)是以育成母牛為研究對象，其子宮狀況或子宮內環(huán)境都很好的原因。

3.5 適宜的日糧蛋白質水平是保持奶牛正常發(fā)情、保證輸精受孕的重要條件，日糧蛋白水平過低或者過高，均會不同程度地對奶牛繁殖性能產生不良的影響。本試驗中等或中等稍低蛋白質水平日糧飼喂效果顯著，表明采用控制日糧蛋白質水平的營養(yǎng)調控技術，可以提高性控精液人工授精的受胎率。

3.6 子宮凈化處理措施的有效性，可以克服性控精液只在育成牛上應用效果較好而經產牛使用效果不佳的弊端; 同期發(fā)情對性控精液情期受胎率無不良影響，表明可以利用同期發(fā)情技術來實施性控精液人工授精，以加快實施的進度和縮短實施的時間。

［1］李同豹，曲永利.提高奶牛性控精液受胎率的措施研究［J］.中國奶牛，2011，15: 47-49.

［2］王建國，等.奶牛性控凍精應用研究［J］.中國奶牛，2009，1: 29-30.

［3］羅明久，尚壽云，等.奶牛性控凍精人工授精影響因素研究［J］.中國獸醫(yī)學報.2010，4: 535-539.