侯吉鵬

摘要：目的：建立化妝品中鄰苯二甲酸酯類化合物檢測的方法學驗證資料。方法：采用C18色譜柱250mm×4.6mm，5μm色譜柱，檢測波長為280nm，流速為1.0ml/min，柱溫為25℃，流動相：A相為甲醇B相為水進行梯度洗脫，檢測器為紫外檢測器、二極管陣列檢測器。結果：在選定色譜條件下，雜質(zhì)峰與各主藥峰完全分離，在一定范圍內(nèi)線性關系良好，鄰苯二甲酸酯類化合物平均回收率高。結論：本法簡便、準確，專屬性好，可用于化妝品中鄰苯二甲酸酯類化合物的含量測定。

關鍵詞：鄰苯二甲酸酯類化合物方法學驗證

《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）中對化妝品中鄰苯二甲酸酯類化合物的使用要求，具體如下：鄰苯二甲酸二甲酯，原料標準見于《國際化妝品原料標準中文名稱目錄》3345號；鄰苯二甲酸二乙酯，原料標準見于《國際化妝品原料標準中文名稱目錄》3084號；鄰苯二甲酸二正丁酯，規(guī)定化妝品禁用組分見于《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）表2（1）411號，原料標準見于《國際化妝品原料標準中文名稱目錄》2985號；鄰苯二甲酸二正戊酯，規(guī)定化妝品禁用組分見于《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）表2（1）15號；鄰苯二甲酸丁基芐酯，規(guī)定化妝品禁用組分見于《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）表2（1）281號，原料標準見于《國際化妝品原料標準中文名稱目錄》1265號；鄰苯二甲酸雙（2-乙基己基）酯，規(guī)定化妝品禁用組分見于《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》（2007年版）表2（1）289號，原料標準見于《國際化妝品原料標準中文名稱目錄》3076號。本試驗采用高效液相色譜法對化妝品中去屑劑的含量進行方法學驗證。

1 儀器材料

LC-2010AHT高效液相色譜儀、Waterse2695高效液相色譜儀；超聲波清洗器；高速離心機；天平：BS210S電子天平為BT25S電子天平；對照品：鄰苯二甲酸二甲酯（DMP），鄰苯二甲酸二乙酯(DEP)，鄰苯二甲酸二正丁酯(DBP），鄰苯二甲酸二正戊酯(DAP），鄰苯二甲酸丁基芐酯(BBP），鄰苯二甲酸二環(huán)己酯(DCHP)，鄰苯二甲酸雙（2-乙基己基）酯(DEHP)，均來自德國Dr.Ehrenstorfer公司；甲醇、乙腈為色譜純。

2 色譜條件

檢測器：紫外檢測器、二極管陣列檢測器；檢測波長：280nm。色譜柱：C18色譜柱250mm×4.6mm，5μm。流速：1.0 ml/min。柱溫：25℃。流動相：A相：甲醇；B相：水梯度洗脫，洗脫程序見下表1。

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3 方法學驗證內(nèi)容

3.1 混合標準溶液的制備 分別準確稱取鄰苯二甲酸二甲酯0.0949g 、鄰苯二甲酸二乙酯0.1029g、鄰苯二甲酸二正丁酯0.0959、鄰苯二甲酸二正戊酯0.0959、鄰苯二甲酸丁基芐酯0.0996 、鄰苯二甲酸二環(huán)己酯0.1029、鄰苯二甲酸雙二異辛酯0.1010、鄰苯二甲酸二正辛酯0.1072 ，至100ml容量瓶中，加甲醇，振搖，溶解，使完全溶解后定容至刻度。

3.2 系統(tǒng)適用性試驗 取標準曲線中濃度為0.1mg/ml的溶液，按上述色譜條件進行測定，理論塔板數(shù)如表2。結果各組分峰形良好，分離度均符合要求。

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3.3 線性關系考察 精密量取混合標準溶液0ml、1.00ml、2.00ml、4.00ml、6.00ml、8.00ml、10.00ml，分別置于10ml具塞比色管中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。在上述色譜條件下，分別取5μl注入液相色譜儀，記錄色譜峰面積，并繪制標準曲線。

4 供試品溶液的制備及檢測

4.1 取樣 刮去表面層后，取出所需樣品，立即封閉容器。

4.2 溶液的配制 準確稱取樣品0.5g于50ml具塞比色管中，加入乙腈：甲醇=95：5的混合溶液至刻度，振搖，常溫超聲提取40min，離心，取上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，濾液備用。

4.3 溶液的檢測 精密量取上述溶液5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按標準曲線法以峰面積計算，即得。

由結果得，樣品中未檢測出去屑劑。

5 回收率試驗

準確稱取樣品0.5g六份，分別置于50ml具塞比色管中，精密加入混合標準溶液10ml、10ml、20ml、20ml、50ml、50ml，加入乙腈：甲醇=95：5的混合溶液至刻度，振搖，常溫超聲提取40min，離心，取上清液經(jīng)0.45μm濾膜過濾，濾液備用。精密量取上述溶液各5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按標準曲線法以峰面積計算，即得。結果表明該方法回收率良好。

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6 精密度試驗

取上述回收率中含DEP為716.7μg/ml的溶液連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結果顯示DMP的RSD為0.8%，DEP的RSD為0.9%，BBP的RSD為1.9%，DAP的RSD為0.8%，DBP的RSD為1.6%，DCHP的RSD為1.9%，DEHP的RSD為1.1%，DOP的RSD為0.6%。結果表明該方法精密度良好。

7 溶液穩(wěn)定性試驗

取上述回收率中含DEP716.7μg/ml的溶液，在室溫下放置12h，在0h、2h、4h、8h、12h按照測定方法分別測定，結果如下表，結果表明溶液在12小時內(nèi)穩(wěn)定。

8 定量限和檢出限試驗

取上述回收率中含DEP102.4μg/ml的溶液，逐級稀釋，照上述方法測定，當色譜峰高是基線的三倍時，可得DMP檢出限為：0.5ng，檢出濃度為1μg/g，DEP檢出限為：0.5ng，檢出濃度為1μg/g，BBP檢出限為：3ng，檢出濃度為5μg/g，DBP檢出限為：3ng，檢出濃度為5μg/g， DAP檢出限為：38ng，檢出濃度為76μg/g，DCHP檢出限為：40ng，檢出濃度為80μg/g，DEHP檢出限為：5ng，檢出濃度為10μg/g，DOP檢出限為：5ng，檢出濃度為10μg/g，由此可得DMP定量限為：2ng，最低濃度為4μg/g，DEP定量限為：2ng，最低濃度為4μg/g，BBP定量限為：10ng，最低濃度為20μg/g，DBP定量限為：10ng，最低濃度為20μg/g，DAP定量限為：127ng，最低濃度為245μg/g，DCHP定量限為：133ng，最低濃度為267μg/g，DEH定量限為：17ng，最低濃度為33μg/g，DOPMPD定量限為：17ng，最低濃度為33μg/g。

參考文獻：

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