郭芙蓮 王秀霞 周媛媛 于會豐

（漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河 462002）

木瓜黃精膏對衰老模型小鼠體內(nèi)抗氧化的作用

郭芙蓮 王秀霞 周媛媛 于會豐

（漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 漯河 462002）

目的 探討木瓜黃精膏（PRO）對衰老模型小鼠組織勻漿中MDA的含量及SOD活性的影響。方法 采用D-半乳糖注射造成衰老模型，同時給予不同劑量的PRO。40日后檢測小鼠組織勻漿中SOD活性、MDA含量。結(jié)果 PRO可顯著提高小鼠組織勻漿中SOD的活性，顯著降低MDA含量，與衰老模型組相比較有顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)論 PRO具有較好的體內(nèi)抗氧化作用。

木瓜黃精膏；抗氧化；SOD；MDA

衰老的主要原因之一是機(jī)體在進(jìn)行氧化代謝的同時，不斷地產(chǎn)生自由基，過剩的自由基可作用于血液、細(xì)胞、組織等脂類物質(zhì)，使其變成脂質(zhì)過氧化物，這些過氧化物沉積在細(xì)胞膜上，使細(xì)胞膜喪失功能，造成細(xì)胞活力下降，組織器官功能衰退，機(jī)體進(jìn)入衰老狀態(tài)。衰老實(shí)際就是細(xì)胞凋亡的過程[1]，凋亡細(xì)胞內(nèi)的ROS生成增加，與此同時消除能力下降，而自由基能和DNA、脂質(zhì)體等發(fā)生反應(yīng)，從而引起DNA鏈斷裂和脂質(zhì)過氧化等[2]，線粒體的功能發(fā)生紊亂進(jìn)一步使ROS的生成增多，進(jìn)一步升高細(xì)胞內(nèi)的脂類過氧化水平而導(dǎo)致機(jī)體衰老，所以維持體內(nèi)自由基清除劑水平的或適當(dāng)水平抗氧化劑能夠推遲衰老、延長壽命。研究表明[3]，木瓜黃精膏（PRO）可以降低衰老模型小鼠血清MDA含量、提高SOD活性，本實(shí)驗進(jìn)一步觀察PRO對衰老模型小鼠組織勻漿MDA含量及SOD活性的影響，進(jìn)一步探討其抗氧化作用，為解決一些老年性疾病及衰老問題提供參考?，F(xiàn)報道如下。

表1 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的MDA含量的影響（nmol/mg，n=10，）

表1 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的MDA含量的影響（nmol/mg，n=10，）

*P＜0.05；**P＜0.01，與模型對照組比較

組別腦勻漿心勻漿肝勻漿腎勻漿空白對照13.244±0.67215.655±1.2045.144±0.3702.439±0.215模型對照15.292±0.34815.663±0.3346.889±0.4012.754±0.135 PRO小劑量12.945±1.08215.104±0.5454.896±0.401**2.308±0.137 PRO中劑量11.466±0.675**15.724±0.2954.581±0.137**2.195±0.093* PRO大劑量9.812±0. 184**14.291±0.099*3.365±0.217**1.716±0.109**

表2 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的SOD活性的影響（nmol/mg，n=10，）

表2 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿中的SOD活性的影響（nmol/mg，n=10，）

*P＜0.05，**P＜0.01，與模型對照組比較

組別腦勻漿心勻漿肝勻漿腎勻漿空白對照47.699±2.57439.667±2.00941.841±1.28151. 645±0.829模型對照42. 039±0.86336.528±1.38438.404±0.80949.319±0.568 PRO小劑量52. 071±0.987*43.224±1.41549.326±3.086 51.383±1.175* PRO中劑量64. 900±1.131**48 999±2.877**61.079±1.859**60.359±1.157* PRO大劑量72. 562±1.116**59. 788±1.493**67.303±2.270**67.631±0.357**

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗動物

清潔級昆明種小白鼠50只，體質(zhì)量（23±2）g，雌雄各半，購自鄭州大學(xué)實(shí)驗動物中心。

1.2 中藥及制備

所有的中藥均從鄭州藥材公司獲得，由漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校生藥教研室鑒定。將木瓜、黃精、大棗、荷葉等中藥按照比例委托漯河市中醫(yī)院制劑室制備，將制備好的藥膏放于生理鹽水中制成混懸液，分裝成3份，將生藥濃度分別濃縮為5g/mL、3g/mL、2.5g/mL。把配置好的藥液經(jīng)過高壓滅菌后放置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要試劑

D-半乳糖（上海試劑二廠），MDA試劑盒、SOD試劑盒（南京建成生物工程研究所），其余試劑都為國產(chǎn)分析純。

1.4 儀器

721-分光光度計（上海第三分析儀器廠），TGL240B離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品，常溫冰箱（BCD-312KA 新鄉(xiāng)），BL3100型（精確度0.1 g）和BP221S型（精確度0.1 mg）電子天平，移液器（GILSON 法國），超純水儀（Milli-Qacademic 美國）。

1.5 實(shí)驗方法

1.5.1 分組及給藥

昆明種小鼠，置于室溫（22±2）℃的動物房中自由進(jìn)食水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后將小鼠隨機(jī)分成5組，即空白組、模型組、PRO大、中、小劑量組，每組10只，雌雄各半?？瞻捉M頸后皮下注射0.5mL生理鹽水。其他各組每只皮下注射5%D-半乳糖0.5mL，每日1次，連用30d，造出衰老模型[4]。造模成功之后，空白對照組和模型對照組每只灌服等容積生理鹽水0.5mL；PRO大、中、小劑量組分別按30g/（kg· d）、15g/（kg·d）、7.5g/（kg·d）劑量灌服中藥；連續(xù)給藥40日。

1.5.2 標(biāo)本制備及檢測

40日后處死小白鼠，取腦、心、肝、腎，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，以上器官的組織各取0.2 g與生理鹽水按照1∶9制成10 g/100 mL勻漿，4000 r/min取上清待測，SOD、MDA含量的測定嚴(yán)格按照試劑盒標(biāo)注方法進(jìn)行各種試劑的配制，其步驟嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行，應(yīng)用分光光度儀0.5cm光徑，550nm，運(yùn)用分光光度儀比色的方法對各管吸光度值進(jìn)行檢測。

1.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析

采用Excel 2003錄入和管理數(shù)據(jù)。 數(shù)據(jù)資料用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，用SPSS 10.0軟件統(tǒng)計分析，實(shí)驗結(jié)果用χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿MDA的影響。模型對照組與空白對照組比較，小鼠組織勻漿中MDA含量均顯著升高，造模成功；而PRO大、中劑量組小鼠組織勻漿中MDA含量顯著降低，與衰老模型組相比有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01），表明PRO可以有效地減少小鼠體內(nèi)MDA的含量，并且有一定的量效關(guān)系，結(jié)果見表1。

2.2 PRO對衰老模型小鼠組織勻漿SOD的影響。模型對照組與空白對照組比較，小鼠組織勻漿中SOD含量均減少，造模成功；各劑量組小鼠組織勻漿中SOD活性均顯著升高（P＜0.05或P＜0.01），提示PRO可以提高小鼠組織勻漿中SOD活性，大劑量組尤為明顯（結(jié)果見表2）。

3 討 論

氧自由基是一類可與生物膜脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、酶、DNA等重要生物大分子相互作用，并引起機(jī)體損傷的物質(zhì)。過量的自由基會引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生一系列疾病，如：動脈硬化、糖尿病、風(fēng)濕病、心血管及大腦的局部缺血性損傷等。人體的絕大部分生理作用都需要氧氣的參與，生物學(xué)上稱“氧化還原反應(yīng)”，除了正常的氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生活性氧外，其他如環(huán)境污染、紫外線等外界刺激，也可導(dǎo)致體內(nèi)氧自由基過剩。自由基的氧化作用能破壞細(xì)胞中的遺傳基因，損害免疫功能。自由基的不斷氧化是機(jī)體衰老和發(fā)生眾多疾病的重大原因。因此，對抗自由基的氧化作用，就成為延緩衰老、改善亞健康的重要方法。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一種生命體內(nèi)的活性物質(zhì)，它能消除生物體在新陳代謝過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)[5]。氧自由基清除劑SOD能夠使有毒的O2-和H2O2經(jīng)過歧化和還原后得到清除，從而阻止它們引起自由基的一系列鏈鎖反應(yīng)而降低代謝產(chǎn)物MDA的生成，所以，SOD活性的大小能夠作為機(jī)體抵抗衰老的一項非常重要的指標(biāo)，也可將MDA作為抗氧化、抗衰老的另一項指標(biāo)。還有研究表明，木瓜能夠清除超氧陰離子自由基、1，1-二苯基-2-苦肼基自由基（DPPH·）、羥自由基，并且木瓜的提取物對于小鼠血清中的MDA有抑制作用，同時增強(qiáng)SOD活性[6]。光皮木瓜提取物中的多酚類物質(zhì)含量較高并有較強(qiáng)的抗氧化活性[7]。黃精的抗衰老作用機(jī)理[8]主要是促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成、減少細(xì)胞內(nèi)代謝廢物的含量、對抗自由基的損傷及相關(guān)酶的影響以及促進(jìn)能量生成等。馬鳳巧等[9]研究了黃精對衰老大鼠海馬組織SOD活性及MDA含量影響，結(jié)果顯示，明顯提高大鼠海馬組織中SOD活性，降低MDA含量。王玉勤[10]等研究表明PSP能明顯降低大鼠血清、骨骼肌MDA含量，提高大鼠血清內(nèi)源性SOD和GSH- Px的活性及骨骼肌內(nèi)源性SOD活性。另有研究表明，荷葉生物堿鹽高劑量組可有效降低肝臟組織勻漿及血清的MDA含量，同時降低肝臟的TG、TC指標(biāo)[11]。馮峰等研究表明荷葉提取物對DPPH有較強(qiáng)的清除作用，具有較強(qiáng)的抗氧化作用。由此得出結(jié)論，荷葉的提取物是一種很好的抗氧化劑，即使在較低的濃度和不需要特別精制的情況下也能夠顯示出比較強(qiáng)的抗氧化能力。上述研究都是單純地采用木瓜、荷葉或黃精等其中一種中藥對MDA或SOD以及抗氧化等作用的實(shí)驗研究。

本研究采用木瓜、黃精、荷葉、大棗四味中藥組方，木瓜養(yǎng)顏美容、健脾和胃；黃精益氣補(bǔ)脾、潤肺滋腎；荷葉抗衰老、解毒；大棗不僅營養(yǎng)豐富，而且藥用價值也很高，民間有“一日吃三棗，終生不顯老”的說法。四藥合用對衰老模型小鼠組織勻漿SOD、MDA的進(jìn)行測定，結(jié)果顯示，模型對照組與空白對照組比較，小鼠組織勻漿中SOD活性降低，MDA含量升高，說明造模成功。PRO大、中劑量組小鼠組織勻漿中SOD活性顯著升高，MDA含量明顯降低，尤其是肝勻漿與衰老模型組相比有顯著性差異（P＜0.01），PRO小劑量組小鼠肝勻漿中MDA含量顯著降低，與衰老模型組相比有顯著性差異（P＜0.01），實(shí)驗結(jié)果表明PRO可以降低小鼠組織中MDA的含量及增強(qiáng)SOD活性，這可能是PRO抗衰老的原因之一。

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R285.5

B

1671-8194（2013）22-0081-03

河南省教育廳自然科學(xué)項目（No：2009C310008）