曹 陽(yáng) 苗蘭英 隋 楠 田振國(guó)

（1 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，沈陽(yáng)110032；2 遼寧省肛腸醫(yī)院，沈陽(yáng)110001）

結(jié)直腸癌是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病，且其發(fā)病率在我國(guó)惡性腫瘤中呈穩(wěn)固上升趨勢(shì)，現(xiàn)已成為第三大常見(jiàn)惡性腫瘤，且有年輕化的趨勢(shì)［1－2］。結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌是結(jié)腸炎患者的重要死亡原因，結(jié)腸炎癌變?nèi)Q于部位、病程長(zhǎng)短和程度，所以研究結(jié)腸炎向結(jié)腸癌轉(zhuǎn)化的機(jī)制就尤為重要［3］。本實(shí)驗(yàn)堆前人報(bào)道的復(fù)制結(jié)腸癌模型方法進(jìn)行改良，對(duì)結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸癌模型進(jìn)行研究，以期為研究提供動(dòng)物模型。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組 取ICR小鼠80只，雌雄各半。隨機(jī)分為4組，正常對(duì)照組、右旋葡聚糖苷鈉 （DSS）組、右旋葡聚糖苷鈉 （DSS）聯(lián)合低濃度1，2－二甲肼 （DMH）組和右旋葡聚糖苷鈉 （DSS）聯(lián)合高濃度1，2－二甲肼 （DMH）組。

1.2 試劑 1，2－二甲肼 （DMH）為一種強(qiáng)烈致癌劑，購(gòu)于美國(guó)Sigma公司；右旋葡聚糖苷鈉 （DSS）為一種強(qiáng)烈致炎劑，購(gòu)于美國(guó)ICN公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物給藥及模型復(fù)制 除正常對(duì)照組外，其余各組給予含20g／L右旋葡聚糖苷鈉 （DSS）的飲用水，直到處死。第二周開(kāi)始，給予DSS＋低濃度DMH組腹腔注射20mg／kg，每天一次，連續(xù)三天；DSS＋高濃度DMH組腹腔注射40mg／kg，每天一次，連續(xù)三天。

1.3.2 指標(biāo)評(píng)價(jià) 21周后，從肛門向上截取結(jié)腸8cm，觀察形成腫瘤數(shù)目，并計(jì)算成瘤率。HE常規(guī)染色：組織經(jīng)固定、脫水、透明浸蠟、包埋、切片、脫蠟染色、脫水、透明、封固等步驟，在顯微鏡下觀察，并計(jì)算異常隱窩灶 （ACF）。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件處理，結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較使用F檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 四神丸對(duì)成瘤率和腫瘤數(shù)目的影響 經(jīng)過(guò)21周，DSS＋低濃度DMH組和DSS＋高濃度DMH組小鼠在結(jié)腸炎的基礎(chǔ)上大多形成了結(jié)腸癌，成瘤率分別為85%和100%，且腫瘤數(shù)目不止一個(gè)，小腸和其他器官未見(jiàn)腫瘤發(fā)生。而對(duì)照組和DSS組成瘤率均為0，與DSS＋低濃度DMH組和DSS＋高濃度DMH組區(qū)別明顯（表1）。

表1 成瘤率的區(qū)別 （%）

2.2 各組HE染色的區(qū)別 各組HE染色后后，鏡下出現(xiàn)不典型增生，腺體排列紊亂即為ACF，從圖1中可以看出對(duì)照組和DSS組小鼠結(jié)腸組織幾乎沒(méi)有ACF，而DSS＋低濃度DMH組和DSS＋高濃度DMH組則可見(jiàn)大量的ACF結(jié)構(gòu)。

圖1 各組結(jié)腸組織HE染色情況圖中A對(duì)照組B為DSS組C為DSS＋低濃度DMH組D為DSS＋高濃度DMH組

鏡下分析，DSS＋低濃度DMH組和DSS＋高濃度DMH組ACF個(gè)數(shù)與DSS組有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)區(qū)別 （P＜0.01），且DSS＋低濃度DMH組和DSS＋高濃度DMH組鏡下ACF個(gè)數(shù)也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），三組相比以DSS＋高濃度DMH組鏡下ACF個(gè)數(shù)為最多，如表2。

表2 各組結(jié)腸組織ACF值比較 （n，%）

3 討論

實(shí)驗(yàn)證明，腹腔注射DMH （20，40mg／kg）1wk后，在飲水中添加20g／L DSS連續(xù)7d可于20wk內(nèi)，在小鼠體內(nèi)誘導(dǎo)出100%結(jié)腸腺癌。這比單獨(dú)使用DMH誘發(fā)形成結(jié)腸癌的時(shí)間縮短將近一半。在造模的第4、第9周，我們通過(guò)肉眼和病理切片觀察誘發(fā)各組小鼠腸道出現(xiàn)不同程度的炎癥變化，成功地模擬出了從結(jié)腸炎向結(jié)腸癌轉(zhuǎn)變的過(guò)程。盡管3個(gè)劑量的DMH與DSS合用均能誘發(fā)結(jié)腸癌的發(fā)生，但是由于20mg／kg DMH劑量相對(duì)較小，癌癥程度較輕，而大劑量DMH40mg／kg能可靠成功誘導(dǎo)出炎癥相關(guān)性結(jié)腸癌。炎癥相關(guān)的結(jié)腸癌模型的初步建立，將給未來(lái)的結(jié)腸癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制研究，結(jié)腸癌藥物的研發(fā)，結(jié)腸癌的預(yù)防帶來(lái)重要影響。

炎癥反復(fù)發(fā)作是腫瘤形成的重要因素之一，目前有明確的證據(jù)表明，腸道炎癥的反復(fù)發(fā)作明顯地增加了腺癌的發(fā)生率［4］。下一步我們將在以上模型研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索阻斷結(jié)腸炎向結(jié)腸癌發(fā)展的可能。

［1］張醇，楊雪，范霞，等.吳茱萸堿對(duì)人結(jié)腸癌lovo細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2010，23（8）：866－870.

［2］劉端勇，管詠梅，趙海梅，等.四神丸不同途徑給藥對(duì)潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞周期及脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的改善作用［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2011，26（5）：1168－1171.

［3］段瓊紅，呂美霞，盧祖洵，等.大腸癌中IGF－2蛋白的表達(dá)及相關(guān)性研究［J］.世界華人消化雜志，2006，（14）：83－86.

［4］Ricci－Vitian L，Lombardi DG，Pilozzi E，et al.Identication and expansion of human colon－center－initiating cells［J］.Nature，2007，445（7123）：111－115.