泰山大棗解酒口服液的研制及功效探究

許興超 劉春希 許 靜 張曉薇 盧憲齊 楊志孝 張敬軍

(1.泰山醫(yī)學(xué)院，山東 泰安 271000;2.棗莊市中醫(yī)醫(yī)院，山東 棗莊 277100;3.萊蕪市中醫(yī)醫(yī)院，山東萊蕪 271100)

近年來，由于社交的需要和生活壓力的增大，酗酒和酒精中毒已經(jīng)成為我國的公共衛(wèi)生問題，因飲酒引起的頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、記憶力減退、注意力不集中，導(dǎo)致意外事故發(fā)生率增加，嚴(yán)重的甚至導(dǎo)致急性死亡的發(fā)生。在我國應(yīng)用中草藥解酒具有悠久的歷史，但是利用大棗為主料、以枳椇子［1］、茯苓［2］、馬齒莧［3］、葛根［4］、蜂蜜［5］為輔料配制一種天然的解酒口服液，國內(nèi)外未見研究報(bào)道。泰山大棗是泰山三大特產(chǎn)之一，其醫(yī)療價(jià)值和保健功效居群果之冠，醫(yī)學(xué)界稱之為天然維生素丸。泰山大棗在1982年被列為國家保健棗。大棗含有黃酮類、多糖類、皂苷類、多種維生素和礦物質(zhì)等活性物質(zhì)，具有解酒毒、護(hù)肝、抗脂質(zhì)過氧化等多方面功效［6］。而且枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根、蜂蜜均具有較好的解酒護(hù)肝作用。本項(xiàng)研究各成分用材均為泰山當(dāng)?shù)剡x材，且經(jīng)藥學(xué)專家鑒定，無毒副作用，是一種純天然綠色保健品，具有巨大的開發(fā)前景。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 昆明小鼠，體重量(302)g，雌雄各半，購于濟(jì)南動物研究所。

1.2 材料與試劑 泰山大棗，采自泰山山麓。枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根購于泰安永春堂藥店。蜂蜜，購于泰安天外村養(yǎng)蜂基地。主要試劑:試劑Ⅰ(由一份NAD溶液和5份pH=9的甘氨酸-NaOH緩沖液組成);乙醇、丁酮(均為色譜純，上海試劑一廠)。兩瓶白酒(泰山特曲38度，泰山酒業(yè)集團(tuán)股份有限公司)。

1.3 儀器與設(shè)備 賽多利斯BSA822電子天平，賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司;FW100高速萬能粉碎機(jī)，天津泰斯特儀器有限公司;超聲波提取設(shè)備，濟(jì)寧市奧波超聲電氣有限公司;DHG-9240型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科技有限公司;電腦程控壓力蒸汽滅菌鍋，長春市百奧生物儀器有限公司;紫外分光光度儀，TU-1901 HP-5890 SeriesⅡ氣相色譜儀，安捷倫公司(Agilent);FID檢測器，福州眾科自動化科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 泰山大棗解酒口服液制備 根據(jù)原料藥性的不同，大棗采用浸提的方法;枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根(查閱大量文獻(xiàn)，以上各種輔料較其他解酒原料均具有較好的解酒效果)采用超聲提取法;蜂蜜可直接采用。大棗提取液的制備［7］:稱取大棗250 g，大棗果實(shí)(85℃烘干、粉碎)，2倍重量蒸餾水冷浸提12 h，過濾，1次提取濾液，濾渣用再蒸餾水95℃熱提取1 h，過濾，2次提取濾液，合并兩次提取濾液，各濃縮配制成 0.1 g/ml、0.2 g/ml、0.3 g/ml大棗提取液。枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根混合液的制備［8］:取枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根藥材各250 g，于40℃干燥粉碎，2倍重量蒸餾水采用超聲提取法，控制溫度65℃提取二次，合并濾液，濃縮配制成0.1 g/ml、0.2 g/ml、0.3 g/ml四藥材混合液。蜂蜜可分3 ml、6 ml、9 ml三個水平。見表 1。

表1 泰山大棗解酒口服液配方及濃度

1.4.2 小鼠醉酒試驗(yàn)驗(yàn)證泰山大棗解酒口服液成分最佳配比 將大棗提取液、四藥材混合液和蜂蜜利用正交法［9］L9(34)，三因素、三水平梯度得9種復(fù)方藥液。取昆明小鼠90只雌雄各半，隨機(jī)分為9組，實(shí)驗(yàn)序號為1～9，進(jìn)行小鼠醉酒試驗(yàn)。將配好的9種復(fù)方藥物按小鼠體重0.1 ml/10g［10］按組別給小鼠灌胃，30 min后再按0.1 ml/10g給小鼠灌胃白酒。通過小鼠醉酒試驗(yàn)計(jì)數(shù)每組醉酒數(shù)量、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)的平均醉酒時(shí)間、平均醒酒時(shí)間等指標(biāo)來驗(yàn)證各組分最佳配比以達(dá)到最佳解酒效果。

1.4.3 復(fù)方藥液在酒前服用和酒后服用實(shí)驗(yàn) 確定好配方最佳用口服液量后，進(jìn)行給口服液及酒先后實(shí)驗(yàn)。取60只小鼠雌雄各半，隨機(jī)分為6組，分別為空白清水組、先水后酒組、先口服液后酒組、口服液酒合用組、先酒后水組、先酒后口服液組，兩次飲用時(shí)間間隔為30min。ADH在波長340 nm處有一強(qiáng)吸收峰［11］，通過測定340nm波長處ADH的吸光度，可得知解酒效果。

第二次灌胃30 min后處死小鼠，摘眼球取血0.5 ml［12］，置于 1 ml離心管中 4000 r/s 離心 8 min。取50 μl血清入比色皿，同時(shí)加入1 ml試劑Ⅰ以及20 μl乙醇，對照比色皿中加入 50 μl蒸餾水，1 ml試劑Ⅰ以及20 μl乙醇。340 nm波長下，每只樣品5分鐘內(nèi)每一分鐘讀取吸光度，求平均吸光度，得6組吸光度的數(shù)據(jù)，繪制折線圖，比較得最佳用法［13］。

1.4.4 研究給酒前梯度時(shí)間給解酒口服液對解酒效果的影響 確定酒前服用解酒口服液為最佳解酒用法后，給酒前梯度時(shí)間給復(fù)方藥液，利用頂空氣相色譜法［14］測定血液中乙醇含量的指標(biāo)來確定最佳用藥時(shí)間。

實(shí)驗(yàn)取30只小鼠，隨機(jī)分為3組。小鼠灌胃解酒口服液0.1 ml/10 g后分別15 min、30 min、45 min后灌胃白酒0.1 ml/10 g，然后30 min小鼠摘眼球取血，加入適量肝素為待測血液。各取乙醇、丁酮100 μl，置于100 ml容量瓶中，新沸蒸餾水稀釋至刻度，得供試品溶液及內(nèi)標(biāo)溶液。取0.1 ml空白小鼠全血，分別加入0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 ml乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，均加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 ml，分別滴加重蒸餾水至頂空瓶刻度，以乙醇與內(nèi)標(biāo)峰面積之比Y與濃度X進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得回歸方程:Y=0.1232X+3.1268×10-3，r=0.9994，線性范圍為1.58～15.79 mg/ml。取0.1 ml經(jīng)肝素處理的待測小鼠全血至頂部具塞的頂空管中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1.0 ml，滴加重蒸餾水至頂空瓶刻度，于80℃水浴中加熱20 min。用微量注射器抽取100 ul頂端空氣進(jìn)樣測定［15］。代入回歸方程求得每組10只小鼠血液中乙醇含量，對照3組實(shí)驗(yàn)小鼠血液中乙醇含量，確定酒前飲用解酒口服液最佳時(shí)間。

2 結(jié)果

2.1 分別將0.1、0.2、0.3 g/ml的大棗提取液、四藥材混合液及蜂蜜按正交試驗(yàn)L9(34)配得9種復(fù)方藥液。然后進(jìn)行小鼠醉酒試驗(yàn)，計(jì)數(shù)每組醉酒數(shù)量、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)平均醉酒時(shí)間、平均醒酒時(shí)間，通過正交試驗(yàn)得出均值和極差［16］。從極差分析可以看出，試驗(yàn)所設(shè)三個因素對醉酒小鼠解酒的影響順序是:1＞3＞2，即大棗提取液占主要解酒作用。從均值看，以大棗提取液:四藥材混合液:蜂蜜為100 ml(0.2 g/ml)、100 ml(0.2 g/ml)、9 ml組合最佳，見表1。

表2 三種組分的正交試驗(yàn)L9(34)及9種復(fù)方藥液

2.2 進(jìn)行小鼠醉酒翻正試驗(yàn)，計(jì)數(shù)每組醉酒動物數(shù)、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)平均時(shí)間、平均醒酒時(shí)間等指標(biāo)也可進(jìn)一步證明以大棗提取液:四藥材混合液:蜂蜜為100ml(0.2g/ml)、100ml(0.2g/ml)、9ml配成的解酒口服液使小鼠醉酒時(shí)間延長，醒酒時(shí)間縮短。試驗(yàn)證明可達(dá)最佳解酒效果的組合為大棗提取液:四藥材混合液:蜂蜜為100ml(0.2g/ml):100ml(0.2g/ml):9ml，見表 2。

表3 小鼠醉酒試驗(yàn)指標(biāo)

2.3 乙醇代謝過程:乙醇+NDA+NADH+H++乙醛，測得ADH(乙醇脫氫酶)吸光度，即可反映ADH活性，ADH活性越高，乙醇代謝越快，解酒效果越好。將分好的6組小鼠分別設(shè)空白清水組、先水后酒組、先口服液后酒組、口服液酒合用組、先酒后水組、先酒后口服液組?？捎^察出先口服液后酒組，測得小鼠血液中ADH吸光度最高，在0.824左右，即ADH活性最高，乙醇代謝最快，解酒效果最佳，見圖1。

圖1 給口服液、酒先后對血液中ADH活性的影響

2.4 酒前15 min、30 min、45 min按小鼠體重0.1 ml/10g灌胃大棗解酒口服液，然后灌胃白酒0.1 ml/10g，30 min后取血。通過頂空氣相色譜法測血液中乙醇的含量，三組試驗(yàn)小鼠血液中乙醇分別在0.354 mg/ml、0.548 mg/ml、0.723 mg/ml左右。所以可知酒前30 min灌胃大棗解酒口服液的血液中乙醇含量最低，解酒效果最佳，見圖2。

圖2 酒前梯度時(shí)間灌胃大棗解酒口服液血液中乙醇指標(biāo)的變化

3 討論

酒文化是一種特殊的文化形式，在傳統(tǒng)的中國文化中有其獨(dú)特的地位。但若過量飲酒，酒精及其代謝產(chǎn)物對人體造成一定的傷害，引起多種疾病及不良的社會行為。隨著生活水平的提高，人們也越來越關(guān)注自身的健康，所以解酒產(chǎn)品備受關(guān)注。我國中草藥解酒藥物利用已有很長的歷史，積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)，為此項(xiàng)試驗(yàn)研究提供了豐富依據(jù)。本項(xiàng)試驗(yàn)先通過正交試驗(yàn)和小鼠醉酒試驗(yàn)確定各組分最佳配比;然后進(jìn)行酒前、酒后灌口服液，測定ADH活性，確定最佳用法;最后進(jìn)行梯度時(shí)間試驗(yàn)，確定最佳用口服液時(shí)間。

本課題通過小鼠醉酒試驗(yàn)，得每組醉酒數(shù)量、出現(xiàn)醉酒狀態(tài)平均醉酒時(shí)間、平均醒酒時(shí)間，通過正交試驗(yàn)得出均值和極差。研究顯示大棗提取液、四藥材混合液、蜂蜜為100 ml(0.2g/ml)、100 ml(0.2g/ml)、9 ml組合配方，可延長小鼠出現(xiàn)醉酒狀態(tài)時(shí)間，縮短醒酒時(shí)間，為最佳配方。因?yàn)榫凭谌梭w中代謝過程為乙醇經(jīng)乙醇脫氫酶脫氫為乙醛，然后乙醛脫氫經(jīng)乙醛脫氫酶脫氫為乙酸。所以將酒前服用、酒后服用口服液以及空白組、對照組小鼠，用紫外分光法測得血液中ADH(乙醇脫氫酶)的活性，即可反映得知乙醇在血液中的代謝情況。研究表明，先口服液后酒組，ADH吸光度最高，可知乙醇代謝最快，此用法可增強(qiáng)肝組織中ADH的活性，提示乙醇可在體內(nèi)快速代謝而發(fā)揮一定的高效解酒作用。實(shí)驗(yàn)用頂空氣相色譜法測酒前梯度時(shí)間灌胃大棗解酒口服液小鼠血液中乙醇含量。得知酒前30min飲用泰山大棗解酒口服液后飲酒，可加速血液中乙醇的分解，降低血液中乙醇的含量，可快速有效的解酒，研究中未見明顯不良反應(yīng)。

研究結(jié)果表明酒前30 min服用該解酒口服液可達(dá)到最佳解酒效果。而且產(chǎn)品以泰山大棗為主料，泰山大棗享有“王母棗”、“昆侖棗”、“仙人棗”等美名，更容易讓使用者接受和宣傳。因此以泰山大棗為主料，以枳椇子、茯苓、馬齒莧、葛根、蜂蜜等藥食同源物質(zhì)為輔料配制一種天然的解酒口服液，具有較好的解酒效果，無毒副作用，有較好的市場和發(fā)展前景。

［1］ 呂國紅，鐘曉凌，李良.枳椇子飲料解酒效果的研究［J］.飲料工業(yè)，2012，7(1):10-12.

［2］ 王會肖，劉繼鋒，白玉.葛花茯苓片的解酒作用及其機(jī)制［J］.實(shí)驗(yàn)動物科學(xué)，2009，6(1):15-17.

［3］ Cheng-Jie Chen，Wan-Yin Wang，Xiao-Li Wang.Anti-hypoxic activity of theethanol extract from Portulac a oleracea in mice.Journal of Ethnobiology.2009，15:22-25.

［4］ 張建夫，陳亞紅，黃香麗.葛根與葛花解酒的功效研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，35(10):17505-17506.

［5］ 楊建珍，王浩.蜂膠保健食品中總黃酮測定方法研究［J］.中國自然醫(yī)學(xué)雜志，2007，4(6):349.

［6］ 鄒禮根，柳愛春，劉超.拐棗水提取液解酒作用實(shí)驗(yàn)研究［J］.杭州農(nóng)業(yè)與科技，2009，20(1):30-32.

［7］ 邰文泉，白玉霞.蒙藥廣棗的提取工藝和化學(xué)成分研究新進(jìn)展［J］.內(nèi)蒙古民族大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2006，18(1):65-66.

［8］ 秦梅頌.超聲提取技術(shù)在中藥中的研究進(jìn)展［J］.安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，13(2):54-55

［9］ 張淑玲，沙玫，陸軍.正交試驗(yàn)法優(yōu)選和丹舒膠囊提取工藝［J］. 廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，20(1):41-44.

［10］ 楊柱，田維毅，王文佳.5首解酒方對小鼠醉酒模型解酒效應(yīng)的比較研究［J］. 中成藥，2010，28(11):1969-1972.

［11］ 毛跟年，李麗維，齊鳳.乙醇脫氫酶對小鼠抗醉解酒作用的研究［J］.陜西科技大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2009，4(1):63-65.

［12］ 周曉春，陳龍，劉紹晨.200只大鼠內(nèi)眥取血的操作體會［J］.承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，4(1):52-53.

［13］ 張曉霞，毛跟年，張?jiān)汽?乙醇脫氫酶應(yīng)用研究現(xiàn)狀［J］.動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2007，12(2):92-95.

［14］ 周枝鳳，陳凌云，沈梅.自動頂空-氣相色譜-質(zhì)譜法測定血液中乙醇含量［J］.理化檢驗(yàn):化學(xué)分冊，2010，18(1):22-24.

［15］ 萬正楊，胡海蓉.血液中乙醇含量的頂空氣相色譜內(nèi)標(biāo)測定法［J］. 職業(yè)與健康，2009，23(6):596-597.

［16］ 陳慧芳，吳德玲，金傳山.正交設(shè)計(jì)優(yōu)選亳菊葉總黃酮提取工藝［J］. 安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，28(2):67-69.