藏藥秦皮接骨膠囊提取工藝研究

馬宏偉 田汝芳 李懷平

1.山東阿如拉藥物研究開發(fā)有限公司，山東濟(jì)南 250101；2.山東健康藥業(yè)有限公司，山東濟(jì)南 250022

秦皮接骨膠囊為藏藥骨科經(jīng)典驗(yàn)方，由秦皮、川西小黃菊、龍骨、川貝母等組成，主要功能活血散瘀、療傷接骨、止痛，用于跌打、筋骨扭傷、瘀血腫痛等癥，臨床療效確切[1]。由于現(xiàn)有膠囊劑為全藥粉入藥，衛(wèi)生學(xué)指標(biāo)難以控制，不適合工業(yè)化生產(chǎn)，且患者服藥量較大，因此，進(jìn)行技術(shù)革新，研發(fā)一種適合工業(yè)化生產(chǎn)的提取工藝，優(yōu)化秦皮接骨膠囊的制劑工藝具有重要意義。本文采用正交試驗(yàn)法，以秦皮中秦皮甲素和秦皮乙素總量，及川貝母中西貝母堿含量為評價指標(biāo)，考察了秦皮接骨膠囊的乙醇提取工藝?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 儀器與試藥

秦皮接骨膠囊處方藥材均由金訶藏藥股份有限公司提供，經(jīng)青海省藏醫(yī)院尼瑪鑒定，均為正品；秦皮甲素（中國食品藥品檢定研究院，110740-200510，供含量測定用）；秦皮乙素（中國食品藥品檢定研究院，110741-200707，供含量測定用）；西貝母堿（中國食品藥品檢定研究院，110767-200901，供含量測定用）；日立L-2100型高效液相色譜儀（日立公司）；UV-2450型紫外可見分光光度計(jì)（SHIMADZU）；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 （上海亞榮生化儀器廠）；KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；電熱套；電子天平。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

秦皮接骨膠囊由秦皮、川貝母、川西小黃菊和龍骨組成，其中秦皮、川貝母、川西小黃菊三味藥材有效成分均可溶于乙醇[2-4]。根據(jù)藏醫(yī)藥理論，秦皮在處方中起主要治療作用，有效成分主要為秦皮甲素和秦皮乙素，川貝母主要成分為西貝母堿，在處方中，川貝母起輔助治療作用，而對川西小黃菊的文獻(xiàn)報(bào)道較少。因此，采用正交試驗(yàn)法，以秦皮中秦皮甲素和秦皮乙素的總量，以及川貝母中西貝母堿的含量為考察指標(biāo)，考察上述3味藥材的乙醇提取工藝。

2.1 因素水平的測定

以加醇量、提取時間、提取次數(shù)、乙醇濃度為因素，因素水平見表1。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表

2.2 提取方法

按處方比例，取秦皮56.5 g，川西小黃菊40.0 g，川貝母40.0 g，共3味藥材，總計(jì)136.5 g，共9份，按照正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)條件進(jìn)行處理，提取液分別回收乙醇，濃縮至100 mL，備用。

2.3 秦皮甲素和秦皮乙素的HPLC測定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（80∶20）；流速：1 mL/min；檢測波長：334 nm；柱溫：室溫；理論板數(shù)按秦皮甲素峰計(jì)算應(yīng)不低于2000[5-6]。

2.3.2 對照品溶液的制備 取秦皮甲素對照品、秦皮乙素對照品各適量，加甲醇制成每毫升含秦皮甲素0.1 mg、秦皮乙素0.05 mg的溶液，即得。

2.3.3供試品溶液的制備 取上述“2.2”項(xiàng)下的備用濃縮液1 mL，加甲醇稀釋至25 mL，搖勻，即得。

2.3.4 測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)法計(jì)算，即得。

2.4 西貝母堿的測定方法

2.4.1 色譜條件 色譜柱：Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.05%三乙胺溶液（75∶25）；流速：1 mL/min；蒸發(fā)光散射檢測器；柱溫：室溫；漂移管溫度：40℃；理論板數(shù)按西貝母堿峰計(jì)算應(yīng)不低于5000[7-8]。

2.4.2 對照品溶液的制備 取西貝母堿對照品適量，加甲醇制成每毫升含西貝母堿0.1 mg的溶液，即得。

2.4.3 供試品溶液的制備 取上述“2.2”項(xiàng)下的備用濃縮液10 mL，水浴蒸至近干，加甲醇溶解，并稀釋至5 mL，搖勻，即得。

2.4.4 測定法 分別吸取對照品溶液與供試品溶液各10 μL注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對數(shù)方程計(jì)算，即得。

2.5 結(jié)果

以秦皮甲素和秦皮乙素的總量為其中一個考察指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)為0.7；以西貝母堿的總量為另一個考察指標(biāo)，權(quán)重系數(shù)為0.3，對每份樣品綜合評分。計(jì)算公式：綜合得分=（秦皮甲素與秦皮乙素總量/最大含量）×0.7×100+（西貝母堿總量/最大含量）×0.3×100。正交試驗(yàn)結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

由表2可知，極差最大的為B因素提取時間，四個因素綜合評分的影響排序是：B＞D＞C＞A。表3方差分析結(jié)果提示，B因素提取時間和D因素乙醇濃度對試驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響，結(jié)合表2中的極差分析，優(yōu)選B3和D2；A因素加醇量對試驗(yàn)結(jié)果影響最小，三個水平以A2最大，結(jié)合試驗(yàn)中藥材的吸液量，選擇A2；C因素提取次數(shù)的三個水平以C2最大，且C1與C2有一定差距，為避免有效成分丟失，優(yōu)選C2，因此，最佳提取工藝條件為A2B3C2D2，即加70%乙醇提取2次，每次加8倍量乙醇，提取3 h。

表3 方差分析表

2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)

為驗(yàn)證最佳提取工藝的穩(wěn)定性，取秦皮56.5 g，川西小黃菊 40.0 g，川貝母40.0 g，共 3味藥材總計(jì) 136.5 g，共3份，分別加70%乙醇提取2次，每次加8倍量乙醇，提取3 h，分別合并提取液，回收乙醇，并濃縮至100 mL，測定秦皮甲素和秦皮乙素總量以及西貝母堿的含量，結(jié)果見表4。可見經(jīng)正交試驗(yàn)優(yōu)選的最佳提取工藝穩(wěn)定，可行。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)

3 討論

秦皮接骨膠囊為藏藥經(jīng)典制劑，臨床療效確切。筆者根據(jù)處方中藥味所含成分的理化性質(zhì)，結(jié)合其在處方中發(fā)揮的作用，通過正交試驗(yàn)，優(yōu)選了處方中3味藥材的提取工藝。預(yù)試驗(yàn)提示，秦皮接骨膠囊中藥材出膏率普遍較低，因此，在正交試驗(yàn)中沒有選擇藥材出膏率作為考察指標(biāo)。驗(yàn)證試驗(yàn)提示，該正交試驗(yàn)優(yōu)選的提取工藝穩(wěn)定，提取后的乙醇可回收后重復(fù)使用，提取成本較低，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。該試驗(yàn)為秦皮接骨膠囊制備工藝的進(jìn)一步優(yōu)化提供了試驗(yàn)依據(jù)。

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