劉玉強(qiáng)， 才 謙， 賈天柱

(遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，遼寧大連116600)

中藥蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea(Thunb．)DC．或北蒼術(shù)Atractylodes chinensis(DC．)Koidz．的干燥根莖［1］。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有燥濕健脾，祛風(fēng)散寒，明目的功效［2］。蒼術(shù)中含有5%～9%的揮發(fā)油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔類(lèi)及少量的酚類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)成分組成。非揮發(fā)性成分主要有氨基酸、多炔類(lèi)化合物、倍半萜糖苷等水溶性成分以及少量糠醛［3-5］。因蒼術(shù)炮制后燥性降低，且健脾作用增強(qiáng)，故目前臨床應(yīng)用的蒼術(shù)多為麩炒蒼術(shù)［6-7］。有文獻(xiàn)報(bào)道，蒼術(shù)麩炒后包括揮發(fā)油在內(nèi)的化學(xué)成分會(huì)發(fā)生變化［8-10］，本實(shí)驗(yàn)為考察蒼術(shù)麩炒后倍半萜類(lèi)成分蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙和聚乙烯炔類(lèi)成分蒼術(shù)素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的變化，收集了全國(guó)17個(gè)地區(qū)的蒼術(shù)藥材或生蒼術(shù)片，并自行炮制得麩炒蒼術(shù)片，采用高效液相色譜法測(cè)定這些地區(qū)生熟蒼術(shù)片中以上成分，初步闡明麩炒對(duì)蒼術(shù)中倍半萜類(lèi)成分和聚乙烯炔類(lèi)成分的影響。

1 儀器、試劑與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100 Series高效液相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司);Tigerkin C18(5μm，4.6×250 mm)色譜柱 (大連思普精工有限公司)。KH-300P型超聲波清洗器 (昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。

1.2 試劑 乙腈 (色譜純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司);純凈水 (杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司)。

1.3 試藥與藥材 對(duì)照品蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙、蒼術(shù)素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯，均為自制，經(jīng)液相色譜用歸一化法測(cè)定，純度均大于98%。蒼術(shù)藥材從不同地區(qū)購(gòu)買(mǎi)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)植物教研室王冰教授鑒定為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodes lancea(Thunb．)DC．或北蒼術(shù) Atractylodes chinensis(DC．)Koidz．的根莖。麩炒品按照《中國(guó)藥典》2010年版麩炒方法自行炮制。

2 方法與結(jié)果

2.1 蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙的測(cè)定

2.1.1 色譜條件 Tigerkin C18色譜柱 (5μm，4.6 mm×250 mm);流動(dòng)相為乙腈－水(54∶46);柱溫25℃;體積流量1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm;進(jìn)樣量10μL。

2.1.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱(chēng)取蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

2.1.3 供試品溶液制備 取本品粉末 (過(guò)60目篩)約0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇溶液5 mL，稱(chēng)定質(zhì)量，放置一夜。次日超聲處理(功率250W，頻率50 kHz)30 min，放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，定容至10 mL棕色量瓶中，過(guò)0.45μm微孔濾膜即得。色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。

圖1 蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)照品HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatogram of atractylenolideⅢ

圖2 供試品HPLC圖Fig.2 HPLC chromatogram of sam p le

2.1.4 線性關(guān)系考察 精密吸取蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)照品溶液 (質(zhì)量濃度為 0.008 8 mg/mL)2.0、4.0、8.0、12.0、16.0、20.0μL注入高效液相色譜儀中，測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo) (X)，峰面積為縱坐標(biāo) (Y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y=1 737.7X－0.451 2，r=0.999 7，提示蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙進(jìn)樣量在0.017 6μg～0.176μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液 (產(chǎn)地:湖北英山)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)得蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙峰面積的RSD為2.7%，表明該方法精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣10μL，測(cè)得蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙色譜峰面積的RSD為2.2%，表明該方法的精密度良好。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品0.5 g(產(chǎn)地:湖北英山)，精密稱(chēng)定，共6份。按前述方法測(cè)定蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙，結(jié)果蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙的平均含有量為0.020%，RSD為2.0%，重復(fù)性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取本品 (產(chǎn)地湖北英山，蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙含有量為0.020%)0.25 g，共6份，加入質(zhì)量濃度為0.11 mg/mL的蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙對(duì)照品溶液0.5 mL，按前述方法制備和測(cè)定。測(cè)定結(jié)果提示:本方法回收率在96.8% ～104.7%之間，RSD為2.9%，符合有關(guān)規(guī)定。

2.1.9 樣品測(cè)定結(jié)果 分別測(cè)定了17個(gè)地區(qū)生蒼術(shù)片及自制的麩炒蒼術(shù)片中蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 生蒼術(shù)和麩炒蒼術(shù)中蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙、蒼術(shù)素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的測(cè)定結(jié)果Tab.1 Contents of atractylenolideⅢ，atractylodin and(4E，6E，12E)-tetradecatriene-8，10-diyne-1，3-diyl diacetate in crude slices and processed ones of Atractylodis Rhizoma

2.2 蒼術(shù)素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的測(cè)定

2.2.1 色譜條件 Tigerkin C18色譜柱 (5μm，4.6×250 mm);流動(dòng)相為乙腈－水 (72∶28);柱溫25℃;體積流量1 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng)340 nm;進(jìn)樣量10μL。

2.2.2 對(duì)照品溶液制備 分別精密稱(chēng)取蒼術(shù)素及(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯對(duì)照品適量，置棕色瓶中，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg、0.1 mg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 同2.1.3。色譜圖見(jiàn)圖3，圖4和圖5。

圖3 蒼術(shù)素對(duì)照品HPLC圖Fig.3 HPLC chromatogram of atractylodin

圖4 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯對(duì)照品HPLC圖Fig.4 HPLC chromatogram of(4E，6E，12E)-tetradecatriene-8，10-diyne-1，3-diyl diacetate

圖5 供試品HPLC圖Fig.5 HPLC chromatogram of sam ple

2.2.4 線性范圍考察 精密吸取蒼術(shù)素對(duì)照品溶液 (質(zhì)量濃度為0.204 4 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0μL注入高效液相色譜儀中，測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo) (X)，峰面積為縱坐標(biāo) (Y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y=6 393.2X－48.889，r=0.999 8，提示蒼術(shù)素進(jìn)樣量在0.244μg～2.684μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

精密吸取 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯對(duì)照品溶液 (質(zhì)量濃度為0.128 mg/mL)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0、11.0 μL注入高效液相色譜儀中，測(cè)定色譜峰面積，以進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo) (X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y=3 270.3X－49.167，r=0.999 6。提示 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯進(jìn)樣量在0.128μg～1.408μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液 (產(chǎn)地:湖北英山)，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10μL，測(cè)得蒼術(shù)素峰面積的RSD為1.8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面積的RSD為2.1%，表明該方法精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24、48 h進(jìn)樣10μL，測(cè)得蒼術(shù)素峰面積的RSD為1.4%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯峰面積的RSD為1.2%，表明該方法的精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取本品0.5 g(產(chǎn)地:湖北英山)，精密稱(chēng)定，共6份。按前述方法測(cè)定，結(jié)果蒼術(shù)素的平均含有量為0.237 8%，RSD為2.6%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯平均含有量為0.310 4%、RSD為2.6%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.8 回收率試驗(yàn) 取本品 ［產(chǎn)地湖北英山，蒼術(shù)素含有量為0.237 8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的含有量為0.310 4%］6份，每份0.25 g，精密稱(chēng)定。置錐形瓶中，分別加入對(duì)照品蒼術(shù)素溶液0.5 mL(質(zhì)量濃度為1.19 mg/mL)，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯溶液 0.5 mL(質(zhì)量濃度為1.55 mg/mL)，按前述方法制備和測(cè)定，測(cè)定結(jié)果提示蒼術(shù)素的回收率在95.9%～104.0%之間，RSD為2.8%，(4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的回收率在97.6% ～103.8%之間，RSD為2.2%，符合有關(guān)規(guī)定。

2.2.9 樣品測(cè)定結(jié)果 分別測(cè)定了17個(gè)地區(qū)生蒼術(shù)片及自制的麩炒蒼術(shù)片中蒼術(shù)素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的含量，結(jié)果見(jiàn)表1?？梢钥闯觯n術(shù)麩炒后蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙、蒼術(shù)素和 (4E，6E，12E)-十四癸三烯-8，10-二炔-1，3-二乙酸酯的量以下降為主。

3 討論

3.1 通過(guò)測(cè)定17個(gè)不同地區(qū)收集的生蒼術(shù)片和自行炮制的麩炒蒼術(shù)片中倍半萜類(lèi)成分和聚乙烯炔類(lèi)成分可以看出，除個(gè)別樣品外，蒼術(shù)麩炒后這兩類(lèi)成分的量有所下降，這可能與這些成分主要存在于蒼術(shù)揮發(fā)油中，而在麩炒的過(guò)程中蒼術(shù)揮發(fā)油的量減少，導(dǎo)致這些成分的量下降。

3.2 由于蒼術(shù)素和 (4E、6E、12E)-十四癸三烯-8、10-二炔-1、3-二乙酸酯對(duì)光不穩(wěn)定，試驗(yàn)時(shí)采取避光操作。

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