時新春，張曉軒，叢 偉，丹巴次仁，朱興全，周恩民，穆 楊＊

（1.西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 陜西楊凌712100；2.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 家畜疫病病原生物學(xué)國家重點實驗室，甘肅蘭州730046；3.西藏大學(xué)農(nóng)牧學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院，西藏林芝860000）

戊型肝炎（Hepatitis E，HE）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）引起的一種重要的急性傳染病，在許多發(fā)展中國家廣泛流行，嚴(yán)重危害人類健康［1］。HEV是一種重要的經(jīng)口－糞途徑傳播的病原，該病通常是自限性的，預(yù)后良好，但在孕婦中造成的死亡率高達(dá)20%～25%［2－3］。HEV 也能感染多種其他哺乳動物，如豬、雞、鼠和貓等。HEV主要有5個基因型，Ⅰ和Ⅱ型感染多見于發(fā)展中國家，僅感染人；Ⅲ和Ⅳ型流行于全球，人畜均可感染；Ⅴ型僅見于禽類［4－5］。目前，仍沒有能有效預(yù)防 HE的疫苗，盡管試驗性的疫苗有一定的效果［6］。

藏豬生活于我國高寒山區(qū)，具有適應(yīng)高海拔惡劣氣候環(huán)境、抗病、耐粗等特點，并且具有極強的適應(yīng)能力和抗逆性，具備其他豬種不具備的獨特種質(zhì)特性，是我國特有的能適應(yīng)高海拔地區(qū)的一個重要品種資源［7］。豬和人的HEV在基因結(jié)構(gòu)上十分相似，人可以通過直接食入被HEV污染的食物而感染，與豬密切接觸的人群明顯比其他對照人群HEV抗體陽性率更高［8－9］，豬傳播的戊型肝炎已成為一個重要的公共衛(wèi)生問題。盡管國內(nèi)許多學(xué)者從血清學(xué)等方面對不同地區(qū)的豬HEV感染情況進(jìn)行了調(diào)查［10－13］，然而，還沒有西藏地區(qū)藏豬 HEV 感染情況的報道。本研究通過血清學(xué)試驗對西藏自治區(qū)林芝地區(qū)林芝縣和米林縣藏豬群中HEV的流行狀況進(jìn)行檢測，為西藏自治區(qū)HEV防控提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 2010年4月～12月間由西藏當(dāng)?shù)貙I(yè)獸醫(yī)工作人員采自西藏自治區(qū)林芝地區(qū)米林縣和林芝縣的藏豬血清。

1.1.2 主要試劑 戊型肝炎病毒IgG抗體（HEVAb）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒（雙抗原夾心法）為北京萬泰生物有限公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 根據(jù)豬的大小每頭前腔靜脈或耳緣靜脈采血5mL，血液凝固后離心分離血清并標(biāo)記，置－20℃保存，后低溫送回實驗室于－70℃保存?zhèn)錂z。共421份血清樣品。

1.2.2 抗體檢測 按照戊型肝炎病毒抗體（HEVAb）酶聯(lián)免疫診斷試劑盒（雙抗原夾心法）說明書檢測血清樣品中的戊型肝炎病毒抗體。結(jié)果判定以空白孔調(diào)零，當(dāng)陽性對照孔平均OD值≥0.80，陰性對照平均OD值≤0.1時試驗成立。臨界值＝陰性對照孔平均OD值（NC）＋0.12，若樣品OD值≥臨界值，判定為HEV抗體陽性，若樣品OD值＜臨界值則判定為HEV抗體陰性。

1.2.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析 檢測結(jié)果用SPSS 19.0統(tǒng)計不同生長階段、性別和采樣地戊型肝炎病毒抗體陽性率的差異。

2 結(jié)果

2.1 不同生長階段抗體陽性率分布情況

對2010年4月～12月間采自西藏自治區(qū)林芝地區(qū)藏豬的421份血清樣品，應(yīng)用ELISA試劑盒進(jìn)行檢測后，根據(jù)藏豬生長階段分組統(tǒng)計戊型肝炎病毒抗體陽性率，結(jié)果見表1。從表1可以看出，藏豬的 HEV抗體平均陽性率為48.46% （204／421），其中種公豬的陽性率最高（75%），其次是育肥豬（60.58%），斷奶仔豬的陽性率最低（31.88%），不同生長階段藏豬的戊型肝炎病毒抗體陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明HEV在西藏自治區(qū)林芝地區(qū)的藏豬中普遍流行。

表1 不同生長階段藏豬血清HEV抗體陽性率Table 1 Positive rates of HEV－Ab in different growth stages of Tibetan pigs

2.2 不同性別與地區(qū)間抗體陽性率對比

根據(jù)性別和采樣地區(qū)統(tǒng)計血清樣品HEV抗體陽性率，結(jié)果見表2。有108份樣品沒有性別信息，剩余的313份樣品中公豬和母豬血清抗體陽性率分別為52.63%和47.89%，經(jīng)統(tǒng)計差異不顯著（P＞0.05）。而林芝縣的226份樣品和米林縣的195分樣品的陽性率分別為53.10%和43.08%。統(tǒng)計分析表明，林芝縣血清樣品HEV抗體陽性率顯著高于米林縣樣品的陽性率（P＜0.05）。

表2 不同性別和不同地區(qū)的藏豬血清HEV抗體的陽性率Table 2 Positive rates of HEV－Ab in Tibetan pigs grouped by gender and location

3 討論

豬戊型肝炎病毒在世界各地豬群中普遍流行。各個國家報道的抗體陽性率差異較大，法國31%［14］，丹 麥 73.2%［15］，意 大 利 87%［16］，英 國85.5%［17］。國內(nèi)葛勝祥等［18］檢測了中國不同地區(qū)的8 626頭商品豬血清樣品，結(jié)果HEV抗體總陽性率達(dá)83.4% （7191／8 626）；廣西77.53%［19］，湖南84.3%［20］，昆明59.15%［21］，福建66.7%［22］，北京62.1%［23］，表明中國豬群 HEV感染率較高。本研究結(jié)果表明，藏豬HEV抗體平均陽性率為48.46%（204／421），低于國內(nèi)其他地區(qū)的抗體陽性率，這些與藏豬的高原生活習(xí)性和種特異性有關(guān)，也說明藏豬作為我國的特有豬種很值得更深入研究。而林芝縣（53.10%）和米林縣（43.08%）兩個采樣地的血清抗體陽性率也存在顯著差異，兩個縣HEV血清陽性率不同很可能與地域和飼養(yǎng)條件有關(guān)。

根據(jù)不同年齡段統(tǒng)計西藏藏豬HEV的抗體陽性率（表1），結(jié)果顯示西藏自治區(qū)林芝地區(qū)的藏豬中種公豬HEV抗體陽性率最高，這與在北京和臺灣所做的調(diào)查結(jié)果有差異［24－25］。這應(yīng)該與藏豬的生活環(huán)境和生活習(xí)性與北京和臺灣地區(qū)的豬不同有關(guān)。更重要的是，本研究顯示斷奶仔豬的陽性率最低（31.88%），從這個結(jié)果可以推測豬群HEV的感染是在豬的生長過程中發(fā)生，隨著仔豬的生長，其體內(nèi)母源抗體濃度越來越低也是導(dǎo)致生長豬、育肥豬和待宰豬感染率上升的一個原因。雖然具體原因還有待進(jìn)一步研究確定，但斷奶仔豬的感染仍然不可忽視。

豬源HEV與人源HEV在基因序列上具有高度的同源性，而且與豬密切接觸的職業(yè)人群血清HEV抗體明顯高于其他人群［9－10］，提示戊型肝炎是一種重要的人獸共患病。中國人喜食豬肉及其內(nèi)臟，因此，豬源HEV可能是引起人類HEV感染的一個重要來源。目前，豬HEV的感染雖然沒有給豬業(yè)生產(chǎn)帶來明顯經(jīng)濟損失，但豬作為HEV主要的傳播宿主之一，始終是公共衛(wèi)生安全的隱患，尤其是藏豬多為散養(yǎng)［7］，HEV在藏豬中的流行更應(yīng)該引起注意。在世界多個國家及中國豬HEV抗體陽性率較高的背景下，本研究對了解西藏自治區(qū)的藏豬HEV感染情況，以及西藏居民HE的防控具有重要的公共衛(wèi)生學(xué)意義。

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