聶 敏，李漢萍，曾 墾，陳 東，陳 冬，易安華，閔智鵬，魏 萍

(1.湖北省口腔基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室—省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地口腔生物醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(武漢大學(xué))，湖北武漢 430079;2.中建三局武漢中心醫(yī)院口腔科，湖北武漢 430070

口腔微生物學(xué)屬于微生物學(xué)和口腔醫(yī)學(xué)的交叉學(xué)科，涉及微生物學(xué)、齲病學(xué)、牙體牙髓病學(xué)、牙周病學(xué);具有突出的專業(yè)特點(diǎn)，與口腔臨床緊密相連?？谇晃⑸飳W(xué)內(nèi)容包括口腔生態(tài)系及其影響因素、牙菌斑和生物膜、口腔正常菌叢、口腔微生物學(xué)研究的主要方法［1］。根據(jù)專業(yè)特點(diǎn)和學(xué)科發(fā)展，僅僅停留在傳統(tǒng)的理論課的教學(xué)是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，不能滿足和適應(yīng)現(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)教育的需要和發(fā)展［2-3］。增設(shè)口腔微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課，根據(jù)口腔醫(yī)學(xué)特色設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，是我校教學(xué)改革的一部分。教學(xué)目的是加深學(xué)生對(duì)口腔微生物生態(tài)系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)，加深對(duì)疾病發(fā)生機(jī)制的理解，培養(yǎng)學(xué)生的科研興趣和能力。本文總體分析了2009～2011年三年度教學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，授課對(duì)象為高等教育第四年學(xué)生。

1 材料與方法

1.1 牙菌斑的采集和致齲菌的首次分離

采用兩兩配對(duì)模式，學(xué)生互相臨床取樣。清水漱口去凈口腔內(nèi)食物殘?jiān)?，用無菌牙簽或探針采集窩溝菌斑或唇、頰面菌斑;將標(biāo)本收集在保存液的EP管中。先后采用漩渦振蕩和超聲震蕩，使菌斑或細(xì)菌團(tuán)塊分散。將分散的菌斑標(biāo)本作10倍系列稀釋，一般作102倍和103倍，稀釋過程均要求無菌操作。選用MS瓊脂選擇性培養(yǎng)皿表面劃線接種，85%N2，15%CO2，37 ℃ 厭氧培養(yǎng)48 h。解剖顯微鏡下觀察初代培養(yǎng)平皿上的菌落，分辨致齲性和非致齲性細(xì)菌，記錄菌落形態(tài)特征，包括形態(tài)、大小、厚薄、邊緣、透明度、顏色等。

這一部分既是基礎(chǔ)技能的考驗(yàn)，也是口腔臨床專業(yè)技能的培訓(xùn)。牙菌斑的采集是分離鑒定細(xì)菌的首要步驟，考驗(yàn)學(xué)生的口腔檢查操作技能;無菌操作和劃線培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)考察微生物基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?。見?。

表1 實(shí)驗(yàn)一評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Rating criteria of the first experiment

1.2 致齲菌的次代純化培養(yǎng)

從初代培養(yǎng)板上挑取典型的變異鏈球菌菌落，在無菌條件下接種于BHI液體培養(yǎng)基，一式2份，厭氧培養(yǎng)24 h。這一部分反映了學(xué)生的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本技能，前一評(píng)分“C”的學(xué)生補(bǔ)充菌源。見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)二評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Rating criteria of the second experiment

1.3 革蘭染色

取純化致齲菌的培養(yǎng)液做革蘭染色，實(shí)驗(yàn)反映了學(xué)生的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本技能。見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)三評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 3 Rating criteria of the third experiment

1.4 致齲菌的生化鑒定

無菌操作下，取液體培養(yǎng)基培養(yǎng)的10 μL菌液做生化鑒定，分別加入甘露醇、山梨醇、棉籽糖、蜜二糖、精氨酸糖管，厭氧培養(yǎng)24 h，觀察、分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，總結(jié)成功和失敗的原因，發(fā)揮學(xué)生科研積極性。這一部分反映了學(xué)生的綜合能力和創(chuàng)新能力。5個(gè)生化糖管的結(jié)果評(píng)價(jià)見表4。

表4 實(shí)驗(yàn)四評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 4 Rating criteria of the fourth experiment

1.5 總評(píng)

總體分析2009～2011年三年度教學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，授課對(duì)象為高等教育第四年應(yīng)屆生151人，其中2009年40人，2010年55人，2011年56人。

2 結(jié)果

統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表5。

實(shí)驗(yàn)一通過對(duì)口腔“牙菌斑的采集和致齲菌的首次分離”，在教師的指導(dǎo)下，能夠培養(yǎng)并反映學(xué)生最初的基礎(chǔ)能力、專業(yè)能力、創(chuàng)新能力和綜合能力，通過實(shí)驗(yàn)教學(xué)，能夠成功培養(yǎng)出致齲菌的學(xué)生有56.3%，而31.3%的學(xué)生失敗。

表5 口腔微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課結(jié)果評(píng)估Table 5 Overall assessment of oral microbiology experiments

實(shí)驗(yàn)二和實(shí)驗(yàn)三屬于微生物次純代培養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)流程設(shè)計(jì)不復(fù)雜，重在與學(xué)生的交流，培養(yǎng)學(xué)生的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)?zāi)芰涂蒲辛?xí)慣，對(duì)實(shí)驗(yàn)一失敗的學(xué)生補(bǔ)充菌源，成功率達(dá)80%左右。

實(shí)驗(yàn)四是鑒定致齲性微生物，培養(yǎng)學(xué)生的基礎(chǔ)能力、專業(yè)能力、創(chuàng)新能力和綜合能力，通過前面的教學(xué)組建讓學(xué)生掌握口腔微生物實(shí)驗(yàn)的流程、技術(shù)和設(shè)計(jì)。成功的學(xué)生達(dá)78.2%，比實(shí)驗(yàn)一提高;而失敗的學(xué)生顯著下降到4.6%。

綜合整個(gè)教學(xué)結(jié)果，口腔微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程培養(yǎng)整體提高了學(xué)生的實(shí)驗(yàn)實(shí)踐能力。

3 討論

口腔菌叢是人體各種菌叢中最復(fù)雜的一種，正常菌種中的常居菌可以分離出50～200種不同的細(xì)菌。微生物是齲病牙周病的重要病因之一，個(gè)體的差異和環(huán)境的微進(jìn)化，導(dǎo)致了不同的菌群變化、相關(guān)優(yōu)勢(shì)菌致?。?］。變異鏈球菌是公認(rèn)的致齲性細(xì)菌［5］，通過實(shí)驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)和教學(xué)的完整流程，加深學(xué)生對(duì)理論知識(shí)的理解，有利于培養(yǎng)學(xué)生的專業(yè)技能和科研能力，引導(dǎo)學(xué)生的創(chuàng)新能力，發(fā)揮其主觀能動(dòng)性［6］。

口腔微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)體系的特點(diǎn)是:四個(gè)實(shí)驗(yàn)教學(xué)模塊同時(shí)交替，即基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)、專業(yè)實(shí)驗(yàn)、綜合實(shí)驗(yàn)、創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)［6］。系列實(shí)驗(yàn)實(shí)際授課15個(gè)學(xué)時(shí)/班。

本課程需要學(xué)生已經(jīng)掌握微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作技能，如:培養(yǎng)基的制備、器皿和培養(yǎng)基的滅菌、無菌操作技術(shù)、顯微鏡的操作、細(xì)菌染色、細(xì)菌的分離等。所以，教學(xué)評(píng)估包括了學(xué)生最根本、最基礎(chǔ)的實(shí)驗(yàn)?zāi)芰?。如，有學(xué)生體會(huì)到:“在無菌操作過程中，我發(fā)現(xiàn)操作的敏捷性和劃線的手法比較重要，同時(shí)也要注意無菌操作的原則，這樣實(shí)驗(yàn)才可以成功”。

本課程突出專業(yè)技能訓(xùn)練，如:口腔檢查、牙菌斑的臨床取樣。根據(jù)口腔醫(yī)學(xué)特色，體現(xiàn)了學(xué)科專業(yè)性，培養(yǎng)學(xué)生適應(yīng)口腔醫(yī)學(xué)發(fā)展需要的專業(yè)基本技能，重點(diǎn)解決如何應(yīng)用專業(yè)知識(shí)的能力培養(yǎng)。專業(yè)實(shí)驗(yàn)是開設(shè)本課程的特色，反映了學(xué)生的專業(yè)技能［6］。如，有學(xué)生體會(huì)到:“在這次實(shí)驗(yàn)中，我是屬于比較幸運(yùn)的，雖然涂布的培養(yǎng)基中長(zhǎng)出來的菌落比較少，但都是變鏈的菌落，主要還是取樣比較到位。但是，做實(shí)驗(yàn)不能僅僅憑借著僥幸心理，對(duì)于實(shí)驗(yàn)的各個(gè)步驟都應(yīng)該牢固地掌握?！?/p>

本課程突出綜合能力訓(xùn)練，注重研究性設(shè)計(jì)。通過整合基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和口腔臨床醫(yī)學(xué)，整合微生物學(xué)和齲病學(xué)、牙周病學(xué)，拓展學(xué)生的視野，引發(fā)學(xué)生思考。如:對(duì)致齲菌的培養(yǎng)，如果菌斑取樣不成功，就不能分離到變鏈菌;如果細(xì)菌液體培養(yǎng)失敗，就不能鑒定致齲菌。綜合實(shí)驗(yàn)是開設(shè)本課程的優(yōu)勢(shì)，是學(xué)科內(nèi)不同專業(yè)的綜合實(shí)驗(yàn)。如，有學(xué)生提交報(bào)告:“對(duì)無菌操作、規(guī)范操作的要求很高，這幾步一步出現(xiàn)問題，最終的結(jié)果可能就會(huì)失敗，而且無法挽回。這些在理論課上很難學(xué)到的，而這也許就是實(shí)驗(yàn)課的一個(gè)目的吧?！?/p>

本課程重視科學(xué)思維、研究能力和創(chuàng)新意識(shí)的培養(yǎng)。教師提出實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)，學(xué)生自主選擇，基于上面的3個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行專題討論和綜合分析。比如，牙菌斑的選擇性培養(yǎng)失敗了，學(xué)生能否創(chuàng)新地想到培養(yǎng)唾液鏈球菌，比較一下致齲菌和非致齲菌的差別。創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)是開設(shè)本課程的最有趣的內(nèi)容，最能夠開發(fā)思維，最能夠發(fā)揮學(xué)生的創(chuàng)新能力和科研能力［7-9］。如，有學(xué)生的報(bào)告里寫道“這個(gè)細(xì)菌分離鑒定實(shí)驗(yàn)很好，可為我們以后的細(xì)菌相關(guān)實(shí)驗(yàn)提供一些思路?！?/p>

經(jīng)過3年的教學(xué)積累和不斷探索，積累了一些教學(xué)經(jīng)驗(yàn)，經(jīng)過整個(gè)實(shí)驗(yàn)的教學(xué)，學(xué)生不僅專業(yè)和科研的綜合能力大幅提高，而且對(duì)自己的口腔健康也提高了意識(shí)。如，有學(xué)生的實(shí)驗(yàn)報(bào)告總結(jié)說:“使用MS培養(yǎng)基成功地培養(yǎng)出了變異鏈球菌，可見變異鏈球菌為口腔正常菌群，但當(dāng)其比例增加時(shí)就有患齲的可能，所以要注意平時(shí)的口腔衛(wèi)生保健?！?/p>

通過3年教學(xué)的總評(píng)，增設(shè)口腔微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程有助于提高口腔醫(yī)學(xué)教育質(zhì)量，作為理論課的延伸，與理論教學(xué)相輔相成，有助于培養(yǎng)適應(yīng)新世紀(jì)要求的高素質(zhì)創(chuàng)新型的醫(yī)學(xué)人才。

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