董政起，高 軍，陳 昕，程?hào)|巖*

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012；3.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130022)

·實(shí)驗(yàn)研究·

高效液相色譜法測(cè)定更年安舒顆粒中松果菊苷含量

董政起1，高 軍2，陳 昕3，程?hào)|巖2*

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所，北京 100193；2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130012；3.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130022)

目的：建立更年安舒顆粒中松果菊苷的高效液相色譜(HPLC)測(cè)定方法。方法：色譜柱采用shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相采用甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液為A溶液，以1%冰醋酸溶液為B溶液，以A溶液-B溶液(22：78)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為330nm；柱溫為30 ℃；流速為1mL/min。結(jié)果：松果菊苷在0.080～1.286μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)為0.999 8，平均回收率為99.2%，RSD=1.85%(n=6)。結(jié)論：HPLC測(cè)定方法簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于更年安舒顆粒的質(zhì)量控制。

更年安舒顆粒；松果菊苷；高效液相色譜法(HPLC)；質(zhì)量控制

更年安舒顆粒是中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院研制的中藥復(fù)方顆粒劑，由肉蓯蓉、女貞子等5味中藥組成,具有益腎補(bǔ)陰，清心開(kāi)郁之功效，適用于以陰虛內(nèi)熱為主所致的女性更年期綜合征。松果菊苷為君藥肉蓯蓉中主要有效成分，具有抗氧化、保護(hù)神經(jīng)、保護(hù)肝臟、抗炎、抗腫瘤、改善學(xué)習(xí)記憶以及免疫調(diào)節(jié)等作用[1-3]。本文以松果菊苷為指標(biāo)性成分，以高效液相色譜法建立更年安舒顆粒的質(zhì)量控制方法，控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床療效。

1 儀器與試藥

日本島津LC-10A高效液相色譜儀，SPD-10A紫外檢測(cè)器；松果菊苷對(duì)照品(為中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；更年安舒顆粒自制(批號(hào):120608、120813、120818、120824)，規(guī)格5g/袋；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對(duì)照品溶液 精密稱(chēng)取松果菊苷對(duì)照品適量，置容量瓶中，加50%甲醇，制成每1mL含50μg松果菊苷的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液 精密稱(chēng)取0.3g本品(裝量差異項(xiàng)下),研細(xì)，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇至刻度，稱(chēng)重，超聲處理30min，放冷，以50%甲醇補(bǔ)足再次稱(chēng)重時(shí)所減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流動(dòng)相：以甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液為A溶液，以1%冰醋酸溶液為B溶液，以A溶液-B溶液(22∶78)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)：330nm；柱溫：30 ℃；流速：1mL/min；進(jìn)樣體積：10μL。松果菊苷峰與更年安舒顆粒中其他組分分離完全，且分離度大于1.5，理論板數(shù)按松果菊苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.3 干擾試驗(yàn) 按比例從處方中去除肉蓯蓉,按2.1.2項(xiàng)下制備成肉蓯蓉的陰性對(duì)照樣品。取供試品溶液、陰性對(duì)照樣品溶液及對(duì)照品溶液各10μL，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果顯示，在松果菊苷色譜峰相應(yīng)位置，陰性對(duì)照樣品溶液無(wú)吸收峰，故確定處方中其他藥味對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系的考察 精密稱(chēng)取松果菊苷對(duì)照品4.02mg，加50%甲醇溶解并稀釋定容至10mL，作為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mL,分別置5mL量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為系列對(duì)照品溶液。分別吸取上述6份對(duì)照品溶液各10μL，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，松果菊苷的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得回歸方程Y=-22 688+1 542 263X,r=0.999 8，在0.080～1.286μg范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10μL，按選定色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果顯示，松果菊苷峰面積的RSD為0.91%(n=6)，故儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10μL，分別于配制后0、4、8、12、24h按選定色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得松果菊苷峰面積的RSD為1.43%(n=6)，故溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 從同一批號(hào)樣品(批號(hào)：120608)中，精密稱(chēng)取6份，按2.1.2項(xiàng)下方法制備并按選定色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得松果菊苷平均含量為42.69mg/袋，RSD=1.67%(n=6)。

2.8 中間精密度試驗(yàn) 按2.1.2項(xiàng)下方法取同一批號(hào)樣品(批號(hào)：120608)6份，于不同日期，由不同分析人員，在不同設(shè)備上，按選定色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果顯示松果菊苷平均含量為42.04mg/袋，RSD=1.63%(n=6)。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 采用加標(biāo)回收方法，精密稱(chēng)取已知含量的同一批號(hào)樣品(批號(hào)：120608，含松果菊苷8.483mg/g)約0.3g共6份，分別精密加入松果菊苷對(duì)照品(2.67，2.61，2.52，2.72，2.70，2.64mg)，按2.1.2項(xiàng)下及2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行配置和測(cè)定松果菊苷含量。結(jié)果顯示，平均回收率為99.2%,RSD=1.85%(n=6)。具體結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 松果菊苷回收率測(cè)定結(jié)果

根據(jù)上述測(cè)定結(jié)果可知，該方法平均回收率達(dá)99.2%，且RSD小于3%，故認(rèn)為用此方法測(cè)定制劑中松果菊苷含量完全可行。

2.10 樣品測(cè)定 分別取4個(gè)批號(hào)的樣品(批號(hào)分別為120608、120813、120818、120824),按2.1.2項(xiàng)下方法制成供試品溶液。再精密吸取10μL對(duì)照品溶液及供試品溶液，按上述選定色譜條件測(cè)定，計(jì)算樣品中松果菊苷含量，結(jié)果4批樣品的含量分別為42.59、36.40、53.25、40.35(mg/袋)(n=3)。

2.11 耐用性試驗(yàn)

2.11.1 不同品牌色譜柱 精密稱(chēng)取同一批號(hào)樣品(批號(hào)：100608)，制成供試品溶液，分別采用3種色譜柱：shim-packVP-ODS柱(250mm×4.6mm，5μm);AlltimaTMC18柱(250mm×4.6mm,5μm);KromasilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算松果菊苷含量。結(jié)果表明3種色譜柱測(cè)定樣品均能達(dá)到良好分離，精密度良好。

2.11.2 柱溫 精密稱(chēng)取同一批號(hào)樣品(批號(hào)：100608)，制成供試品溶液，分別于柱溫30、35 ℃按選定色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果表明柱溫變化不能引起測(cè)定結(jié)果較大變化。

2.11.3 流速 精密稱(chēng)取同一批號(hào)樣品(批號(hào)：100608)，制成供試品溶液，依選定色譜方法分別用流速0.8、1.0、1.2mL/min進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明流速變化對(duì)分離效果及測(cè)定結(jié)果影響較小。

3 討論

通過(guò)比較3種流動(dòng)相：1)甲醇-1%冰醋酸溶液(29∶71)；2)以甲醇-乙腈(15∶10)配成的混合溶液為A溶液，以1%冰醋酸溶液為B溶液，以A溶液-B溶液(22∶78)為流動(dòng)相；3)乙腈-水(13.5∶86.5)，結(jié)果以流動(dòng)相2)分離效果最佳，故確定流動(dòng)相2)為測(cè)定松果菊苷含量的最終流動(dòng)相。另外，通過(guò)對(duì)不同溶劑、不同提取方法和提取時(shí)間進(jìn)行比較試驗(yàn)，最終確定用50%甲醇超聲提取30min為最佳方法，方法簡(jiǎn)便易行。

[1]麻景梅,宋新波,張麗娟,等.荒漠肉蓯蓉多糖的研究[J].吉林中醫(yī)藥,2012,32(2):199-201.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:126.

[3]姜翔之,陳英紅,羅浩銘,等.HPLC法測(cè)定藤黃健骨丸中松果菊苷的含量[J].中國(guó)藥師,2009,12(4):481-482.

R284.1

A

1003-5699(2013)06-0607-02

董政起(1983-)，男，助理研究員，博士。研究方向：中藥新藥研究工作。

*[通信作者] 程?hào)|巖，女，副研究員,Tel：0431-86058657，E-mail:cdyan1225@sohu.com。

2013-04-29)