劉賢華，白曉東，劉元明，段萃娟，榮 冉，劉維維

丙型肝炎是一種由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)引起的肝臟急、慢性炎性反應(yīng)，目前世界上約有2 億人感染［1，2］。近些年來(lái)，臨床實(shí)驗(yàn)室相繼建立了實(shí)時(shí)熒光定量室，采用PCR 體外擴(kuò)增的方法，定量檢測(cè)人血清或血漿標(biāo)本中的HCV-RNA［3，4］。本研究回顧性分析我院2011-10至2012-08 期間265例疑似HCV 感染患者的檢測(cè)數(shù)據(jù)，探討PCR-熒光探針?lè)?、?HCV 與ALT 檢測(cè)在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 265例疑似HCV 感染患者均為我院門(mén)診及住院患者，其中男146例，女119例，年齡15～80歲。全部患者均檢測(cè)HCV-RNA、抗-HCV 及ALT。HCV-RNA 檢測(cè)采用PCR-熒光探針?lè)ǎ瑖?yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)要求和實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照和4個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品，測(cè)定結(jié)果為0(無(wú)數(shù)值)的標(biāo)本為HCV-RNA 陰性標(biāo)本?？?HCV 檢測(cè)采用ELISA 法，同時(shí)設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品，酶標(biāo)儀450 nm/630 nm 波長(zhǎng)測(cè)定。檢驗(yàn)結(jié)果判斷:標(biāo)本A值＜Cutoff值為陰性，≥Cutoff值為陽(yáng)性。ALT 水平檢測(cè)采用全自動(dòng)生化分析儀。

1.2 試劑與儀器 美國(guó)PTC-200 型Peltier Thermal Cycler 擴(kuò)增儀，TECAN 全自動(dòng)酶標(biāo)儀，日立公司AU7600-120 全自動(dòng)生化分析儀。丙型肝炎病毒核酸定量檢測(cè)試劑盒由上海科華生物工程股份有限公司提供，抗-HCV 酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒由北京金豪制藥股份有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件，采用配對(duì)t 檢驗(yàn)與χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 HCV-RNA 與抗-HCV 檢測(cè)結(jié)果 抗-HCV陽(yáng)性檢出率為80.4%(213/265)，HCV-RNA 陽(yáng)性檢出率為64.9%(172/265)。在213例抗-HCV陽(yáng)性者血清中，171例查出HCV-RNA，其余血清未檢出HCV-RNA;52例抗-HCV 陰性血清中，有1例HCV-RNA 檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性，其余均未檢出HCV-RNA。

HCV-RNA 與抗-HCV 均陽(yáng)性171例，均為陰性51例，HCV-RNA 陽(yáng)性而抗-HCV 陰性1例，HCV-RNA 陰性而抗-HCV 陽(yáng)性32例。HCV-RNA 陽(yáng)性多伴有抗-HCV 陽(yáng)性(r=0.320)，二者有很好的相關(guān)性但并不呈正比關(guān)系。

2.2 HCV-RNA 和抗-HCV 陽(yáng)性率的性別、年齡分布 由表1 可見(jiàn)，男性抗-HCV 與HCV-RNA的陽(yáng)性率均高于女性，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);年齡＞40歲的患者抗-HCV 與HCV-RNA的陽(yáng)性率明顯高于年齡≤40歲的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 265例可疑HCV 感染患者性別、年齡分布與HCV-RNA 和抗-HCV 檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表(n;%)

2.3 HCV-RNA 含量與ALT 相關(guān)性分析 從表2中顯示，265例可疑HCV 感染血清標(biāo)本中，HCV-RNA 陽(yáng)性172例，其中ALT 異常者有167例，異常率為97.09%;HCV-RNA 陰性98例，其中ALT 異常者1例，異常率為1.02%，ALT 異常率隨HCV-RNA 陽(yáng)性率的增高而增加，并與HCV-RNA 含量成正相關(guān)性(r=0.999，P＜0.05)。但ALT 的水平與HCV-RNA 含量無(wú)相關(guān)性(r=0.800，P＞0.05)。

表2 265例疑似HCV 感染患者HCV-RNA 含量與ALT 的關(guān)系

3 討 論

3.1 HCV 檢測(cè)方法的選擇 目前，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HCV 的方法很多，主要有血清學(xué)檢測(cè)HCV 抗體、基因分型技術(shù)、定量檢測(cè)HCV-RNA 及HCV 抗原、核酸分子雜交法、基因芯片技術(shù)等。以上方法大部分僅限用于科學(xué)研究，而在臨床檢驗(yàn)中酶聯(lián)免疫測(cè)定HCV 抗體仍是國(guó)內(nèi)外HCV 篩選最常用方法［5，6］。本研究265例全部采用ELISA 法檢測(cè)血清抗-HCV，213例樣本呈陽(yáng)性，52例樣本呈陰性，但檢測(cè)HCV-RNA 時(shí)發(fā)現(xiàn)，52例抗-HCV 陰性患者中，有1例HCV-RNA 檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。分析其中原因:一是可能由于抗-HCV 檢測(cè)存在“窗口期”，用該檢測(cè)方法無(wú)法檢測(cè)到病原存在［7］;二是可能因?yàn)榛颊呤褂妹庖咭种苿┗蚧计渌麌?yán)重疾病導(dǎo)致免疫力低下使抗體無(wú)法檢出。而PCR-熒光探針?lè)ㄔ诨颊吒腥綡CV 后1-3周就可檢出HCV-RNA［8］，在診斷HCV 感染中具有明顯優(yōu)勢(shì)。但是筆者并不主張單獨(dú)應(yīng)用PCR-熒光探針?lè)ㄟM(jìn)行丙型肝炎病毒核酸定量，因?yàn)槿绻颊吒腥镜腍CV 與該引物不匹配或者患者病毒載量太低，都有可能導(dǎo)致HCV-RNA 檢測(cè)結(jié)果為陰性。建議對(duì)于大規(guī)模體檢進(jìn)行HCV 篩查，可先行抗-HCV 檢測(cè)，對(duì)其中抗-HCV 陽(yáng)性標(biāo)本或疑似陽(yáng)性標(biāo)本再進(jìn)行HCV-RNA 檢測(cè);而對(duì)于抗-HCV 陰性標(biāo)本，如果可疑也可再進(jìn)行HCV-RNA 檢測(cè)以減少漏診的機(jī)會(huì)。因此在醫(yī)療條件允許的醫(yī)院，可以同時(shí)開(kāi)展HCV-RNA 與抗-HCV檢測(cè)從而減少HCV 感染的漏診率。

3.2 HCV-RNA 與抗-HCV 在診斷HCV 感染中的價(jià)值 從理論上講，對(duì)于同一群體同時(shí)進(jìn)行抗-HCV 和HCV-RNA 檢測(cè)，HCV-RNA 的陽(yáng)性檢出率應(yīng)該高于抗-HCV 的陽(yáng)性檢出率，文獻(xiàn)［9］也支持這一觀點(diǎn)。但本研究結(jié)果與之相反，抗-HCV 陽(yáng)性檢出率(80.4%)高于HCV-RNA 陽(yáng)性檢出率(64.9%)?？紤]原因一是因?yàn)锳值＜2.5 滴度狀態(tài)的血清，不容易檢測(cè)到HCV-RNA;二是因?yàn)槟承└蓴_因素的存在，例如在本實(shí)驗(yàn)中，有181例處于A值≥2.5 高滴度狀態(tài)，其中有171例查出HCV-RNA 陽(yáng)性，有10例出現(xiàn)抗-HCV 高滴度而HCV-RNA 陰性，而此類(lèi)患者有一個(gè)共同的特點(diǎn)就是他們的ALT 水平都處于正常范圍之內(nèi)，后經(jīng)證實(shí)全部為經(jīng)過(guò)抗病毒治療后接近康復(fù)的患者。三是可能樣本量還不夠大，處于窗口期的患者少，今后對(duì)這一類(lèi)情況將重點(diǎn)關(guān)注。本研究結(jié)果提示，抗-HCV A值的高低可預(yù)示其血清中HCV-RNA 的存在與否，在一定程度上反映了感染個(gè)體的傳染性，這與文獻(xiàn)［10］認(rèn)為抗-HCV 的滴度與感染的病毒活性相關(guān)的觀點(diǎn)一致。另外，本研究表明，HCV-RNA 陽(yáng)性多伴有抗-HCV 陽(yáng)性，二者有很好的相關(guān)性，但并不呈正比關(guān)系。

3.3 性別、年齡與HCV-RNA、抗-HCV 及ALT的關(guān)系 本研究顯示，男性抗-HCV、HCV-RNA的陽(yáng)性率與女性比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);＞40歲患者的抗-HCV 與HCV-RNA 陽(yáng)性率明顯高于≤40歲的患者，且ALT 異常率亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，究其原因可能是因?yàn)?0歲以上的成年人社會(huì)壓力過(guò)大及不良生活習(xí)慣如嗜酒、吸煙，或合并其他嚴(yán)重疾病致使機(jī)體抵抗力過(guò)低［11］，更易受病毒侵襲而使ALT 異常。本研究表明，抗-HCV、HCV-RNA 及ALT 具有很好的相關(guān)性，對(duì)丙肝診斷具有同等重要的作用。當(dāng)HCV-RNA 處于活動(dòng)性復(fù)制狀態(tài)時(shí)，肝臟功能亦處于損害狀態(tài)，ALT水平的檢測(cè)在診斷HCV 中有很好的輔助作用。

綜上所述，ELISA 法檢測(cè)抗-HCV 在丙型肝炎診斷中仍舊為首選檢測(cè)方法，尤其適合于大規(guī)模篩查。PCR-熒光探針?lè)z測(cè)丙型肝炎病毒核酸定量結(jié)果會(huì)更精確，對(duì)于診斷HCV 感染者的病情及轉(zhuǎn)歸是一項(xiàng)很有意義的指標(biāo)。

［1］Lauer G M，Walker B D.Hepatitis C virus infection［J］.N Engl J Med，2001，345:41-52.

［2］Daniel Lavanchy.The global burden of hepatitis C［J］.Liver International，2009，29(Suppl S1):74-81.

［3］吳金京，張皖瑜，丁 艷，等.綜合性醫(yī)院傳染病病原體攜帶情況的分析與對(duì)策［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2007，20(2):184-188.

［4］Alter H.Discovery of non-A，non-B hepatitis and identification of its etiology［J］.Am J Med，1999，107(Suppl.6B):16-20.

［5］Filippo Ansaldi，Giancarlo Icardi.Simultaneous Detection of Anti-HCV Antibody and HCV Core Antigen［J］.Methods in Molecular Biology，2009，510(1):15-23.

［6］陳建輝，尹建平.丙型肝炎病毒感染輸血相關(guān)因素回顧性分析［J］.數(shù)理醫(yī)藥學(xué)雜志，2008，21(4):441-444.

［7］Alan Kitchen.人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV).見(jiàn):世界衛(wèi)生組織主編，上海市血液中心譯.安全血液和血液制品遠(yuǎn)程教育項(xiàng)目［M］.2 版.上海:上?？萍汲霭嫔?，2002:20-31.

［8］陳開(kāi)慧.探討三種檢測(cè)方法在丙型肝炎診斷中的應(yīng)用價(jià)值［J］.免疫學(xué)雜志，2011，27(4):319-321.

［9］Filippo Ansaldi，Giancarlo Icardi.Simultaneous Detection of Anti-HCV Antibody and HCV Core Antigen［J］.Methods in Molecular Biology，2009，510(1):15-23.

［10］Vander Poel C L.Hepatitis C virus and blood transfusion:past and present risk［J］.J Hepatol，1999，1:101-106.

［11］張國(guó)強(qiáng)，李玉梅.淺析血站在血液安全管理中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)［J］.武警醫(yī)學(xué)，2011，22(8):696.