楊恒，高樹(shù)，胡路鋒，劉賢俠，谷新利，王建梅，陳愛(ài)江，李吉堂，趙宏，蘇軍，李明，徐奇，陸良

（1石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，石河子832003；2新疆西部牧業(yè)股份有限公司，石河子832000；3新疆澳利亞牧業(yè)有限公司，奎屯834032；4新疆克拉瑪依綠成農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司，克拉瑪依834000）

新疆是我國(guó)奶牛養(yǎng)殖大省，發(fā)展奶牛養(yǎng)殖有著得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì)，擁有豐富的乳業(yè)資源。尤其是近幾年隨著新疆奶牛業(yè)的快速發(fā)展，截至2011年全疆奶牛存欄已達(dá)250萬(wàn)頭，僅在新疆兵團(tuán)第七師和第八師地區(qū)規(guī)模化奶牛場(chǎng)和養(yǎng)殖小區(qū)就達(dá)100多個(gè)。但與此同時(shí)，影響奶牛業(yè)發(fā)展的問(wèn)題也日漸突出。目前制約奶牛場(chǎng)發(fā)展的“瓶頸”因素之一是奶牛不孕癥，尤其是奶牛排卵延遲是引起奶牛卵巢疾病性不孕的主要原因之一，其是導(dǎo)致排卵障礙的重要原因，據(jù)報(bào)道由排卵障礙引起的屢配不孕奶牛占整個(gè)不孕牛總數(shù)的30%～40%［1］，由于排卵延遲導(dǎo)致奶牛錯(cuò)失最佳受精時(shí)機(jī)、使產(chǎn)犢間隔延長(zhǎng)，最終降低了奶牛場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)效益。而中藥具有副作用小，藥物殘留量少，對(duì)動(dòng)物無(wú)毒副作用［2］的特點(diǎn)。目前已有報(bào)道研究證實(shí)中藥對(duì)卵巢疾病有明顯的效果［3－5］。

本研究中所用的中藥理囊散治療奶牛卵巢疾病前后血液中激素、微量元素以及白介素的變化已有報(bào)道［6－7］，本試驗(yàn)是在此基礎(chǔ)上對(duì)排卵延遲奶牛用中藥理囊散進(jìn)行治療，同時(shí)應(yīng)用B超對(duì)卵巢和子宮進(jìn)行連續(xù)跟蹤檢查，旨在為治療排卵延遲奶牛的作用機(jī)理研究提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)地點(diǎn)在新疆西部牧業(yè)股份有限公司牛場(chǎng)、澳利亞牧業(yè)有限公司牧場(chǎng)、克拉瑪依綠成農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司牛場(chǎng)，這些牛場(chǎng)飼養(yǎng)規(guī)范，無(wú)結(jié)核，布氏桿菌病。所選牛均為荷斯坦奶牛。

1.1.2試驗(yàn)儀器

50 s型Tringa Vet獸用便攜式B超儀2臺(tái)，分別配備3.5／5.0 MHz變頻凸陣探頭和5.0～7.5 MHz變頻線陣探頭，荷蘭Piemed ICAL公司生產(chǎn)，配備N(xiāo)i－MH 12 V充電電池各1個(gè)，2215型NiCd／Ni MH charger各1個(gè)，另外有配套50 s Tringa communication software version 1.0圖像處理軟件ODTCOMM和雙向紅外傳輸接口。

1.1.3試驗(yàn)藥品

耦合劑：天津市南開(kāi)區(qū)華科醫(yī)療器械廠生產(chǎn)，規(guī)格250 g；理囊散：女貞子、熟地黃、附子、三棱、藿香、香附子、甘草、青皮等12味中藥組成。

1.2 方法

1.2.1飼養(yǎng)和給藥方式

牛場(chǎng)飼養(yǎng)方式全部為散欄飼養(yǎng)，采用全混合日糧（total mixed ration，TMR）飼喂。每天早晨8：00－9：00給藥，每天1次，每次400 g，連續(xù)口服5 d為1個(gè)療程。

1.2.2排卵延遲的診斷

查閱繁殖記錄：多次正常發(fā)情和人工授精（artificial insemination，AI）但未妊娠；臨床癥狀［8］：外表發(fā)情癥狀和正常發(fā)情一樣，但發(fā)情的持續(xù)期延長(zhǎng)；直腸檢查［8］：發(fā)情期檢查卵巢和子宮無(wú)明顯的疾患，卵巢上有卵泡存在，大小正常，人工授精后次日檢查成熟卵泡未排卵；B超檢查：人工授精后次日在同一卵巢部位成熟卵泡大小和位置基本未發(fā)生變化，聲像圖顯示低回聲液性暗區(qū)。

1.2.3理囊散治療排卵延遲奶牛卵巢和子宮的B超形態(tài)學(xué)檢查

使用B超對(duì)奶牛卵巢及子宮在用藥前5 d及用藥后至發(fā)情后1周不同時(shí)間段進(jìn)行動(dòng)態(tài)跟蹤掃描，每隔3 d測(cè)量1次，觀察適時(shí)圖像，當(dāng)顯示出卵巢、卵泡、黃體、子宮清晰圖像后，將畫(huà)面凍結(jié)，通過(guò)B超儀內(nèi)置電子標(biāo)尺卵巢、卵泡、黃體、及子宮的縱橫徑等指標(biāo)進(jìn)行測(cè)量，B超存儲(chǔ)的圖像通過(guò)紅外圖像軟件傳輸?shù)诫娔X上。

1.2.4子宮和卵巢的B超形態(tài)學(xué)指標(biāo)測(cè)量說(shuō)明

黃體直徑：B超探查切面圖像顯示黃體最大直徑時(shí)測(cè)量；卵泡直徑：B超探查切面圖像顯示卵泡最大直徑時(shí)進(jìn)行測(cè)量；子宮頸縱頸：B超探查子宮頸中間位置的縱向直徑進(jìn)行測(cè)量；子宮角縱頸：B超探查子宮角基部為準(zhǔn)，測(cè)量最大子宮角縱向直徑進(jìn)行測(cè)量；卵巢長(zhǎng)度：B超探查顯示卵巢的最大縱切面來(lái)測(cè)量卵巢最大直徑；卵巢寬度：B超探查顯示卵巢的最大橫切面來(lái)測(cè)量卵巢最大直徑。

1.2.5治療效果判定

患病奶牛經(jīng)治療1～2個(gè)情期內(nèi)正常發(fā)情，人工授精后次日檢查成熟卵泡破裂并排卵記為有效，否則記為無(wú)效。

1.2.6統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用Excel進(jìn)行整理，應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 排卵延遲的診斷

共診斷出排卵延遲奶牛37例，選擇其中無(wú)子宮疾病（子宮內(nèi)膜炎、子宮腫瘤等）和其他疾病（尤其是乳房炎和蹄?。┑?0頭單側(cè)排卵延遲奶牛口服中藥理囊散，這些奶牛的體況評(píng)分（body condition score，BCS）平均為（3.03±0.57），胎次平均為（2.39±2.170），泌乳量平均為（26.24±3.16）kg／d。

2.2 排卵延遲奶牛典型B超聲像圖

圖1為排卵延遲奶牛卵泡的B超聲像圖，聲像圖特征顯示卵泡壁呈強(qiáng)回聲，邊界清晰、光滑，卵泡呈低回聲液性暗區(qū)，本試驗(yàn)中排卵延遲奶牛卵泡的直徑范圍為15.5～22.7 mm。

圖1 排卵延遲奶牛的B超聲像圖Fig.1 The B－Mode image of ovulation－delayed dairy cows

2.3 理囊散治療排卵延遲奶牛的效果

口服中藥理囊散后，經(jīng)過(guò)B超跟蹤檢查，30頭奶牛中有24頭在下一情期發(fā)情并排卵，治療有效率為80%，6頭治療無(wú)效，無(wú)效率為20%。

2.4 口服理囊散前后排卵延遲卵巢和子宮形態(tài)指標(biāo)的變化

2.4.1口服理囊散前后排卵延遲卵巢形態(tài)指標(biāo)變化

由表1可見(jiàn)，口服理囊散前后左卵巢長(zhǎng)、左卵巢寬、右卵巢長(zhǎng)、右卵巢寬變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 口服理囊散前后排卵延遲奶牛卵巢形態(tài)指標(biāo) mmTab.1 The morphological indices of ovarian of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powder

圖2 口服理囊散前后排卵延遲奶牛卵巢形態(tài)指標(biāo)變化曲線Fig.2 The curve of change of morphological indices of ovarian of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powder

由圖2可見(jiàn)，左卵巢長(zhǎng)和寬在口服前最大，停藥后第1天后開(kāi)始下降，之后出現(xiàn)小幅度的升高，第10天以后無(wú)明顯變化。右卵巢長(zhǎng)和寬在口服前最大，在停藥后第1－4天開(kāi)始下降，然后開(kāi)始升高，停藥后第7天又恢復(fù)到口服前的大小，之后又開(kāi)始下降，但降幅不大。

2.4.2口服理囊散前后排卵延遲奶牛子宮形態(tài)指標(biāo)變化

由表2可見(jiàn)，子宮角縱徑在口服理囊散后第7、10、13天與口服前比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），子宮頸縱徑在口服理囊散后與口服前比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表2 口服理囊散前后排卵延遲奶牛子宮形態(tài)指標(biāo) mmTab.2 The morphological indices of uterine of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powderr

由圖3可見(jiàn)，子宮角縱徑在口服理囊散后開(kāi)始降低，停藥第7天降至最低，然后明顯升高，在第19天升高至口服前大小，子宮頸縱徑變化規(guī)律與子宮角相似。

圖3 口服理囊散前后排卵延遲奶牛子宮形態(tài)指標(biāo)變化折線圖Fig.3 The line curves of morphological indices of uterine of ovulation－delayed dairy cows before and after taking orally Cyst－regulating Powder

2.5 口服理囊散前后典型B超聲像圖

圖4為新疆澳利亞牧業(yè)有限公司第八牧場(chǎng)檢查6002號(hào)奶牛 B超圖像，2胎，產(chǎn)奶量23.8 kg／d，2012年4月8日產(chǎn)犢，6月28日下午發(fā)情，次日早上實(shí)施AI，7月20日下午第2次出現(xiàn)發(fā)情，應(yīng)用直腸檢查結(jié)合B超進(jìn)行檢查發(fā)現(xiàn)兩側(cè)卵巢以及子宮正常，并且左側(cè)卵巢上有成熟卵泡存在，直徑約18 mm，B超聲像圖顯示卵泡壁呈強(qiáng)回聲，邊界清晰、光滑，卵泡呈無(wú)回聲液性暗區(qū)（圖4a）；次日早上實(shí)施人工授精，7月22日早上B超檢查左側(cè)卵巢發(fā)現(xiàn)發(fā)情卵泡直徑大小未發(fā)生變化（圖4b），說(shuō)明未排卵，最終診斷為排卵延遲；當(dāng)日開(kāi)始口服理囊散，每天1次，每次400 g，連續(xù)口服5 d，7月26日灌藥結(jié)束，8月2日檢查有腔黃體直徑31.8 mm（圖4c）；之后液體腔逐漸縮小，8月11日檢查為周期黃體，液體腔消失，聲像圖特征為超聲特征顯示不均勻較強(qiáng)回聲，與卵巢基質(zhì)界限明顯，輪廓清晰，左側(cè)有卵泡發(fā)育，黃體開(kāi)始退化，此為發(fā)情前期（圖4d）；8月13檢查卵泡直徑變大，直徑為15.5 mm，聲像圖顯示無(wú)回聲液性暗區(qū)區(qū)域擴(kuò)大（圖4e），當(dāng)天上午出現(xiàn)發(fā)情，晚上實(shí)施AI；8月15日早上檢查左側(cè)卵泡已排卵，聲像圖顯示液性暗區(qū)逐漸消失，排卵后的卵巢呈中等密度的回聲，邊界清晰（圖4f）；8月20日檢查為有腔黃體，排卵后第7天后形成的黃體，說(shuō)明已經(jīng)排卵（圖4g）；9月13日B超妊娠檢查，聲像圖顯示擴(kuò)張子宮角內(nèi)有規(guī)則強(qiáng)回聲結(jié)構(gòu)的胎兒，超聲測(cè)量胎齡頭臀長(zhǎng)10.8 mm，顯示胎齡31 d（圖4h），與實(shí)際妊娠時(shí)間基本相符，治療效果可判定為有效。

圖4 排卵延遲奶?？诜砟疑⑶昂驜超聲像圖Fig.4 The B－Mode Image of ovulation－delayed dairy cows before and after taking medicine of dairy cows

3 討論

3.1 排卵延遲奶牛的診斷

嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，排卵延遲屬于卵巢機(jī)能不全或排卵障礙，指在發(fā)情時(shí)有發(fā)情的外表癥狀，但不出現(xiàn)排卵，在牛上時(shí)有發(fā)生。該病診斷主要通過(guò)直腸檢查和B超，和其他卵巢疾病相比，排卵延遲奶牛外部發(fā)情癥狀正常，直腸檢查卵巢和子宮無(wú)異常，但發(fā)情持續(xù)的時(shí)間比正常奶牛要長(zhǎng)，通過(guò)查閱繁殖記錄對(duì)發(fā)情配種正常但未受孕的奶牛在下次實(shí)施人工授精后10－12 h進(jìn)行直腸檢查和B超掃查，如卵泡仍然存在并且B超聲像圖上顯示為低回聲液性暗區(qū)，卵泡直徑大小和位置也基本未變，連續(xù)跟蹤檢查最終卵泡會(huì)發(fā)生排卵，由此可診斷為排卵延遲。但需要與不排卵進(jìn)行鑒別診斷［8］，二者都屬于排卵障礙范疇，并且臨床癥狀比較相似，但不排卵的奶牛是在卵泡發(fā)育到最大體積時(shí)也不發(fā)生排卵［9］。動(dòng)物正常排卵是在下丘腦—垂體—卵巢軸的相互調(diào)節(jié)下進(jìn)行的［10］，排卵前成熟卵泡分泌大量的雌激素通過(guò)正反饋誘發(fā)排卵前促黃體素（luteotropin，LH）峰的出現(xiàn)。所以排卵延遲往往與LH脈沖釋放減少或不及時(shí)有關(guān)，也可能與雌激素合成受阻及某些排卵活性降低有關(guān)。

本文中患病奶牛產(chǎn)奶量平均為（26.24±3.16）kg／d，多數(shù)為高產(chǎn)奶牛，泌乳產(chǎn)生大量催乳素，造成腦垂體前葉抑制LH的分泌，同時(shí)降低了卵巢LH的正常反應(yīng)，進(jìn)而影響卵泡的正常排卵。另外飼養(yǎng)管理不當(dāng)、應(yīng)激和遺傳也是導(dǎo)致奶牛排卵延遲的重要原因之一。

3.2 理囊散治療排卵延遲奶牛的中獸醫(yī)辨證理論

中醫(yī)理論認(rèn)為，卵子是生殖之精，藏于腎，其發(fā)育成熟與腎精充盛密切相關(guān)，而卵子的正常排出有賴于腎陽(yáng)鼓動(dòng)，肝之疏泄，沖任氣血調(diào)暢。腎陽(yáng)虧虛，排卵缺乏內(nèi)在動(dòng)力；肝氣郁結(jié)，肝失疏泄，不能疏泄卵子排出；沖任氣血瘀滯，阻礙卵子的排出。因此我國(guó)中醫(yī)學(xué)認(rèn)為排卵延遲是由于腎－天葵－沖任之間相互協(xié)調(diào)失常和肝、脾、腎功能失調(diào)所致［11］。中醫(yī)辨證本病為腎虛、肝郁、氣滯血瘀型，治療以補(bǔ)腎、疏肝、活血為主［12］。根據(jù)中獸醫(yī)辨證理論，理囊散是采用活血理氣、益氣補(bǔ)血、活血祛瘀、散淤軟堅(jiān)的治則。而組方熟地黃歸經(jīng)入心、肝、腎經(jīng)；附子歸經(jīng)入心、脾、腎經(jīng)；藿香歸經(jīng)入脾、胃、肺經(jīng)；青皮歸經(jīng)入肝、膽經(jīng)；香附入肝、膽、脾經(jīng)；三棱歸經(jīng)入肝、脾經(jīng)；女貞子歸經(jīng)入肝、腎經(jīng)。方中以熟地黃溫陽(yáng)益腎填精為君藥，當(dāng)歸益氣養(yǎng)血為臣藥，配以香附疏肝理氣調(diào)經(jīng)；女貞子滋腎補(bǔ)血，益髓填精，以三棱和青皮散瘀軟堅(jiān)、破氣形血、消積化滯、疏肝破氣。青皮生地黃中的主要成分VA和VC對(duì)調(diào)節(jié)動(dòng)物的繁殖性能非常重要。

附子對(duì)垂體——腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)有興奮作用［13］。實(shí)驗(yàn)研究證明，方中菟絲子等能提高垂體對(duì)下丘腦黃體生成激素釋放激素的反應(yīng)，使之分泌更多的LH；又能提高LH受體功能，從而改善內(nèi)在的神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié)機(jī)制，這是誘發(fā)排卵的基礎(chǔ)。諸藥合用共奏補(bǔ)血活血，活血祛瘀、充沛精血、滋陰補(bǔ)腎、調(diào)沖任二脈之功，以促進(jìn)排卵。

3.3 口服理囊散對(duì)排卵延遲奶牛卵巢形態(tài)的影響

本實(shí)驗(yàn)中選取20頭發(fā)情周期正常產(chǎn)后45－60 d未配種的奶牛應(yīng)用B超測(cè)量卵巢的形態(tài)指標(biāo)作為對(duì)照，結(jié)果左側(cè)卵巢長(zhǎng)平均為（33.91±5.69）mm，寬平均為（21.18±5.55）mm，右卵巢長(zhǎng)平均為（31.33±6.11）mm，寬平均為（20.64±5.89）mm。排卵延遲奶?？诜兴幥白髠?cè)卵巢長(zhǎng)平均為（34.45±7.56）mm，寬平均為（25.35±13.93）mm，右側(cè)卵巢長(zhǎng)平均為（37.00±4.10）mm，寬平均為（24.37±5.19）mm，卵巢體積大于正常卵巢的大小，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

而口服理囊散后兩側(cè)卵巢體積有所降低，逐漸恢復(fù)至正常大小，主要和理囊散中菟絲子作用于垂體使LH分泌增多，誘導(dǎo)卵泡排卵有關(guān)，但差異不顯著（P＞0.05）。左側(cè)卵巢長(zhǎng)在停藥后第7天降至最低，平均為（30.88±3.12）mm，左卵巢寬在停藥后第13天降至最低，平均為（19.43±2.40）mm；右側(cè)卵巢長(zhǎng)在停藥后第16天降至最低，平均為（32.10±5.75）mm，右側(cè)卵巢寬在停藥后第13天降至最低，平均為（18.88±4.39）mm。本研究中6002號(hào)奶牛在口服中藥結(jié)束后發(fā)情卵泡破裂并排卵，此后有新生黃體形成，形狀類(lèi)似輪狀結(jié)構(gòu)，停藥后的第7天黃體體積最大，這與報(bào)道［11］中的奶牛在排卵后48 h內(nèi)形成直徑15 mm的黃體，在排卵后7－8 d黃體體積最大，直徑達(dá)到20～25 mm基本一致。之后黃體中間的液性空腔開(kāi)始縮小，在停藥后的16 d卵巢上的黃體逐漸被溶解開(kāi)始出現(xiàn)發(fā)育卵泡，第19天出現(xiàn)直徑為18.7 mm的發(fā)情卵泡，配種次日B超檢查卵泡破裂并排卵，說(shuō)明理囊散對(duì)此排卵延遲奶牛治療有效。這主要由于理囊散中幾味中藥具有改善卵巢營(yíng)養(yǎng)刺激卵巢血管，促進(jìn)卵泡成熟并排卵的作用。

3.4 口服理囊散前后對(duì)排卵延遲奶牛子宮形態(tài)的影響

本實(shí)驗(yàn)中選取20頭發(fā)情周期正常，產(chǎn)后45－60 d未配種的奶牛應(yīng)用B超測(cè)量子宮的形態(tài)指標(biāo)作為對(duì)照，正常對(duì)照組測(cè)得子宮角平均直徑為（39.18±4.52）mm，子宮頸平均直徑為（32.92±4.11）mm，排卵延遲奶牛灌藥前子宮角平均直徑為（42.75±8.93）mm，子宮頸平均直徑為（32.55±9.24）mm，子宮角平均直徑略高于對(duì)照組，主要由于排卵延遲奶牛較正常奶牛發(fā)情持續(xù)時(shí)間要長(zhǎng)，子宮尚處于輕度水腫期；子宮頸平均直徑與對(duì)照組比較接近?？诜兴幗Y(jié)束第7、10和13天子宮角直徑較灌藥前下降有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；子宮頸直徑下降無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。從灌藥結(jié)束第13天開(kāi)始子宮角直徑和子宮頸直徑開(kāi)始升高逐漸恢復(fù)至正常大小。這可能與理囊散中的幾味中藥對(duì)子宮平滑肌有興奮作用有關(guān)。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)診斷出排卵延遲奶牛口服理囊散，應(yīng)用B超對(duì)用藥前后奶牛卵巢和子宮形態(tài)進(jìn)行測(cè)量，結(jié)果表明，口服理囊散后卵巢長(zhǎng)和寬、子宮角和子宮頸的直徑逐漸降至正常范圍，對(duì)診斷出排卵延遲的奶?？诜砟疑⒑蟪霈F(xiàn)發(fā)情并排卵，說(shuō)明口服理囊散對(duì)治療排卵延遲奶牛具有明顯效果。

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