何氏加味定喘湯對(duì)慢性支氣管炎大鼠內(nèi)皮素-1及肺組織形態(tài)學(xué)的影響

周運(yùn)海,楊 洋

(蘇州市中醫(yī)醫(yī)院,江蘇蘇州215000)

本實(shí)驗(yàn)通過觀察實(shí)驗(yàn)性慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織勻漿中ET-1及肺、支氣管組織病理形態(tài)學(xué)的改變,探討何氏加味定喘湯對(duì)慢性支氣管炎的治療作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 動(dòng)物 60只清潔級(jí)健康SD大鼠(SPF):蘇州大學(xué)動(dòng)物中心提供。

1.2 藥物 何氏加味定喘湯(煎劑):由百部、炙麻黃、桑白皮、杏仁、炙紫菀、白前、制半夏、橘紅、蘇子、黃芩、象貝母、炙款冬花、炙地龍組成,棕色水煎劑,4℃貯存;止嗽合劑,由蘇州市中醫(yī)醫(yī)院制劑室生產(chǎn)提供。

1.3 試劑及儀器 ET-1放免試劑盒由北京華英生物技術(shù)研究所提供,批號(hào):20110525。XHF-D內(nèi)切式勻漿機(jī)由上海京工實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 造模及給藥 除空白對(duì)照組外,其余各組用煙熏法造模。造模參照文獻(xiàn)[1]法,采用改良煙熏法復(fù)制:1)將造模組大鼠共42只置于90 cm×60 cm×60 cm的煙室中,煙室上方開一0.4 cm×60 cm的縫隙,下面外接回活塞通氣管具。通氣管具活塞端接煙條,后端接50 mL注射器。2)將鋸末、旱煙條各12 g混合均勻,卷成每支8 g左右的煙條。將煙條接在活塞端,點(diǎn)燃煙條,抽動(dòng)活塞即可順利通入。3)煙熏大鼠:共30 d,其中前20 d每日2次,每次30 min,每次用煙條3支,每隔10 min加入1支;后10 d每天1次,方法同上。4)第20天時(shí),取模型對(duì)照組大鼠2只。斷頸處死,取右肺中部組織在福爾馬林中固定,再經(jīng)過脫水、浸蠟、包埋等處理,切片,常規(guī)HE染色做成病理切片光鏡下觀察,證明慢性支氣管炎已經(jīng)形成,造模成功。5)從造模第20天起,空白對(duì)照組及模型對(duì)照組用生理鹽水1 mL/100 g,給藥組按1 mL/100 g灌胃,陽(yáng)性對(duì)照組用止嗽合劑5 g/(kg·d)灌胃,何氏加味定喘湯高、中、低劑量組分別以 20 g/(kg·d)、10 g/(kg·d)、5 g/(kg·d)劑量灌胃,各組均為每日 1次。各組均用藥20 d。

2.2 檢測(cè)方法 血清制備:術(shù)前8 h禁食不禁水,末次給藥1 h后,稱重大鼠,用4%的水合氯醛腹腔注射麻醉。剪開腹部皮膚,紗布保護(hù)撥開腹腔內(nèi)容物,暴露腹后壁,鈍性分離腹主動(dòng)脈,抽取腹主動(dòng)脈血5 mL,4℃,制備血清,-20℃凍存待檢;另抽取腹主動(dòng)脈血2 mL,4℃,放入真空采血管EDTA抗凝管,制備血漿,-20℃冰存待檢。

肺組織勻漿的制備:將左側(cè)肺組織用冰生理鹽水沖洗,濾紙吸濕后,稱取濕重0.3 g左右,加入預(yù)冷的生理鹽水,用電動(dòng)勻漿器制成10%的肺組織勻漿,4℃,6 000 r/min離心5 min,提取上清液,-20℃凍存待檢。

肺病理組織制備:取左側(cè)肺臟中部組織0.5 cm×0.5 cm,用福爾馬林溶液固定,待檢。

檢測(cè)方法:采用放免法測(cè)定大鼠血漿及肺組織勻漿中ET-1的含量,樣本冷凍快遞至北京華英生物技術(shù)研究所,由該研究所負(fù)責(zé)檢測(cè)。肺組織切片,HE染色,光鏡觀察肺與支氣管的組織形態(tài)學(xué)變化。

3 結(jié)果

3.1 何氏加味定喘湯對(duì)慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織勻漿中ET-1含量的影響 見表1。

表1 何氏加味定喘湯對(duì)慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織勻漿中 ET-1的影響(±s,n=10)

表1 何氏加味定喘湯對(duì)慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織勻漿中 ET-1的影響(±s,n=10)

注:與正常對(duì)照組比較:#P<0.05,##P<0.01;與模型對(duì)照組比較:△P<0.05,△△P<0.01。

組 別 血清ET-1/(pg/mL)肺組織勻漿ET-1/(pg/mL)正常對(duì)照組 54.96±6.89 22.80±2.12模型對(duì)照組 105.88±11.17## 28.34±3.30#何氏加味定喘湯低劑量組 90.14±10.97## 26.08±3.41何氏加味定喘湯中劑量組 76.18±10.29△# 25.67±4.27何氏加味定喘湯高劑量組 61.16±6.07△△ 22.20±4.06△陽(yáng)性對(duì)照組(止嗽合劑) 68.11±8.25△△ 23.11±3.88

3.2 何氏加味定喘湯對(duì)慢性支氣管炎大鼠肺與支氣管組織形態(tài)的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:慢性支氣管炎大鼠支氣管纖毛柱狀上皮變性、壞死脫落,再生的上皮杯狀細(xì)胞增多,并發(fā)生鱗狀上皮化生;管壁平滑肌斷裂、萎縮,管壁充血水腫,淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn);支氣管管腔變狹窄,炎癥向管壁周圍組織及肺泡擴(kuò)展。何氏加味定喘湯隨著劑量的增加,其病理改變程度逐漸減輕。何氏加味定喘湯低劑量組大鼠仍有支氣管纖毛柱狀上皮變性、壞死脫落現(xiàn)象;管壁平滑肌斷裂、萎縮,充血水腫,淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)程度較模型組均有所減輕;何氏加味定喘湯中、高劑量組支氣管管壁平滑肌均很完整,管壁充血水腫現(xiàn)象還存在,淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕(見圖1)。

4 討論

慢性支氣管炎多屬中醫(yī)的“咳嗽”“喘證”“痰飲”范疇。[2-3]慢性支氣管炎病情雖復(fù)雜,證型變化頗多,但李鴻娟主任認(rèn)為臨床上最常見的只有3個(gè)證型,包括痰熱蘊(yùn)肺型,脾腎兩虛、痰濁阻肺型,脾腎陽(yáng)虛型,其他證型在此3型的基礎(chǔ)上辨證,處方靈活加減運(yùn)用,就可舉一反三,執(zhí)簡(jiǎn)馭繁了[4]。定喘湯出自《攝生眾妙方》,全方由麻黃、白果、蘇子、黃芩、半夏、桑白皮、杏仁、款冬花、甘草等9味組成,具有清肺降氣、清熱化痰功效,是治療風(fēng)寒外束、痰熱內(nèi)蘊(yùn)之喘證的代表方。何氏定喘湯在原方的基礎(chǔ)上去白果,加百部,炙紫菀,白前,橘紅,象貝母,炙地龍化裁而成,全方具有宣肺平喘、清熱化痰、解痙止咳作用,寒溫同用、宣降并進(jìn)[5]。呼吸系統(tǒng)含有豐富的ET,同時(shí)也存在著ET受體,并且已證實(shí)內(nèi)皮素是已知最強(qiáng)的氣管和支氣管平滑肌收縮劑,它有3種異構(gòu)體,分別是ET-1、ET-2、ET-3,其中以ET-1作用最強(qiáng)[6],并且ET-1還是一重要的前炎癥因子[7]。有研究發(fā)現(xiàn),在慢性支氣管炎鼠模型上,BALF、血漿及肺組織ET-1水平顯著增加,與氣道炎癥損傷指標(biāo)呈顯著正相關(guān)[8]。隨著慢性支氣管炎癥的加重,逐漸向肺氣腫、肺心病進(jìn)展時(shí),血漿中ET-1逐漸增高[9]。

圖1 何氏加味定喘湯對(duì)慢性支氣管炎大鼠肺與支氣管組織形態(tài)的影響

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),慢性支氣管炎大鼠血清、肺組織勻漿中ET-1較正常組顯著增加,何氏加味定喘湯可劑量依賴地逆轉(zhuǎn)這些改變,高劑量組均接近正常水平,與模型組比較具有非常顯著的差異。提示何氏加味定喘湯可通過有效抑制ET-1的產(chǎn)生,控制肺部慢性炎癥,延緩疾病進(jìn)展。慢性支氣管炎的病理改變主要表現(xiàn)為支氣管上皮細(xì)胞變性、壞死、脫落,后期出現(xiàn)鱗狀上皮化生,纖毛變短、黏連、倒伏、脫失。運(yùn)用煙熏法造模,病理切片可見大鼠支氣管纖毛柱狀上皮變性、壞死脫落,再生的上皮杯狀細(xì)胞增多,并發(fā)生鱗狀上皮化生;炎癥向管壁周圍組織及肺泡擴(kuò)展。何氏加味定喘湯低劑量組大鼠仍有支氣管纖毛柱狀上皮變性、壞死脫落現(xiàn)象,但中高劑量組無(wú)這些病理改變,提示隨著劑量增高,何氏加味定喘湯改善支氣管纖毛病理?yè)p傷,促進(jìn)纖毛功能的恢復(fù),利于氣道分泌物的排出;何氏加味定喘湯中、高劑量組支氣管管壁平滑肌均很完整,炎癥控制明顯,雖然管壁充血水腫現(xiàn)象還存在,但淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕,顯示很好的治療效果。

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