強直性脊柱炎患者血清IL?27水平的測定及臨床意義

林滇恬，李曉琳，齊晨越，袁琳，夏麗萍，沈暉，魯靜

（中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院風濕免疫科，沈陽 110001）

強直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）是一種慢性炎性疾病，主要侵犯骶髂關節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織及外周關節(jié)。臨床主要表現(xiàn)為腰、背、頸、臀、髖部疼痛以及關節(jié)腫痛，嚴重者可發(fā)生脊柱畸形和關節(jié)強直，影響人們健康和生活質(zhì)量。到目前為止尚沒有有效的治療方法，特別是以中軸受累為主的AS患者治療效果更不理想。因而，如何針對AS病因的靶向治療成為國內(nèi)、外學者普遍關注又亟待解決的難題?，F(xiàn)已證實［1］AS的發(fā)病和HLA?B27密切相關，并有明顯家族聚集傾向。近年來對于AS免疫異常方面的發(fā)病機制研究非?；钴S，有研究［2］發(fā)現(xiàn)多種細胞因子參與了疾病的發(fā)生發(fā)展。白細胞介素27（interleukin?27，IL?27）作為IL?12家族的成員之一，是由EB病毒誘導蛋白3（EBV induced pro?tein 3，EB3）和P28亞基組成的異二聚體細胞因子［2］，通過獨特的IL?27Rα細胞（WSX ?1/T）和T細胞細胞因子受體（T cell cytokine receptor，TCCR）組成的受體復合物與gp130進行信號轉(zhuǎn)導［3］。因此，IL?27與IL?12家族的其他成員的受體在結構上以及參與Th1細胞反應的調(diào)控中有相似性［4］，但在發(fā)揮調(diào)節(jié)NK細胞活性、T細胞增殖和細胞因子產(chǎn)生以及抗體類別轉(zhuǎn)換等方面的功能相互重疊但又不完全相同。有報道［5～7］指出，IL?27可通過調(diào)控細胞的信號轉(zhuǎn)導來抑制某些自身免疫性疾病。Gabay等［4］報道IL?27在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythemato?sus，SLE）患者外周血中水平較低；Shen等［6］報道IL?27在類風濕關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）患者發(fā)病過程中起著重要作用；Xia等［7］報道IL?27在原發(fā)性干燥綜合征（primary Sjogren’s syndrome，pSS）患者血清中明顯增高。但IL?27在AS發(fā)病中的作用如何至今未見報道。本項研究通過檢測AS患者血清中的IL?27水平，并與疾病活動度及炎性指標比較，探討其在AS中的臨床意義，為AS的靶向治療藥物的研究提供試驗和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 對象

選取2010年8月至2012年4月在中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院風濕免疫科住院及門診AS患者90例，所有患者均符合修訂的紐約標準（1984年）。其中男72例，女18例，年齡15～67歲，平均（32±10）歲。并同期收集健康對照者30名，其中男22例，女8例，年齡16～65歲，平均（30±14）歲。入選患者均排除感染、腫瘤及其他風濕性疾病，在年齡、性別上與實驗組無統(tǒng)計學差異（P＆gt;0.05）。同時記錄及檢測AS患者有無髖關節(jié)受累、有無外周關節(jié)炎及眼受累，紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）、C?反應蛋白（C reactive protein，CRP）、人體組織相容性抗原 B27（human leucocyte antigen?B27；HLA?B27）、完成Bath強直性脊柱炎疾病活動指數(shù)（Bath AS disease activity index，BASDAI）調(diào)查表并記錄用藥情況。該研究經(jīng)過中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院倫理學委員會批準，患者均已知情同意并簽訂知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 血清IL?27水平測定：清晨采集AS患者及健康對照組患者空腹靜脈全血，自然凝固后3 000 r/min離心5 min，分離血清，分裝后于-80℃低溫冰箱保存，應用ELISA檢測血清IL?27水平。IL?27試劑盒購自美國R＆D公司，按照試劑盒中說明書的步驟進行操作。用酶標儀檢測450 nm處的吸光度（A）值，建立標準曲線，根據(jù)標準曲線計算樣本IL?27濃度。

1.2.2 HLA?B27檢測：采用流式細胞儀方法檢測。儀器及試劑HLA?B27檢測試劑盒均購自BD公司。取EDTA抗凝全血標本（50 μL）加10 μLHLA?B27抗體標記，均加入12 mm×75 mm試管中，混勻，室溫避光孵育15 min后，直接將試管放入標本前處理樣本臺上，用全血溶解試劑，裂解紅細胞。設置陰性對照：除抗體改為標記小鼠外，其余步驟同上。充分洗滌固定后上機檢測。

1.2.3 其他實驗室指標檢測：ESR采用魏氏法，CRP采用免疫比濁法，均由中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院檢驗中心檢測。

1.3 統(tǒng)計學處理

所得數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，結果以±s表示，組間比較采用t檢驗，相關分析采用Spearman相關性分析，以P＆lt;0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 AS患者與健康對照組血清IL?27水平比較

AS患者血清IL?27水平為（603.4±76.2）pg/mL，健康對照組患者為（63.4±5.9）pg/mL。AS患者血清IL?27水平明顯高于健康對照組（P＆lt;0.001）。

2.2 AS患者血清IL?27水平與BASDAI、ESR、CRP相關性分析

在AS患者中髖關節(jié)受累24例，外周關節(jié)受累28例，眼部受累12例；HLA?B27陽性者有76例。AS患者BASDAI均數(shù)為5.5±0.2，其中77例≥4，13例＆lt;4。AS患者ESR（33.7±2.8）mm/h，CRP（25.6±2.5）mg/L。AS患者血清IL?27水平與疾病活動指數(shù)及炎性指標相關分析顯示，AS患者血清IL?27水平與BAS?DAI、ESR及CRP水平均呈明顯正相關（r分別為0.306、0.299、0.218，P分別為0.003、0.004、0.040）。

3 討論

AS是一種病因未明的慢性自身免疫性疾病，與遺傳因素和環(huán)境因素關系密切。如早期得不到及時的診斷及有效治療，極易造成關節(jié)的功能障礙、關節(jié)強直，喪失工作和生活自理能力，致殘率高，嚴重影響患者的身心健康。因此，關于AS病因、發(fā)病機制的研究備受關注。目前研究表明，多種細胞因子參與了AS的發(fā)病，其中腫瘤壞死因子α（tumor ne?crosis factor?α，TNF?α）、IL?17等多種細胞因子在AS的發(fā)病過程中起著重要作用［8，9］。IL?27在AS疾病中的作用如何，目前未見報道。

IL?27主要是由抗原提呈細胞產(chǎn)生，是IL?12家族的新成員，在免疫反應的調(diào)節(jié)中，具有促進炎性和抑制炎性的雙重作用［10］，一方面IL?27可以誘導na?ve T 細胞向Th1方向分化，促進其IFN ?γ的產(chǎn)生［11］，通過激活細胞毒性T淋巴細胞，起到抗病毒和抗腫瘤的效果；另一方面，IL?27也可以抑制Th2型和Thl7型免疫反應。在我們的研究中發(fā)現(xiàn)在AS患者血清中IL?27水平明顯增高，但其增高的機制還不清楚。目前認為，Th17細胞與Th1細胞在AS的發(fā)病中起著重要作用。有研究報道，在Ⅱ型膠原誘導關節(jié)炎小鼠模型中，IL?17可誘導IL?27的表達增多［12］。我們推測在AS發(fā)病過程中IL?27增高可能通過以下途徑：（1）在AS發(fā)病過程中由于Th17增多，IL?17分泌增加，誘導IL?27的產(chǎn)生增多；（2）通過刺激Th1細胞的免疫應答和IFN?γ與幼稚T細胞的表達，上調(diào)內(nèi)皮細胞TNF?α和IL?1β受體和免疫調(diào)節(jié)相關的基因，刺激成纖維樣滑膜細胞對趨化因子（如CXCL9、CX?CL10、CX3CL1）的表達，影響?zhàn)じ椒肿右种苿┑谋磉_和細胞趨化因子的釋放，從而導致了免疫炎性反應。

目前研究表明，IL?27與多種風濕免疫性疾病的發(fā)病有關，且RA患者血清中IL?27的濃度增高，并與疾病活動度相關［6］。我們的研究結果顯示在AS患者血清中IL?27水平與炎癥指標ESR、CRP及BASDAI呈正相關，與上述報道一致，進一步說明IL?27在AS的發(fā)病中起著一定的作用，也有可能成為評價AS疾病活動度的一個新的生物學標志物。

關于AS的治療，特別是針對以中軸受累為主的AS患者的治療困擾著廣大風濕科醫(yī)生。目前主要采用非甾體抗炎藥及抗風濕病慢作用藥，但療效不佳，對AS的致殘率沒有明顯的改善。近年來先后出現(xiàn)針對TNF?α及IL?6為靶點的生物制劑，使AS的治療和預后有了明顯的改善，但仍有一部分AS患者療效甚微，甚至無效。我們的研究結果顯示IL?27有可能是AS發(fā)病中一個重要的細胞因子。因此，IL?27可能成為一個AS治療的新靶點。

綜上所述，IL?27在AS患者血清中明顯增高，但在AS發(fā)病中的作用如何還不清楚，仍需要進一步研究，特別是利用IL?27或干預IL?27R/STAT信號轉(zhuǎn)導途徑方面的研究，為其臨床應用開啟新的篇章。

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