HPV檢測在宮頸病變病理診斷及CIN術(shù)后隨訪中的臨床意義

馮曉潔

（云南省昆明市第一人民醫(yī)院 昆明 650011）

HPV檢測在宮頸病變病理診斷及CIN術(shù)后隨訪中的臨床意義

馮曉潔

（云南省昆明市第一人民醫(yī)院 昆明 650011）

目的：探討宮頸脫落細(xì)胞人乳頭瘤病毒（HPV）亞型檢測在宮頸疾病診斷和宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）術(shù)后隨訪的意義。方法：選擇我院婦科行HPV病理檢測患者533例，其中HPV陽性120例，采用導(dǎo)流雜交基因芯片技術(shù)進(jìn)行HPV亞型檢測，29例手術(shù)治療CIN患者隨訪3～12個月。結(jié)果：CIN及宮頸癌高危HPV感染率分別為93.3%、100%，均顯著高于宮頸炎組（P＜0.05）；隨著CIN宮頸病變程度的加重，HPV亞型轉(zhuǎn)陰率降低，但不同級別術(shù)后3、5、12個月的轉(zhuǎn)陰率相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論：HPV分型檢測用于宮頸疾病的篩查，可確定HPV類型，判斷是否為多重感染，為宮頸病變轉(zhuǎn)歸提供警示，也可作為CIN患者術(shù)后監(jiān)測的重要指標(biāo)。

HPV亞型；宮頸病變；病理診斷；CIN；隨訪

本文以2009年4月～2010年12月于我院病理科行HPV檢測患者533例作為研究對象，旨在探討HPV分型檢測在宮頸疾病診斷與治療中的意義以及在CIN術(shù)后隨訪的價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2009年4月～2010年12月期間于我院婦科行HPV病理檢測的533例宮頸病變患者，從中篩選出HPV陽性患者120例（陽性率22.5%），年齡21～73歲，平均39.5歲；病理診斷結(jié)果：宮頸炎81例，CINⅠ11例，CINⅡ10例，CINⅢ9例，宮頸癌9例。120例患者均接受21種HPV亞型檢測。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集 樣本采集前3 d叮囑患者不得陰道內(nèi)放藥或做陰道沖洗。患者取膀胱截石位，窺陰器擴(kuò)開陰道，暴露宮頸，宮頸或陰道殘端分泌物過多時(shí)，無菌生理鹽水棉球擦拭。專用取樣器在宮頸外口2 cm處輕柔搓動，順時(shí)針旋轉(zhuǎn)5圈，慢慢取出采樣器，置入盛有專用細(xì)胞保存液的取樣管中，擰斷刷頭入管中，擰緊瓶蓋送檢。

1.2.2 HPV基因分型檢測 采用醫(yī)用核酸分子快速雜交基因分型試劑盒（凱普生物科技有限公司生產(chǎn)）檢測21種HPV亞型，包括16種高危亞型（HPV16亞型、18亞型、31亞型、33亞型、35亞型、39亞型、45亞型、51亞型、52亞型、53亞型、56亞型、58亞型、59亞型、66亞型、68亞型及HPVCP8304亞型）和5種低危亞型（HPV6亞型、11亞型、42亞型、43亞型、44亞型）。

1.2.3 DNA提取 均勻震蕩取樣管，取0.5 mL樣本，12 000 rmp離心3 min，去除上清液，加生理鹽水漂洗1～2次，再去上清液，加裂解酶50 μL，煮沸裂解，DNA釋放。

1.2.4 HPV-DNA聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增 按照23.5 μL∶0.75 μL的比例兌PCR-Mix與DNA Taq酶，搖勻后加入1 μL DNA模板，均勻混合后進(jìn)行PCR擴(kuò)增，儀器采用美國PE9600PCR擴(kuò)增儀。95℃變性20 s，55℃退火30 s，72℃延伸30 s，擴(kuò)增40個循環(huán)后繼續(xù)72℃延伸，計(jì)時(shí)5 min停止。

1.2.5 導(dǎo)流雜交基因分型 雜交儀預(yù)熱45℃，雜交平臺上放入配套的21種HPV基因寡核苷酸探針的低密度基因芯片，單次可同時(shí)檢測15個樣本。雜交反應(yīng)前，將23.5 μL生物素標(biāo)記的PCR擴(kuò)增物加熱至95℃，變性10 min，置入冰水浴2 min，加入雜交液。導(dǎo)流雜交儀HybriMax TM上25℃孵育10 min，進(jìn)行導(dǎo)流雜交。雜交后，0.5 mL雜交液沖洗3次，封阻液25℃環(huán)境下封阻孵育5 min，再加入0.5 mL酶標(biāo)液，孵育3 min。沖洗液反復(fù)沖洗雜交膜，徹底去除未結(jié)合酶標(biāo)液。調(diào)節(jié)溫度至36℃，加入0.5 mL NBT/BCIP底物（Roche）顯色劑，至顯色完成。1 h內(nèi)觀察檢測結(jié)果。

1.3 評定與分級 顯色劑顯示出藍(lán)紫色圓點(diǎn)視為陽性，根據(jù)膜條上HPV亞型分布判定感染的HPV亞型，一個圓點(diǎn)陽性為單一HPV亞型感染，兩個或兩個以上圓點(diǎn)陽性則為HPV亞型多重感染。病理檢查結(jié)果按照細(xì)胞異型性程度和范圍分為：宮頸上皮細(xì)胞正常良性細(xì)胞改變（BCC）、CINⅠ級、CINⅡ級、CINⅢ級以及鱗狀上皮癌（SCC）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同宮頸疾病與HPV感染關(guān)系 120例HPV陽性患者21種HPV亞型全部檢出。隨著病變程度的加重，高危亞型HPV檢出率逐漸增高。CIN不同分級患者HPV感染率相比無顯著性差異（P＞0.05）；CIN及宮頸癌高危HPV感染率分別為93.3%、100%，均顯著高于宮頸炎組（P＜0.05）。見表1。

表1 不同宮頸病變組織活檢病理結(jié)果與HPV感染的關(guān)系 例

2.2 術(shù)后不同時(shí)間內(nèi)HPV亞型檢測結(jié)果 術(shù)后隨訪12個月，其中術(shù)后6個月內(nèi)1例患者失訪，至術(shù)后12個月，失訪8例，均因聯(lián)系方式更改。見表2。

表2 CIN患者治療后3個月、6個月、12個月HPV亞型檢測結(jié)果 例

3 討論

高危性HPV亞型是宮頸癌發(fā)生的主要因素，早期檢測診斷，提高宮頸癌檢出率對女性的健康意義重大[1～2]。本研究中CIN不同分級的高危HPV亞型感染率為90.9%、90.0%和100%，呈現(xiàn)增高的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；宮頸炎、CIN及宮頸癌高危HPV感染率分別為80.2%、93.3%、100%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因此，高危亞型HPV感染所致CIN和宮頸癌發(fā)病率明顯高于低危型，且隨著宮頸病變的加重，患者高危HPV感染率增高，與卓曉娟等的報(bào)道一致[3]。

本研究全部CIN接受LEEP治療，術(shù)后嚴(yán)密隨訪。術(shù)后3個月CINⅠ轉(zhuǎn)陰率100%，CINⅡ轉(zhuǎn)陰率90.0%，CINⅢ轉(zhuǎn)陰率77.8%；術(shù)后6個月轉(zhuǎn)陰率分別為100%、88.9%和77.8%；術(shù)后1年隨訪22例，轉(zhuǎn)陰率分別為100%、87.5%、80.0%。提示LEEP手術(shù)對各級CIN的HPV均有清除能力，可徹底解除CINⅠ的HPV感染情況，對CINⅡ和CINⅢ的HPV清除能力略低，但這一情況可隨著術(shù)后隨訪時(shí)間的延長得到改善。建議在CIN患者接受治療后，應(yīng)當(dāng)定期復(fù)查，提高重視。

[1]支園園,尹格平.HPV檢測在宮頸病變診斷及CIN術(shù)后隨訪中的價(jià)值[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2012,21(7):563-564,567

[2]侯文靜,張蓉,朱華.TCT聯(lián)合HPV亞型檢測在CIN診斷和隨訪中的臨床意義[J].中國婦幼保健,2010,25(33):4 853-4 855

[3]卓曉娟,陳昭日,李陽明,等.高危型HPV檢測在CINⅡ-Ⅲ治療后隨訪中的意義[J].濰坊醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,34(2):128-129

R711.74

B

10.13638/j.issn.1671-4040.2014.02.039

2013-10-25）

●研究生論壇●