張愛華，王小芳，陳桂蘭

(樂安縣人民醫(yī)院，江西樂安344300)

溶血對常見生化指標的影響及其校正方法的探討

張愛華，王小芳，陳桂蘭

(樂安縣人民醫(yī)院，江西樂安344300)

溶血；干擾；回歸分析

在日常生化檢驗工作中，一些物理或化學的因素都可能引起樣本的溶血，從而導致某些指標出現(xiàn)分析誤差，且不同程度溶血對這些指標的影響往往表現(xiàn)出不一致性。為了便于處理生化檢驗中遇見的溶血樣本，我們隨機選取健康體檢樣本32份，并配制每份樣本Hb濃度分別為1g/L、2g/L、4g/L、6g/L溶血液，平行檢測每位受檢者的未溶血血清、溶血液中各項生化指標，并對結(jié)果進行總結(jié)分析，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料隨機選取2013年4月至2013年12月樂安縣人民醫(yī)院體檢科送檢的健康體檢靜脈血樣本32例，≥5ml/例，樣本無溶血、乳濁、黃疸。受檢者年齡:20歲至66歲，男性18例，女性14例。

1.2 儀器和試劑日立7180全自動生化分析儀，山東3V公司生產(chǎn)生化試劑，AUDICOM-AC9900電解質(zhì)分析儀及配套試劑，Sysmex XS-1000i血細胞分析儀及配套試劑，朗道質(zhì)控血清(批號分別為798UN、589UE)。

1.3 方法

1.3.1 樣本處理將血液樣本置37℃水浴30min，3000r/min離心3min，盡量把上清液(即血清，血紅蛋白含量為0g/L)吸取到一干凈的試管中備用；用竹簽攪動試管中的剩余血塊，并放到振蕩器上振蕩60s，3000r/min離心3min，用血細胞分析儀測定上層溶血液Hb含量，并用上層溶血液與血清配成Hb濃度為1g/L、2g/L、4g/L、6g/L的溶血樣本。

1.3.2 測試方法將未溶血血清、溶血樣本在全自動生化分析儀和電解質(zhì)分析儀進行檢測。TBil、 DBil采用釩酸氧化法，TBA采用循環(huán)酶速率法，AST、ALT、GGT、ADA采用速率法，Urea采用尿素酶-谷氨酸脫氫酶偶聯(lián)速率法，Cr采用苦味酸法，UA采用尿酸酶-過氧化物酶法，GLU采用葡萄糖氧化酶法，β2-MG采用膠乳增強免疫比濁法，K+、Na+、Cl-、Ca2+采用電極法。

1.3.3 對溶血干擾顯著指標進行回歸分析選擇溶血干擾顯著的指標，以溶血樣本生化結(jié)果為x軸，以未溶血血清的生化結(jié)果為y軸，求得溶血干擾指標不同溶血程度的回歸方程。

1.3.4 對回歸方程進行驗證隨機選取3個門診病人樣本，要求樣本無溶血、乳濁、黃疸。先測試未溶血血清GLU等8項生化指標，將測定結(jié)果定義為理論值。人為溶血后再測試溶血液中GLU等8項生化指標、溶血液血紅蛋白濃度，根據(jù)溶血液的血紅蛋白濃度選擇相應的回歸方程，計算出校正值。校正值與理論值之差＜1/2 CLIA’88 Tea為可接受范圍。

1.4 統(tǒng)計學方法定量數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差(x±s)表示，不同程度溶血液之間生化指標的比較采用隨機區(qū)組設計資料方差分析以及兩兩比較q檢驗，回歸系數(shù)假設檢驗采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 不同程度溶血16項生化指標的檢測結(jié)果不同溶血程度樣本AST、UA、K+、ADA、Cl-、TBil、DBil、GLU等8個指標不全相等(P＜0.05)，溶血對AST、UA、K+、ADA、Cl-等5個指標呈正干擾，對TBil、DBil、GLU等3個指標呈負干擾。不同溶血程度樣本TBA、ALT、GGT、Urea、Cr、β2-MG、Na+、Ca2+差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 不同程度溶血16項生化指標的檢測結(jié)果(x±s)

表1 不同程度溶血16項生化指標的檢測結(jié)果(x±s)(續(xù))

2.2 對溶血干擾指標進行回歸分析對溶血干擾顯著的8個指標進行回歸分析，結(jié)果顯示DBil回歸系數(shù)無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，其余7個指標的回歸系數(shù)有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表2。2.3對回歸方程進行驗證分析對上述8個指標的回歸方程進行驗證，結(jié)果顯示DBil校正值與理論值之差＞1/2 CLIA’88 TEa，其余7個指標校正值與理論值之差均＜1/2 CLIA’88 TEa。見表3。

表2 溶血干擾顯著指標的回歸分析結(jié)果

表3 回歸方程驗證分析結(jié)果

3 討論

溶血干擾檢驗結(jié)果的機理有以下三種[1]：一是血細胞中高濃度組分逸出，使測定結(jié)果增高，或者某些物質(zhì)的血細胞內(nèi)濃度低于血清濃度時，則溶血相當于血清被稀釋，因而使這些血清成分特別是發(fā)生重度溶血時檢測值降低。二是血細胞成分進入血清后因化學反應而引起其他物質(zhì)的濃度改變。三是血紅蛋白本身顏色對檢測的光學干擾。

我們在2012年做過一次關于溶血對部分生化指標結(jié)果的影響的研究，顯示溶血對AST等9個指標有顯著影響[2]，但只研究了一個溶血水平的影響，也沒有探討校正方法，不利于臨床實際操作。本試驗研究了1g/L、2g/L、4g/L、6g/L等程度的溶血對檢驗結(jié)果的影響，并對有顯著差異的指標作線性回歸分析，用于計算其在未溶血時的校正值。

本實驗結(jié)果表明：溶血后AST、UA、K+、ADA、Cl-等指標顯著升高，TBil、DBil、GLU等顯著降低，這與毛小君報道基本相符[3]；Urea、Cre、ALT、GGT、TBA、β2-MG、Na+、Ca2+等指標溶血前后變化不顯著。用Excel軟件計算出AST、UA、K+、ADA、Cl-、TBil、GLU、DBil等8個指標的回歸方程，經(jīng)過對回歸系數(shù)的假設檢驗，前7項生化指標的溶血因素與未溶血因素之間存在線性回歸關系(t檢驗，P＜0.05)，并經(jīng)回歸方程的驗證表明，它們的回歸方程可用于計算溶血樣本的校正值。DBil在1g/L、2g/L、4g/L、6g/L等程度的溶血時其回歸方程的回歸系數(shù)分別為-1.53、0.54、0.41、0.34，經(jīng)回歸系數(shù)假設檢驗(t檢驗，P＞0.05)，說明其溶血因素與未溶血因素之間不存在線性回歸關系，且回歸方程的驗證實驗結(jié)果顯示，其校正值與理論值之差＞1/2 CLIA’88 Tea，表明DBil回歸方程不適用于計算溶血樣本的校正值。DBil和TBil都是采用釩酸氧化法，膽紅素被氧化成膽綠素，同時膽紅素特有黃色消失，通過比色測定氧化前后吸光度的差值計算出膽紅素的濃度[4]；然而溶血后血紅蛋白的顏色干擾了比色，血清中DBil含量較低，被釩酸氧化后呈現(xiàn)的綠色較淺，被血紅蛋白的顏色掩蓋了，使結(jié)果出現(xiàn)負值；且對含量較低的DBil而言，血紅蛋白的顏色過濃，其溶血因素與未溶血因素之間不存在線性回歸關系的原因可能就在此。

在臨床實際工作中樣本溶血是在所難免，且溶血程度也各有不同，不同程度的溶血對檢驗結(jié)果的影響也不盡相同。我們研究不同溶血程度對常見生化指標的影響，并計算出其回歸方程，便于我們估算出溶血樣本常見生化指標的真實濃度。龍躍兵等[5]也報道回歸方程對溶血標本的部分檢驗項目有一定的校正作用，具有一定的臨床價值。但是本研究也存在一些局限性,首先樣本量較小,難免發(fā)生機遇偏倚和誤差增加的情況;其次由于采用單中心研究,納入樣本均為本院體檢樣本,可能存在選擇性偏倚。據(jù)此做出的回歸方程對于判斷可能有一定的差異。仍需多中心、大樣本的隨機對照研究進一步加以驗證。

[1]陳秀,彭海林.溶血對常規(guī)生化檢驗結(jié)果的影響[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2009,27(6):693-694.

[2]張愛華,肖中華,王小芳.紅細胞溶解液部分生化指標結(jié)果及其影響[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2012,30(4):396-397.

[3]毛小君.淺談臨床血清標本溶血對自動生化儀檢驗結(jié)果的影響[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2012,30(1):93.

[4]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:456-457.

[5]龍躍兵,朱偉斌,章美燕.溶血對生化檢驗結(jié)果準確性的影響及校正方法的探討[J].廣東醫(yī)學,2011,32(12):1562.

R446.11+2

B

1674-1129(2014)04-0491-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.04.054

2014-04-08；

2014-05-22)

撫州市指導性科技計劃項目(編號：20130243)