林貴富

（1.江西省贛州市章貢區(qū)農(nóng)業(yè)和糧食局能源辦，贛州341004；2.江西省贛州市章貢區(qū)農(nóng)業(yè)和糧食局動(dòng)物防疫檢疫站，贛州341004；3.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福州350013）

開產(chǎn)麻鴨坦布蘇病毒感染的診斷

謝海軍1林貴富1蔡小敏2陳紅梅3 傅光華3

（1.江西省贛州市章貢區(qū)農(nóng)業(yè)和糧食局能源辦，贛州341004；2.江西省贛州市章貢區(qū)農(nóng)業(yè)和糧食局動(dòng)物防疫檢疫站，贛州341004；3.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，福州350013）

2013年9月，江西省贛州市章貢區(qū)沙石鎮(zhèn)東風(fēng)村某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的220日齡麻鴨2 100余羽，產(chǎn)蛋率在一周內(nèi)從87%降至15%左右，共死亡11羽。經(jīng)過(guò)臨床流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確定該病為鴨坦布蘇病毒病。

麻鴨鴨坦布蘇病毒診斷

2013年9月，江西省贛州市章貢區(qū)沙石鎮(zhèn)東風(fēng)村某養(yǎng)殖戶飼養(yǎng)的220日齡麻鴨2 100余羽，產(chǎn)蛋率在一周內(nèi)從87%降至15%左右，共死亡11羽。經(jīng)過(guò)臨床流行病學(xué)調(diào)查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)確定該病例為鴨坦布蘇病毒病?，F(xiàn)將具體的診治情況報(bào)道如下。

1 臨床癥狀

患鴨表現(xiàn)精神沉郁、食欲減退，有的患鴨排綠色稀糞。

2 病理變化

剖檢病死鴨可見卵泡膜出血，卵泡變性、液化，有的卵泡破裂；肝臟局灶性出血、腦組織輕度出血；其他臟器無(wú)肉眼可見病變。

3 實(shí)驗(yàn)室檢查

3.1 細(xì)菌分離無(wú)菌取病死鴨的腦組織，接種血瓊脂平板于37℃溫箱有氧條件下和燭罐中分別培養(yǎng)24～48 h，結(jié)果培養(yǎng)48 h后未見細(xì)菌生長(zhǎng)。

3.2 病毒分離與鑒定對(duì)嚴(yán)重出血、壞死的卵泡膜按照組織重量1∶4加入滅菌PBS緩沖液，勻漿后反復(fù)凍融3次，10 000 r/min離心5 min，取上清液用220 nm濾膜過(guò)濾，濾液經(jīng)尿囊腔接種11胚齡番鴨胚，每枚胚0.5 mL，每天觀察2次，另設(shè)空白對(duì)照，收集24～96 h死亡鴨胚的胚液，進(jìn)行細(xì)菌污染檢驗(yàn)和雞紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，結(jié)果無(wú)細(xì)菌污染，也無(wú)血凝活性，置-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

取病毒液按10 000 r/min、4℃離心10 min以去除雜質(zhì)，收集上清液參照TRIzol說(shuō)明書操作對(duì)病毒RNA進(jìn)行提取，最后每250μL尿囊液的病毒RNA用5μL DEPC水溶解。反轉(zhuǎn)錄按M-MLV Reverse Transcriptase說(shuō)明書進(jìn)行。

參照鴨I型副粘病毒、鴨呼腸孤病毒、禽流感病毒、鴨坦布蘇病毒、減蛋綜合征病毒的檢測(cè)引物進(jìn)行PCR檢測(cè)。擴(kuò)增體系為50μL，其中2×GoTaq Master Green Mix 25μL、上下游引物（20μm/mL）各1μL、c DNA模板1μL，補(bǔ)充滅菌去離子水至總體積50μL。反應(yīng)程序是94℃5 min；94℃30 s、53℃30 s、72℃45 s，35個(gè)循環(huán)；72℃10 min。取PCR產(chǎn)物5μL，在1.0%瓊脂糖凝膠上電泳，應(yīng)用凝膠成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察拍照。結(jié)果表明，用鴨坦布蘇病毒特異性引物可擴(kuò)增到1條約330 bp的特異性片段（見圖1），而鴨I型副粘病毒、鴨呼腸孤病毒、禽流感病毒、減蛋綜合征病毒未擴(kuò)增到相應(yīng)片段。

圖1 所分離病毒的RT-PCR鑒定（注：M：DL 2 000 Marker；1：所分離病毒的擴(kuò)增結(jié)果；2：鴨I型副粘病毒；3：鴨呼腸孤病毒；4：禽流感；5：減蛋綜合征病毒；6：空白對(duì)照）

4 診斷

據(jù)該麻鴨場(chǎng)的發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變以及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果，確診所送檢的病例為鴨坦布蘇病毒病。

5 小結(jié)與討論

1）2010年4月，鴨坦布蘇病毒病作為一種新發(fā)疫病首先發(fā)現(xiàn)于浙江、福建等地[1]，隨后在華東、華南、華北、華中等地區(qū)流行[2-5]，對(duì)我國(guó)養(yǎng)鴨業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。該病病原是鴨坦布蘇病毒，是一種危害我國(guó)種鴨、蛋鴨的新病毒，該病毒幾乎可感染所有品種的鴨，其中對(duì)麻鴨的致病力最強(qiáng)，主要侵害鴨的生殖系統(tǒng)，致使種（蛋）鴨發(fā)熱、采食量和產(chǎn)蛋量急劇下降。

2）對(duì)于鴨坦布蘇病毒病的診斷，可根據(jù)鴨群的發(fā)病情況、臨床癥狀、剖檢病變進(jìn)行初步的判斷，再經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行確診。實(shí)驗(yàn)室診斷方法很多，其中最實(shí)用、快速的還是RT-PCR[6]方法，即簡(jiǎn)單、快捷地檢測(cè)病料以達(dá)到迅速診斷的目的，為患鴨群的后續(xù)治療贏得寶貴的時(shí)間。

3）目前針對(duì)該病的預(yù)防用疫苗還處于研究階段，對(duì)發(fā)病鴨群在確診的前提下，通過(guò)飲水或飼料途徑投放抗病毒藥物進(jìn)行治療，同時(shí)添加多維、多糖等以提高鴨群的免疫力，使用廣譜抗生素以防止繼發(fā)細(xì)菌感染。

[1]曹貞貞，張存，黃瑜，等．鴨出血性卵巢炎的初步研究[J]．中國(guó)獸醫(yī)雜志，2010，46（12）：3-6．

[2]萬(wàn)春和，施少華，程龍飛，等．一種引起種（蛋）鴨產(chǎn)蛋驟降新病毒的分離與初步鑒定[J]．福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，25（6）：663-666．

[3]滕巧泱，顏丕熙，張旭，等．一種新的黃病毒導(dǎo)致蛋鴨產(chǎn)蛋下降及死亡[J]．中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2010，18（6）：1-4．

[4]廖敏，牟小東，耿陽(yáng)，等．鴨傳染性產(chǎn)蛋減少癥（暫定名）的病原分離初報(bào)[J]．中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2011，19（1）：22-26．

[5]劉友生，彭春香，黃瑜，等．2010-2011年我國(guó)部分地區(qū)鴨坦布蘇病毒感染及分子變異分析[J]．中國(guó)動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào)，2012，20（1）：47-53．

[6]萬(wàn)春和，施少華，程龍飛，等．鴨出血性卵巢炎病毒RTPCR檢測(cè)方法的建立[J]．福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，26（1）：10-12．

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1003-4331（2014）04-0074-02