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（廣州市動物疫病預(yù)防控制中心，廣東廣州 510440）

廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)野鳥和蚊子分布及其西尼羅病毒感染情況調(diào)查

張海冰，段曉冬，沈 丹，鄭麗蘭，楊穗娟，譚 諾，張海明

（廣州市動物疫病預(yù)防控制中心，廣東廣州510440）

[目的] 了解廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)野鳥和蚊子的種類、數(shù)量和分布等情況及其西尼羅病毒感染的情況。[方法] 對鳥類在沿途設(shè)網(wǎng)抓捕取樣；蚊蟲采用紫外燈誘捕和網(wǎng)捕進行樣品采集，隨后利用熒光定量RT-PCR方法對西尼羅病毒進行檢測。[結(jié)果] 2012—2013年該地區(qū)共捕獲鳥類110種381只，隸屬于12目37科76屬；共捕獲蚊蟲5種，共計3048只，其中淡色庫蚊占50.66%、三帶喙庫蚊占32.12%、褐尾庫蚊占12.99%、中華按蚊占3.61%和白紋伊蚊0.62%；對381份鳥泄殖腔棉拭子和3048份蚊子樣品進行了西尼羅病毒的檢測，結(jié)果均為陰性。[結(jié)論] 雖然本次調(diào)查未發(fā)現(xiàn)鳥類及蚊子感染西尼羅病毒，但本地區(qū)存在西尼羅病毒引入以及在本地區(qū)傳播的條件，存在西尼羅病毒病發(fā)生風(fēng)險。因此，為繼續(xù)維持廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)的無疫狀態(tài)，有必要對媒介鳥類及蚊蟲開展長期的調(diào)查和監(jiān)測。

無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)；西尼羅病毒；野鳥；蚊子；調(diào)查

西尼羅病毒病是由西尼羅病毒（WNV）引起的一種人畜共患的自然疫源性疾病[1]，可以感染鳥、蚊子和馬、人等哺乳動物。其中，鳥是WNV的主要攜帶者，而蚊蟲則是其主要的傳播媒介[2]。該病于1937年首次被確認以來，近幾年在非洲、南歐、亞洲等地區(qū)以及俄羅斯、中東、印度和澳大利亞等地區(qū)普遍流行。

據(jù)統(tǒng)計，在1999—2008年的10年中，美國共有28961人感染W(wǎng)NV，其中1131人死亡，而到了2012和2013年，2年時間里就導(dǎo)致了15246人感染和507人死亡，波及全美48個州[3]。由此可見，西尼羅河病毒病日趨嚴重，引起了各國的極大關(guān)注，世界衛(wèi)生組織已將其列為當(dāng)前全球的重大流行病之一。雖然我國到目前為止尚未有人和動物感染該病毒的報道[4]，但隨著經(jīng)濟全球化等因素的影響，國際人員、物資等流動加快，感染者、帶毒畜禽和媒介蚊蟲傳入我國的可能性日益增加。

廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)（以下簡稱從化無疫區(qū)）所在的廣東省地處熱帶亞熱帶，氣溫適宜、雨量充沛，有豐富的蚊蟲種類和野生鳥類資源，非常適合WNV的流行。而從化無疫區(qū)是我國內(nèi)地首個同時獲得國家和國際認可的動物疫病無疫區(qū)[5]，保持西尼羅病毒病的無疫狀態(tài)是從化無疫區(qū)維護工作的重中之重。因此，為了解廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)野鳥和蚊子分布及其西尼羅病毒感染情況，我們對從化無疫區(qū)的核心區(qū)、監(jiān)控區(qū)和緩沖區(qū)進行了為期一年的監(jiān)測。

1 材料與方法

1.1 試劑

西尼羅病毒熒光定量RT-PCR檢測試劑盒購自廣州市維伯鑫生物科技有限公司，西尼羅病毒陽性對照購自美國NVSL，RNA提取試劑購自美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司。

1.2 調(diào)查范圍

根據(jù)《廣東省從化馬屬動物疫病區(qū)域化管理辦法》的規(guī)定，對核心區(qū)和監(jiān)控區(qū)（從化市）及緩沖區(qū)（白云區(qū)、花都區(qū)、蘿崗區(qū)、清城區(qū)、增城市、龍門縣、佛岡縣、新豐縣）進行調(diào)查。

1.2.1 野鳥調(diào)查采樣點。共選擇14個采樣點，主要分布于林緣或林間空地附近，并兼顧有灌木叢或小喬木等適合野鳥棲息的環(huán)境。具體野鳥采樣點分布和棲息環(huán)境信息見圖1和表1。

圖 1 野鳥采樣點示意圖

1.2.2 蚊子調(diào)查采樣點。根據(jù)蟲媒生物的活動特性以及環(huán)境受人為干擾的程度、地形、植被類型豐富度等指標(biāo)，在核心區(qū)和監(jiān)控區(qū)共選擇12個采樣點（核心區(qū)和監(jiān)控區(qū)分別有7個和5個），具體的蚊子采樣點分布見圖2。

圖 2 蚊子采樣點示意圖

1.3 采樣時間的選擇

對各個采樣點分別在4個季節(jié)進行調(diào)查采樣（見表1）。

表 1 調(diào)查日期信息表

1.4 采集方法

1.4.1 鳥類采集方法。通過線路法和網(wǎng)捕法對鳥類種類、數(shù)量與分布開展調(diào)查，采樣時間通常選擇在日出后3小時左右開始線路調(diào)查。

1.4.2 蚊蟲采集方法。采用紫外燈誘蚊法和網(wǎng)捕法進行蚊子的采集，并保存于液氮。

1.5 核酸提取

蚊子樣品用無菌生理鹽水洗3遍，放入2mL研磨管中，加入1.0mL研磨液，放入羅氏MagNALyser全自動組織勻漿儀進行研磨取上清液進行核酸提取。鳥泄殖腔棉拭子震蕩2分鐘后直接取液體進行核酸提取。按照美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司RNA/DNA磁珠提純試劑盒說明書逐步進行，提取的核酸保存于-80℃。

1.6 西尼羅病毒熒光RT-PCR檢測

按照廣州市維伯鑫生物科技有限公司西尼羅河病毒核酸檢測試劑盒說明書，對鳥泄殖腔棉拭子和蚊子進行西尼羅病毒熒光RT-PCR檢測，同時在每次檢測時設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)陽性對照。

2 結(jié)果

2.1 野鳥季節(jié)性消長規(guī)律

本次調(diào)查鳥類共設(shè)網(wǎng)137張次，有效調(diào)查時間6108h。各季節(jié)中各調(diào)查位點的采樣數(shù)量見表2。其中，冬季采集的鳥類樣品物種數(shù)量最多，達28種；秋季采集的鳥類樣品個體數(shù)量最多，有133只（見圖3）。

表 2 各季節(jié)各位點野鳥采樣地點和季節(jié)分布

圖 3 不同季節(jié)鳥類樣品物種數(shù)及個體數(shù)分布

2.2 野鳥的種類和數(shù)量

共調(diào)查及記錄鳥類110種，隸屬于12目37科76屬，共381只。對各目鳥類進行統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示調(diào)查區(qū)內(nèi)雀形目物種占據(jù)明顯優(yōu)勢，占總物種數(shù)的73.7%；其次為鵑形目和是佛法僧目（見圖4）。

圖4調(diào)查的野鳥各目物種比例

統(tǒng)計各科鳥類物種的比例，結(jié)果顯示調(diào)查區(qū)內(nèi)鶇科物種占明顯優(yōu)勢，共有14種，占總物種數(shù)的12.8%；其次為鵯科和畫眉科，分別記錄了9種，分別占總物種數(shù)的8.3%；第三的是杜鵑科，記錄了6種，占總物種數(shù)的5.6%。另外，共有12個科僅記錄到1種鳥，占總科數(shù)的32.4%。具體見表3。

2.3 野鳥各居留型比例

對調(diào)查記錄的110種鳥類進行居留型統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示調(diào)查區(qū)內(nèi)野鳥以留鳥為主，共記錄了74種，占總物種數(shù)的67.3%；其次是冬候鳥，記錄了21種，占總物種數(shù)的19.1%，具體如圖5所示。此外，還分別統(tǒng)計了四個季節(jié)中，調(diào)查記錄的各居留型鳥類物種占本季度調(diào)查記錄總物種數(shù)的比例和每個季節(jié)的平均記錄物種數(shù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4個季節(jié)記錄的物種以留鳥居多，群落中冬候鳥會隨季節(jié)的變化，在春秋兩季遷徙和過境，使本地區(qū)鳥類數(shù)量發(fā)生變化，春末夏初和秋末冬初形成兩個季節(jié)性高峰；另外，4個季節(jié)平均野鳥物種數(shù)都維持在一個較為平穩(wěn)的數(shù)值，在冬季未見有大量鳥類遷飛進入研究區(qū)內(nèi)。具體見圖6和圖7。

2.4 蚊蟲種類構(gòu)成

表 3 2012—2013年度廣東從化無疫區(qū)調(diào)查的野鳥各科物種數(shù)量與比例

圖 5 2012—2013年度廣東從化無疫區(qū)采樣鳥類居留型比例圖

圖 6 2012—2013年度廣東從化無疫區(qū)不同季度野鳥居留型比分布

圖 7 2012-2013年度廣東從化無疫區(qū)各季節(jié)野鳥平均記錄物種數(shù)分布

本次調(diào)查共捕獲蚊子5種，共計3048只，其中淡色庫蚊和三帶喙庫蚊為優(yōu)勢種群，分別占總數(shù)的50.66%和32.12%；其次為褐尾庫蚊、中華按蚊和白紋伊蚊，分別為12.99%、3.61%和0.62%，各調(diào)查點蚊子捕捉數(shù)量和種類見表4。

2.5 蚊子密度消長情況

在2012—2013年度各季節(jié)所捕捉到的蚊子的數(shù)量進行了統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)夏季和秋季最多，冬季最少，春季居中，具體見圖8。

圖8 蚊子的季節(jié)動態(tài)變化

2.6 WNV檢測結(jié)果

2012年7—8月、10—11月和2013年1—2月、4—5月，分別對從化市及白云區(qū)、花都區(qū)、蘿崗區(qū)、清城區(qū)、增城市、龍門縣、佛岡縣和新豐縣的野鳥和蚊子進行了西尼羅病毒的檢測，共檢測野鳥樣品381份，蚊子樣品3048只，結(jié)果均為陰性。

3 討論

鳥是WNV的自然宿主和擴散宿主[6]，目前已在332種鳥體內(nèi)檢測到西尼羅病毒，其中又以雀形目鳥類為主[7]。而且目前的研究認為[8]，一個地區(qū)鳥群的總數(shù)、密度和種類的多樣性，可能與本地區(qū)人群暴發(fā)西尼羅病毒病有密切的聯(lián)系。本次對廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)內(nèi)野鳥品種和數(shù)量的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)存在體內(nèi)檢測到西尼羅病毒的雀形目、雞形目等鳥類[9]，并且雀形目物種在調(diào)查的鳥類物種中占據(jù)明顯優(yōu)勢，占總物種數(shù)的73.7%，而且本地區(qū)鳥類的種類和數(shù)量均較多，提示一旦西尼羅病毒隨候鳥、寵物鳥、蚊蟲等進入從化無疫區(qū)，可能會在本地區(qū)持續(xù)存在和傳播。另外，一直以來普遍認為，廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫區(qū)所在的廣東省位于我國三大候鳥遷徙線路之一的線路上，南來北往的候鳥都會在該區(qū)域停歇，這也增加了疫源候鳥將WNV等外來病病原傳入從化無疫區(qū)的可能性。但我們的調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本地區(qū)野鳥在入冬前飛停本地區(qū)歇息，導(dǎo)致物種數(shù)量有一定程度的上漲 ；進入冬季后，歇息的鳥類已飛往越冬場地，而直接導(dǎo)致物種數(shù)量回落；而到春季時，冬候鳥從越冬場地回遷，又在本地區(qū)停歇，造成物種數(shù)量的升高。這說明從化無疫區(qū)雖然位于冬候鳥鳥類遷飛路線上，但更多是一個冬候鳥遷飛南方的短暫停歇點，并不是冬候鳥的主要越冬場所，調(diào)查發(fā)現(xiàn)候鳥在本地區(qū)鳥類的物種構(gòu)成中比例相對較小。從化無疫區(qū)范圍內(nèi)的鳥類密度呈基本維持平穩(wěn)的狀態(tài)，并沒有因為冬季候鳥的遷飛使得無疫區(qū)內(nèi)鳥類種群密度發(fā)生突增。從化無疫區(qū)內(nèi)鳥類也未發(fā)現(xiàn)有明顯的集群現(xiàn)象。因此，再結(jié)合本次調(diào)查采樣的野鳥樣品西尼羅病毒檢測均為陰性的結(jié)果，我們認為從化無疫區(qū)雖然存在西尼羅病毒隨候鳥傳播進入的風(fēng)險，但風(fēng)險較低，與彭聰?shù)萚10]的研究結(jié)論基本一致。

蚊蟲被認為是西尼羅病毒的主要傳播媒介，其中庫蚊特別是尖音庫蚊復(fù)合組成員被認為是最重要的媒介[2]。本次從化無疫區(qū)蚊蟲調(diào)查結(jié)果顯示，庫蚊所占比例達到95%以上，是絕對的優(yōu)勢種類，其中作為尖音庫蚊復(fù)合組成員之一的淡色庫蚊在所有調(diào)查的蚊蟲數(shù)量中最多，達到了50.66%，其次為三帶喙庫蚊（32.12%），這些蚊種均屬于可能在我國攜帶和傳播WNV的蚊蟲[11]。根據(jù)蚊子的生活習(xí)性，一般在每年4月開始出現(xiàn)，至8月中下旬達到活動高峰，秋天氣候變冷溫度降到10℃以下時，蚊子就會停止繁殖，并出現(xiàn)大量死亡，有極少的蚊子會存活，而我們的調(diào)查結(jié)果也基本符合以上所描述的蚊子消長規(guī)律，在夏季達到了高峰，冬季蚊子數(shù)量極少。雖然目前的研究認為，鳥類遷徙是蚊子其感染人和哺乳動物的主要傳播媒介[12]，但也有例外，比如美國WNV的出現(xiàn)就是由于貨物攜帶已感染病毒的蚊蟲及感染病毒的旅行者從遙遠的西亞穿過大西洋進入美國造成的[13]。因此，從化無疫區(qū)所在的廣東省作為我國重要的進出口貿(mào)易大省，每年有數(shù)量巨大的物品從西尼羅病毒病疫區(qū)進入本地區(qū)，該種傳入的風(fēng)險也不容忽視。因此，雖然本地區(qū)存在可能傳播WNV的蚊子，而且也可能通過貿(mào)易等途徑引入病毒，但結(jié)合目前我國還未發(fā)現(xiàn)西尼羅病毒的情況[12]以及本次調(diào)查對蚊子進行西尼羅病毒檢測均為陰性的結(jié)果，我們認為從化無疫區(qū)雖然存在西尼羅病毒引入和傳播的風(fēng)險，但風(fēng)險較低，與前幾年的研究結(jié)論一致[10，14]。

綜上所述，通過本次調(diào)查，進一步弄清了廣東從化無規(guī)定馬屬動物疫病區(qū)內(nèi)野鳥和蚊子的種類、數(shù)量、分布以及季節(jié)變化等情況，對其感染西尼羅病毒的情況進行了病原學(xué)檢測，結(jié)果無論是鳥類還是蚊子，均未感染西尼羅病毒，結(jié)果與國內(nèi)其他研究[14，15]一致，進一步證明了我國目前還沒有西尼羅病毒。但是，調(diào)查也發(fā)現(xiàn)本地區(qū)存在一定數(shù)量和種類的可以傳播西尼羅病毒的鳥和蚊子，鑒于目前國際該病流行范圍越來越大和本地區(qū)的國際貿(mào)易、人員交流日益頻繁，本地區(qū)存在一定的輸入該病的風(fēng)險，為繼續(xù)保持從化無疫區(qū)的無疫狀態(tài)，必須繼續(xù)開展本地區(qū)的野生動物及蟲媒的監(jiān)測和調(diào)查，并進一步加強口岸的監(jiān)管與監(jiān)測，以防該病通過口岸傳入。

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Investigation on Distribution of Wild Birds and Mosquitoes and West Nile Virus Infection Status in the Specif c Equine Disease-free Zone of Conghua，Guangdong Province

Zhang Haibing，Duan Xiaodong，Shen Dan，Zheng Lilan，Yang Suijuan，Tan Nuo，Zhang Haiming

（Guangzhou Animal Disease prevention and Control Center，Guangdong，Guangzhou，510440）

ObjectiveTo investigate the species，number and distribution of wild birds and mosquitoes and West Nile virus （WNV）the specific equine disease-free zone of Conghua，Guangdong.MethodThe birds were captured on the migration routes with nets，and mosquitoes by Ultraviolet light trapping and nets.The samples were detected with real-time RT-PCR assay for West Nile virus.ResultAll the 381 birds of 110 species and 3048 mosquitoes of 5 species collected were negative for West Nile virus.ConclusionNo WNV-positive birds and mosquitoes were detected in the survey.There were amount of potential vectors of WNV found in the zone.To maintain the disease-free status of the specif c equine disease-free zone of Conghua，further work was needed to monitor the bird and mosquito activities for long time.

West Nile virus；wild bird；mosquito；investigation

R373.3

：A

：1005-944X（2014）11-0076-05

張海明