HPLC法同時(shí)測(cè)定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量

宋 純

（湘潭市中心醫(yī)院，湖南湘潭411100）

HPLC法同時(shí)測(cè)定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量

宋 純

（湘潭市中心醫(yī)院，湖南湘潭411100）

目的建立同時(shí)測(cè)定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素含量的方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱：Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸（8∶92）；檢測(cè)波長(zhǎng)：334 nm；流速：1 mL·min－1；柱溫：30℃。結(jié)果秦皮甲素線性范圍為47.2～472 ng，r＝0.999 0，秦皮乙素線性范圍為45.6～456 ng，r＝0.999 2，秦皮甲素和秦皮乙素平均加樣回收率分別為101.09%和100.51%。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，適用于腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；腹瀉康片；秦皮甲素；秦皮乙素

隨著社會(huì)生活節(jié)奏的加快，飲食失調(diào)和不潔引起胃腸功能紊亂，導(dǎo)致感染性腹瀉的現(xiàn)象日益增加，目前臨床采用抗生素治療感染性腹瀉比較普遍，不合理使用、濫用抗生素導(dǎo)致耐藥菌株不斷增多，治療難度加大［1，2］，而運(yùn)用中藥治療感染性腹瀉可減少抗生素使用量，一定程度上能緩解抗生素耐藥問題。腹瀉康片處方由秦皮、木香等四味藥材組成，源自臨床應(yīng)用多年的方劑，對(duì)感染性腹瀉有很好的治療效果，具有清熱燥濕，行氣止痛，澀腸止瀉之功效。主要用于感染性腹瀉，癥見瀉下急迫或?yàn)a下不爽，大便色黃穢臭，肛門灼熱?，F(xiàn)代藥理研究表明秦皮主要有效成分秦皮甲素、秦皮乙素具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎作用［3～6］，現(xiàn)參考文獻(xiàn)方法［7～12］建立了HPLC法同時(shí)測(cè)定腹瀉康片中秦皮甲素和秦皮乙素的含量，以建立產(chǎn)品質(zhì)量控制方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津LC－20A高效液相色譜儀，Mettler AE－200型電子分析天平，TDZ4－WSD低速臺(tái)式離心機(jī)（長(zhǎng)沙湘儀），HS－2060超聲清洗器（上?？茖?dǎo)）。

1.2 試藥 秦皮甲素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110740－200104），秦皮乙素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)：110741－200506），腹瀉康片（自制，0.45 g／片，批號(hào)：20130406、20130408、20130410）。乙腈色譜純，水為純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Kromasil C18柱（4.6 mm× 250 mm，5μm）。流動(dòng)相：乙腈－0.1%磷酸（8∶92）。檢測(cè)波長(zhǎng)：334 nm。流速：1mL·min－1。柱溫：30℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的配制 精密稱取秦皮甲素對(duì)照品11.8 mg、秦皮乙素對(duì)照品11.4 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密吸取2 mL置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得含秦皮甲素47.2μg·mL－1、秦皮乙素45.6 μg·mL－1的對(duì)照品溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 取本品適量，除去包衣，研細(xì)，取細(xì)粉約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇50 mL，密塞稱定重量，加熱回流60 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過0.45μm微孔薄膜作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照品溶液的制備 取按處方除秦皮外的其他藥材，照“2.2.2”項(xiàng)下的制備方法處理，即得陰性對(duì)照品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密吸取秦皮甲素、秦皮乙素對(duì)照品混合溶液（濃度分別為47.2、45.6μg·mL－1）1、2、4、6、8、10μL進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積積分值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。秦皮甲素回歸方程為：Y＝963.16X＋2 863.1，r＝0.999 0，表明秦皮甲素在47.2～472 ng范圍內(nèi)具有良好的線形關(guān)系；秦皮乙素回歸方程為：Y＝1 636.2 X＋5 842.6，r＝0.999 2，表明秦皮乙素在45.6～456 ng范圍內(nèi)具有良好的線形關(guān)系。

2.4 陰性對(duì)照品溶液的考察 分別吸取一定體積的陰性對(duì)照品溶液、樣品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明陰性對(duì)照品溶液對(duì)樣品溶液的測(cè)定無干擾，見圖1～3。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖 1.秦皮甲素；2.秦皮乙素

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定其峰面積積分值，結(jié)果秦皮甲素RSD為1.46%，秦皮乙素RSD為1.67%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品（批號(hào)：20130406），按“2.2.2”項(xiàng)下的方法分別制備6份樣品溶液進(jìn)樣10μL，秦皮甲素和秦皮乙素RSD分別為1.32%和1.05%。

圖2 樣品溶液色譜圖

圖3 陰性對(duì)照品溶液色譜圖

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24 h進(jìn)樣10μL，秦皮甲素和秦皮乙素RSD分別為0.97%和0.94%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn) 精密稱取秦皮甲素23.42 mg和秦皮乙素30.86 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得儲(chǔ)備液。精密稱取已知含量的樣品約0.25 g，共6份，置具塞錐形瓶中，分別精密加入1.0 mL儲(chǔ)備液（秦皮甲素對(duì)照品0.468 4 mg，秦皮乙素對(duì)照品0.617 2 mg），然后按上述方法制備供試品溶液，并測(cè)定含量，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）

2.9 樣品測(cè)定 取3批不同批號(hào)樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法分別制備樣品溶液，進(jìn)樣10μL，樣品含量測(cè)定結(jié)果見表2。

表2 含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 樣品前處理方法 對(duì)比了回流提取和超聲提取兩種方法，回流提取法對(duì)秦皮甲素和秦皮乙素提取率略高于超聲法；對(duì)比了回流40、60、80 min提取效果，60min基本提取完全，故樣品前處理方法定為回流提取60 min。

3.2 色譜條件 色譜條件參照《中國藥典》2010年版（一部）秦皮的含量測(cè)定方法，陰性對(duì)照液未見干擾，秦皮甲素、秦皮乙素色譜峰與樣品中其他組分色譜峰可達(dá)基線分離，理論板數(shù)按秦皮乙素峰計(jì)算在5 000以上，因此上述色譜條件可用于本品中秦皮甲素、秦皮乙素的含量測(cè)定。

3.3 含量限度 測(cè)定3批樣品中秦皮甲素與秦皮乙素的總量，分別為1.768、1.764、1.782 mg／片，其平均值為1.771 mg／片。根據(jù)藥材中秦皮甲素和秦皮乙素的含量（秦皮甲素0.43%、秦皮乙素0.59%，合計(jì)1.02%）計(jì)算轉(zhuǎn)移率，3批樣品秦皮甲素轉(zhuǎn)移率分別為：53.50%、53.08%、53.92%，3批樣品秦皮乙素轉(zhuǎn)移率分別為51.17%、51.28%、51.58%?？紤]中藥材的含量波動(dòng)較大及大生產(chǎn)時(shí)的轉(zhuǎn)移率（按50%計(jì)），結(jié)合《中國藥典》對(duì)秦皮藥材的含量限度規(guī)定（不少于0.80%），暫定本品限度為每片含秦皮以秦皮甲素與秦皮乙素的總量計(jì)不得少于1.3 mg。3.4 小結(jié) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該法簡(jiǎn)便可行，重現(xiàn)性好，可作為本品的質(zhì)量控制方法。

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Determ ination of esculin and esculetin in Fuxiekang Tablets by HPLC

SONG Chun
（Xiangtan Center Hospital，Xiangtan 411100，China）

ObjectiveTo establish a determination method of esculin and esculetin in Fuxiekang Tablets by HPLC.M ethodsHPLCmethod was set up，column was Kromasil C18，themobile phase was acetonitrile－0.1%phosphate acid solution（8∶92），with the flow rate of 1.0 mL·min－1，the detection wavelength was 334 nm，column temperature was 30℃.ResultsThe linear range of esculin was 47.2～472 ng，r＝0.999 0，the average recovery was 101.09%.The linear range of esculetin was 45.6～456 ng，r＝0.999 2，the average recovery was 100.51%.ConclusionThemethod was simple，accurate and stable，which can be used for the quality control of Fuxiekang Tablets.

HPLC；Fuxiekang Tablets；Esculin；Esculetin

R927.2

A

2095－5375（2014）11－0628－003

宋純，女，副主任藥師，研究方向：藥物分析，E－mail：16945548＠qq.com