楊漾，嚴方，陳金龍，葉慧，鄭楓，李博，狄斌

（中國藥科大學藥物分析教研室，江蘇 南京 210009）

藥物分析在藥物的研究與開發(fā)、制備與生產以及質量監(jiān)控等方面起著不可或缺的重要作用。近些年來，我國在藥物分析技術應用研究領域取得了一定進展。本文通過對2012年我國學者在國內外發(fā)表的相關研究論文進行檢索和整理，分類綜述各類藥物或生物樣本的過程分析技術、高通量篩選分析技術、固態(tài)性質表征分析技術、雜質譜檢測分析技術、體內樣本分析技術、中藥分析技術、生化藥物分析技術等的應用研究新進展。

1 過程分析技術

傳統(tǒng)的藥物分析采用離線方式對制藥過程中的原料、中間產物以及最終產物進行分析，數據滯后于生產過程，并不能真實監(jiān)測和反映藥物在線生產中的質量。而過程分析技術（process analytical technique, PAT）則通過即時檢測分析，可實現(xiàn)對藥物生產過程的在線質量跟蹤，因而符合“質量源于設計”（quality by design,QBD）的藥物質量觀的理念。目前，在中藥提取工藝研究中，所用PAT主要為在線近紅外（NIR）光譜分析技術。例如，Wu等[1]通過在線采集NIR光譜，并以芍藥苷、苯甲酸和赤芍標準提取物的測定值作為對照，采用偏最小二乘法建立模型對赤芍的提取過程進行了在線檢測分析。李文龍等[2]則通過在線采集黃芪提取過程中提取液的NIR光譜，同時采用高效液相色譜-質譜聯(lián)用（HPLC-MS）方法測得提取液中黃芪皂苷Ⅱ、異黃芪皂苷Ⅱ、黃芪皂苷Ⅰ和黃芪甲苷等4種成分的質量濃度，利用偏最小二乘法建立了這4種成分及黃芪總皂苷的定量分析模型。結果顯示，所建立的模型能夠及時準確地反映提取液中黃芪總皂苷的質量濃度信息，實現(xiàn)了以黃芪總皂苷為檢測指標、對黃芪提取過程的在線監(jiān)測，為黃芪提取過程的終點判斷和工藝優(yōu)化提供了有效手段。而Xu等[3]在利用在線NIR光譜研究清開靈注射液中間體金銀花的醇沉工藝時，采用簡單區(qū)間算法（simple interval calculation, SIC）建立了綠原酸的定量分析模型，并實現(xiàn)了工藝過程的在線分析。該模型較采用偏最小二乘法得到的模型更為可靠，能滿足金銀花醇沉過程的在線質量檢測要求。

2 高通量篩選分析技術

所謂高通量篩選（high throughput screening）即以分子水平和細胞水平的實驗方法為基礎，通過微型化和自動化的分析檢測技術，實現(xiàn)大量實驗并行運作，在短時間內對大量候選化合物進行篩選。目前，高通量篩選主要通過微孔板/微陣列和微流控芯片等2種分析技術實現(xiàn)。

2.1 微孔板/微陣列技術

近年來，微孔板/微陣列技術的應用研究重點是發(fā)展密度更高和體積更小的檢測分析平臺，且大多用于酶或受體的抑制劑/激動劑的高通量篩選。張玥等[4]通過在昆蟲細胞中重組表達并分離得到組蛋白去乙?；?（HDAC6）蛋白，建立了HDAC6小分子抑制劑的高通量篩選模型，并通過進一步在384孔板上測定模型的Z'因子，對模型進行了評價。結果證實，該模型能滿足高通量篩選的要求，可用于新型 HDAC6 特異性小分子抑制劑的發(fā)現(xiàn)。

張志明等[5]以結核分枝桿菌的苯丙氨酰-tRNA合成酶（PheRS）為靶點，建立了結核分枝桿菌PheRS抑制劑高通量篩選模型，并用該模型在微孔板上對11 600個化合物和5 200個發(fā)酵液樣品進行篩選，得到了46個陽性樣品。因此，該模型的應用結合對化合物細胞毒性和抗菌活性的進一步篩選，可為尋找新的有效的抗結核藥物奠定基礎。

張麗蓉等[6]以肽脫甲?；福≒DF）為靶點，建立了結核分枝桿菌PDF抑制劑篩選模型，并用該模型在96孔板上對12 400個微生物發(fā)酵粗提物進行了初篩，得到33個陽性樣品，又以抗恥垢分枝桿菌實驗進行復篩，得到8個陽性樣品。

劉媛等[7]將人二型大麻受體（CB2）表達載體與雙報告基因載體共轉染至中國倉鼠卵巢（CHO）細胞中，再通過檢測不同化合物對轉染后CHO細胞熒光素酶表達水平的影響來篩選人CB2激動劑。結果，通過在96孔板上對Z'因子進行評價，證實此篩選模型具有良好的穩(wěn)定性，可用于CB2激動劑的篩選。

此外，微孔板/微陣列技術也被用于抗病毒藥物的高通量篩選。Dai等[8]用轉染pPolI-vluc質粒的人肺癌A549細胞構建甲型流感病毒（IAV）vRNA啟動子抑制劑的高通量篩選平臺，并以該平臺對83種中藥材提取物進行篩選，發(fā)現(xiàn)了35種活性提取物，其中7個此前未見報道；而且，在此基礎上，還發(fā)現(xiàn)這些活性提取物中共有的原矢車菊素對IAV的復制具有良好的抑制作用。

2.2 微流控芯片技術

微流控芯片技術是通過對樣品全分析過程的微縮化和集成化而實現(xiàn)靈敏、快速檢測及高通量輸出，故非常適用于高通量篩選。Liu等[9]設計了包含藥物/基質（medium）濃度梯度發(fā)生器（CGG）、氣動微型閥、細胞培養(yǎng)微腔的多層微流控芯片，并將人肺腺癌A549/DDP細胞株導入芯片的微腔，采用熒光探針DAPI標記，通過考察化合物對A549/DDP細胞凋亡的影響而進行活性篩選。結果，通過對順鉑溶液的測定，證實該微流控芯片可用于細胞水平的高通量篩選。

3 固態(tài)性質表征分析技術

由于潛在固相反應以及不同固態(tài)性質對藥物活性會產生重要影響，因此對固態(tài)原料藥、輔料及其混合物物理性能的分析研究是必要的，尤其是晶型研究應該成為藥物研發(fā)的重要組成部分。

3.1 分子水平表征

近年來，多種新型固態(tài)分子測試技術和方法的出現(xiàn)，為藥物在固態(tài)分子水平上的特征研究提供了有力支持。其中，漫反射紫外/可見（DR-UV/VIS）、傅立葉變換紅外（FT-IR）和漫反射紅外( DR-IR) 等光譜技術已用于研究藥物固相特征和評估藥物中存在的多晶型和水合物，而拉曼光譜( Raman spectrum) 是非常適用于藥物固體表征的另一種分析技術。林琳等[10]建立了測定氟康唑2種晶型（A、B 晶型）的拉曼光譜法，即采用780 nm 色散型拉曼光譜法測得氟康唑2種晶型的拉曼光譜圖，鑒定了不同廠家氟康唑固體口服制劑的晶型類別，并采用拉曼成像技術對制劑含量分布進行了初步研究。NIR光譜可在無需破壞分析物條件下檢測和確定其中所含獨特氫原子官能團，目前已用于藥物水分測定、片劑測試和混合物驗證。劉永等[11]利用NIR光譜手段分別采用單一指標成分和矢量歸一化法測定了三七通舒膠囊粉末混合過程的混合均勻度，為中藥現(xiàn)代化發(fā)展以及粉末混合過程的實時在線質量控制提供一種新方法。固態(tài)核磁共振( solid state NMR，ss-NMR) 光譜法是通過化合物中單個原子的化學環(huán)境而獲得化合物分子水平的特征，分析結果準確、可靠，已較為廣泛地應用于推斷藥物晶型的變化特性，并用于研究因溶劑化物和水合物造成的原子核所處分子環(huán)境的變化。Li等[12]利用ss-NMR光譜技術研究了新型二氫吡啶類鈣離子拮抗劑阿折地平（azelnidipine）的固態(tài)特征，發(fā)現(xiàn)它存在2種晶型和溶致液晶形式（solvatomorphism），溶劑分子與阿折地平分子之間存在的弱氫鍵作用引起阿折地平分子中羰基碳的δ向低場移動，表明ss-NMR光譜技術可用作研究藥物多晶以及溶劑化作用的有力手段。

3.2 微觀粒子水平表征

在藥物開發(fā)的早期階段，藥物樣品的粒徑大小與分布、表面形態(tài)、內部屬性等信息非常重要。尤其在納米藥物出現(xiàn)后，對藥物固態(tài)微觀粒子水平上的考察，對于全面評價藥效至關重要，而光學和電子顯微技術的不斷發(fā)展，為藥物微觀粒子水平上的研究提供了技術保障。目前顯微分析方法已被多國藥典收載，而X 射線衍射（XRD）分析方法主要應用于藥物晶體結構的測定、多晶性和溶劑化物結構的評價、結晶度的評價和相變研究，興起的XRD透射幾何方法和小角度XRD技術可以解決藥物晶型擇優(yōu)取向的問題，實現(xiàn)對微米或納米級藥物晶體的測定。熱分析技術則常用于研究藥物的純度、多晶型、溶劑化以及藥物的降解和輔料相容性，新出現(xiàn)的溫度調幅式示差掃描量熱法（DSC）、超高效DSC等彌補了傳統(tǒng)熱分析技術的不足。

3.3 批量樣品表征

候選藥物進入后期制劑開發(fā)階段后，固體制劑及其輔料成分的物理性質表征即批量樣品表征就顯得至關重要，需要建立賦形劑材料物理特征的綜合評估方案，特別是涉及使用和功能的屬性。批量樣品表征分析的主要指標包括粒徑分布、微?；蚍勰┑臋C械性能等。佟鈴霞等[13]在葉酸偶聯(lián)納米紫杉醇脂質體的制備過程中，利用激光粒度測定儀對該偶聯(lián)納米紫杉醇脂質體的粒徑及多分散指數進行測定，并測定了其藥物包封率，結果顯示，該偶聯(lián)納米紫杉醇脂質體的這些參數與原料藥紫杉醇納米脂質體相比無統(tǒng)計學顯著差異；且實驗發(fā)現(xiàn)，與原料藥紫杉醇納米脂質體相比，該偶聯(lián)納米紫杉醇脂質體仍可有效逃避非網狀內皮系統(tǒng)的捕獲，藥效明顯增強。

4 雜質譜檢測分析技術

4.1 一般雜質檢測

藥物、輔料或制劑在制備和生產過程中都有可能帶入殘留溶劑，目前對殘留溶劑的檢測分析基本上仍是采用氣相色譜（GC）法，如顏敏等[14]即采用頂空氣相色譜法測定了燈盞花滴丸中殘留溶劑。

2008年歐洲藥品管理局（European Medicines Agency，EMA）頒布了關于藥品中金屬催化劑或金屬試劑殘留量限度規(guī)定的指導性文件《Guideline on the Specification Limits for Residues of Metal Catalysts or Metal Reagents》，文件根據毒性的大小將藥品中重金屬限度分為3類，其中血管途徑用藥品中一類重金屬雜質的限度不得高于10-6。因此，需用專屬性更強、靈敏度更高的檢測方法對藥品中不同類別的重金屬進行測定，如采用微波消解-石墨爐原子吸收法測定軟膠囊殼中的重金屬鉻[15]、采用原子熒光光譜法測定傣藥蓬萊葛中的痕量砷和汞[16]以及采用電感耦合等離子體質譜法測定維生素B2注射液中的鎘、砷和鉛[17]。

鑒于中藥材常用硫磺熏蒸方式加工處理，《中國藥典》推薦采用酸蒸餾-碘滴定法測定硫磺熏蒸后中藥材中二氧化硫殘留量，且有研究者對該二氧化硫殘留量測定方法進行了改進[18]，也有人采用離子色譜法測定浙貝母中二氧化硫殘留量[19]。

4.2 特殊雜質檢測

4.2.1 有關物質的檢測 藥物中的有關物質包括起始原料、中間體、副產物和降解產物等雜質，而對其中未知結構的雜質進行鑒定是控制藥物質量的基礎與前提。

由于藥物中有關物質的含量大多少于0.1%，因此要從中直接分離雜質單體較為困難，故一般采用LC-MS法對未知雜質結構進行初步推斷。如，采用液相色譜-電噴霧離子阱質譜法對硫酸衣替米星中的26個雜質結構進行分析[20]；采用液相色譜-電噴霧飛行時間質譜法對瑞替加濱中4個工藝雜質進行結構分析，并通過與合成得到的對照品進行比對而加以確認[21]；采用反相離子對色譜-基質輔助激光解析電離飛行時間質譜法對藥用反義寡核苷酸中的雜質進行鑒定[22]。也有研究者直接從藥物中分離得到未知雜質單體，再通過NMR等多種光譜方法確證其化學結構，如丹參酮ⅡA磺酸鈉中有關物質的分離與結構確證[23]和一種新型血管緊張素AT1受體拮抗劑中4個雜質的結構確證[24]等都是采用了這種方法。

4.2.2 手性雜質的檢測 手性藥物中對映異構體雜質的檢查主要采用手性HPLC法或手性毛細管電泳（CE）法。手性HPLC法中，手性固定相法仍是主流方法，如采用商品化的直鏈淀粉衍生物固定相Chiralpak AD-RH對手性二氫黃酮組分進行手性拆分[25]以及采用自制的新型纖維素手性固定相拆分氯西加酮對映體[26]；手性流動相法的應用也占有一定比例，如采用含磺丁基醚-β-環(huán)糊精的手性流動相添加劑法拆分3種含氮手性藥物[27]。手性CE法中，目前仍較多采用β-環(huán)糊精及其新型衍生物作為添加劑，并廣泛用于拆分手性藥物，如采用高效毛細管電泳（HPCE）法分離測定青霉胺中對映體雜質[28]和采用自制的N-(2-羥丙基)三甲胺鹽-β-環(huán)糊精作為添加劑的非水毛細管電泳(NACE)法拆分3種酸性手性藥物[29]。

4.2.3 基因毒性雜質的檢測 2006年EMA首先頒布了關于藥物中基因毒性雜質殘留量限度規(guī)定的指導性文件，規(guī)定基因毒性雜質每人每天攝入量不得大于1.5 μg。因此，對于藥物中基因毒性雜質的檢查大多借助于高靈敏度的分析方法，如采用LC-MS法測定馬來酸依那普利及中間體N-[1-( S )-乙氧甲?；?3-苯丙基]-L-丙氨酸中對甲苯磺酸乙酯的含量[30]和采用LC-MS法測定口腔復合樹脂中基因毒性單體及降解產物[31]。在一些藥物合成過程中，都可能產生具有基因毒性的磺酸酯類雜質，所以對這類雜質的檢測方法具有普遍借鑒意義，并且有研究者綜述了藥物中痕量磺酸酯類物質的檢測技術研究進展[32]。

5 體內樣本分析技術

如今，隨著新藥研發(fā)在全球的迅速發(fā)展，體內藥物分析方法也得到了迅速發(fā)展。我國也出臺了關于體內藥物分析方法學考察的指導原則，《中國藥典》也對生物樣品定量分析的相關指導原則進行了修訂與擴充，但這些指導原則還有很多不足之處，例如對外源性基質產生的基質效應和評價方法并未加以說明[33]，仍需進一步完善。

5.1 生物樣本前處理

去除生物樣本中的基質干擾一直是體內藥物分析的關鍵，建立快速、高效、實時的樣本前處理方法也一直是體內藥物分析研究的核心與熱點。

5.1.1 微透析技術 微透析（microdialysis, MD）技術集采樣和前處理于一體，具有活體取樣、實時、在線檢測等突出特點。例如，基于膜分離原理的MD與HPLC-電噴霧離子化（ESI）-MS聯(lián)用，對大鼠關節(jié)腔透析液中雙氯芬酸鈉進行檢測分析，可滿足非甾體抗炎藥在靶部位的采集和測定的需求[34]；將MD與LC-MS聯(lián)用，測定大鼠大腦、血液和膽汁中的斯皮諾素及其與環(huán)孢素A的相互作用，可提高檢測方法的靈敏度和準確度[35]；而將MD與現(xiàn)代分析儀器在線聯(lián)用，在一定程度上可實現(xiàn)內源性物質和體內藥物的實時監(jiān)測[36]。

5.1.2 新型固相萃取技術 渦流色譜（turbulent flow chromatography,TFC）技術是利用大粒徑填料使流動相在高流速下產生渦流狀態(tài)，從而實現(xiàn)對生物樣品的凈化與富集。TFC有多種應用模式，可與分析柱聯(lián)用，直接對生物樣本進行分析；也有研究者采取MD-TFC-LCMS聯(lián)用方式，實現(xiàn)在10 min內對體內蒲貝酮堿進行在線測定，大大提高了分析效率[37]。

分子印跡固相萃取(MI-SPE)技術則能憑借其所具有的特異親和力和選擇性，在選擇性提取富集目標物的同時消除基質干擾組分。王培龍等[38]利用MI-SPE結合GC-MS測定豬尿中4種β-受體激動劑——氯丙那林、馬布特羅、克倫特羅和萊克多巴胺，大大簡化了樣品前處理過程，并具有較高的檢測準確度。Zhang等[39]采取MI-SPE與CE-UV聯(lián)用的方法，實現(xiàn)對血樣和尿樣中兒茶酚胺類物質的痕量分析。

5.2 體內藥物分析

鑒于體內樣本分析的復雜性，目前色質聯(lián)用技術仍是體內藥物分析方法學研究的熱點。

5.2.1 動物體內藥物分析 Zheng等[40]以梔子苷為內標，采用LC-ESI-MS/MS法測定大鼠血漿中梔子酸濃度，建立了梔子酸體內藥動學研究方法。Li等[41]利用HPLCUV法定量測定了大鼠尿液和糞便中的抗炎藥物異丁香酚及其代謝物，結果顯示，該方法的檢測準確度和精密度良好；且通過對靜脈注射和口服2種給藥方式的排泄物檢測結果進行比較，發(fā)現(xiàn)靜脈給藥后排泄物中待測物的提取率更高，并依據檢測結果對異丁香酚的給藥方式進行了探討。

5.2.2 人體內藥物分析 Li等[42]以LC–電噴霧四極桿線性離子阱質譜聯(lián)用技術定量測定人尿液和血漿中的帕洛諾司瓊，并進行帕洛諾司瓊藥動學研究。Liu等[43]利用HPLC-二極管陣列檢測器（DAD）技術測定人尿液中9種嘌呤物質，并結合模式識別技術中費歇爾線性判別分析（FDA）及正交信號校正-偏最小二乘法顯著性分析（OSC-PLS-DA）模式，評價正常人體健康狀況，還可對痛風病人的病情進行診斷。Su等[44]利用CE-熒光檢測器（FL）法測定人血液和尿樣中阿侖膦酸鈉，其間采用磁性固相萃取法對樣本進行前處理，有效縮短了樣本前處理過程，可在1.5 h內完成包括樣本前處理在內的全部測定過程。

5.3 體內代謝物分析

Feng等[45]采用超高效液相色譜（UPLC）-MS法對長期給予低劑量樂果的大鼠血漿和尿樣進行檢測，結果，在血漿中發(fā)現(xiàn)了13種代謝產物，尿樣中發(fā)現(xiàn)12種代謝產物。這一檢測結果可用作對臨床化學中檢測全身毒性的初步判斷依據。Gu等[46]采用GC-MS和LC-MS方法在類風濕性關節(jié)炎患者血漿中共檢測出45種特有的代謝產物，這些代謝產物可作為類風濕性關節(jié)炎病情診斷的依據之一。

5.4 體內生物標志物分析

由于生物樣本的復雜性及其在生物體內復雜的代謝過程，給體內代謝產物和生物標志物的檢測分析帶來很大難度，而LC-MS作為一種強有力的分離分析手段，在體內生物標志物的檢測中更顯優(yōu)勢，并得到廣泛應用[47]。目前臨床上尚無對早期肺癌進行專屬檢查的方法，但Guo等[48]使用傅里葉離子回旋共振質譜法對肺癌病人的生物標志物進行檢測，發(fā)現(xiàn)多種脂肪酸衍生物的分布與肺癌的形成有關，為肺癌的早期診斷提供了依據。Liu等[49]利用表面增強激光解吸電離-飛行時間-質譜(SELDI-TOF-MS)法對血清中的胃癌生物標志物進行檢測，發(fā)現(xiàn)了潛在的3種胃癌生物標志物——纖維蛋白原α鏈、載脂蛋白A-Ⅱ和載脂蛋白C-Ⅰ。

5.5 體內原位測定分析

體內原位測定分析使分析與過程緊密結合起來，為豐富過程中的信息量提供了更大潛力，而NIR、FT-IR和拉曼光譜等則為原位PAT的常用檢測手段。Yang等[50]建立了對小鼠頸部和頭部表皮生長因子的原位測定方法，即在對動物無傷害的情況下，利用近紅外熒光量子點技術，對動物鱗狀細胞癌進行原位檢測，這種探針技術對腫瘤的早期診斷及個性化治療都具有重要意義。Li等[51]利用近紅外熒光探針對體內惡性腫瘤細胞進行甄別，可實現(xiàn)惡性腫瘤的早期診斷。

6 中藥分析技術

6.1 中藥組分分離分析

中藥中有效組分分析是中藥藥效學的基礎，而中藥組分的復雜性也是制約中藥現(xiàn)代化的巨大障礙。目前HPLC、GC、EC及HPLC-MS、GC-MS等分析技術仍是對中藥單一組分及多組分進行定量定性分析的常用方法。Xu等[52]采用HPLC-三重四極桿質譜（TQMS）聯(lián)用技術，并以選擇性離子監(jiān)測（SIR）模式，同時定量測定地黃中8個主要成分（4個環(huán)烯醚萜苷類、3個苯乙醇苷類和1個糠醛衍生物）。Zhao等[53]采用HPLC-飛行時間四極桿串聯(lián)質譜（QTOF-MS）技術鑒定出梔子厚樸湯合劑中47個有效組分，并對其中15個進行了與對照品的保留時間比對和質譜數據分析。Wang等[54]采用快速液相色譜（RRLC)-TQ-MS聯(lián)用技術鑒定了黃山藥中甾體皂苷類組分，并對其中6個組分進行了定量分析，分析時間為9 min，最低定量限為1.20 ～ 75.20 μg·L-1。

近年來，分析技術的不斷發(fā)展為實現(xiàn)對中藥組分進行快速、準確、大信息量的分離分析提供了可能。其中，UPLC技術的廣泛應用大大提高了分析效率且能獲得更好的分離效果，如Cui等[55]采用UPLC-ESIMS技術對烏頭類藥材及炮制品中烏頭類生物堿進行了鑒別和含量測定，Lu等[56]采用微波萃取和UPLC技術實現(xiàn)了對虎杖藥材中5種主要活性組分含量的快速測定。高速逆流色譜（HSCCC)技術則適用于天然生物活性成分的分離，如Yin等[57]采用HSCCC法對黃芩水提物中多糖進行了分離提純，產率為2.57%，所分離的多糖組分平均分子質量為1.095×106，包含半乳糖醛酸（76.5%）、半乳糖（7.7%）、阿拉伯糖（4.2%）和葡萄糖（5.5%）；且甲基化分析顯示，單糖組分中，1,4-葡萄糖占58.4%，T-阿拉伯糖占11.8%,T-葡萄糖占11.8%，1,4,6-半乳糖占9.1%，1,3,6-半乳糖占5.1%，表明HSCCC技術的應用可最大限度地減少多糖在分離純化過程中發(fā)生化學變化。全二維氣相色譜（GC×GC）技術目前也是復雜物分析應用的熱點，具有峰容量大、分析速度快、分辨率高、族分離和瓦片效應等特點，在對復雜體系的檢測分析方面具有較大優(yōu)勢。如Cao等[58]采用GC×GC-TOF/MS技術分析了菊花曬干和硫熏藥材中揮發(fā)性組分的變化，分別檢出209個和111個揮發(fā)性組分，提示，與曬干方式相比，藥材經硫熏后其揮發(fā)性成分損失更多。

柱切換技術也是中藥組分分離分析方法的研究方向之一。Qian等[59]構建了3種不同類型色譜系統(tǒng)的分析體系——分子排阻色譜、親水色譜和反相色譜，并連接不同的檢測器，如DAD、蒸發(fā)光散射檢測器和MS檢測器，用于靈芝中大分子（多糖）、極性（核苷和糖）和非極性（三萜類）小分子組分的定性研究。結果，在不同種類靈芝中共鑒別出1個大分子組分、23個小分子組分、4個糖類組分、5個核苷類組分和14個三萜類組分。

6.2 中藥指紋圖譜

中藥指紋圖譜是通過聯(lián)用技術對中藥組分進行檢測分析而提供更準確的組分含量數據和豐富的鑒別信息。Shi等[60]采用UPLC-光電二極管陣列檢測器（PDA）技術建立了板藍根（Radix Isatidis）水提物的指紋圖譜，鑒定出10個共有峰，并對其中8個特征峰進行了定量研究。Jiao等[61]采用GC-MS技術分析了10批異型南五味子（Kadsura heteroclita）中揮發(fā)油的指紋圖譜，確認了23個主要色譜峰，并通過聚類分析將其分為3類。

6.3 中藥品質控制和鑒別

建立適宜的中藥品質控制和鑒別方法，是實現(xiàn)中藥現(xiàn)代化的重要環(huán)節(jié)。除了常見的HPLC、GC、HPCE及相應的聯(lián)用技術之外，光譜法、整體柱和實時直接分析質譜（DART MS）等新技術的發(fā)展，也為中藥品質控制和鑒別提供了高效快速的分析手段。Chunnian等[62]采用整體柱對白芍（Radix Paeoniae Alba）、赤芍（Radix Paeoniae Rubra）和牡丹皮（Cortex Moutan）進行了組分的鑒別和比較，整個分析過程在10 min內完成，并在這3種藥材的色譜圖中分別發(fā)現(xiàn)了15、45和21個色譜峰，并對其中的11個色譜峰進行了鑒定，結果表明，所建立的分析方法能有效區(qū)分這3種藥材。DART MS技術由Cody等人于2005年首次提出，可實現(xiàn)對藥材的實時無接觸、無損耗分析檢測。Zhu等[63]采用DART MS技術鑒定了制川烏（Radix Aconiti Preparata）品質控制的標志物，共鑒定出9個單酯二萜和雙酯二萜烏頭堿類標志物，這些標志物可有效用于鑒別合格樣品。Yang等[64]采用NIR光譜法對中藥柱層析過程中的組分變化進行實時在線監(jiān)測，這個方法是基于光譜的相似度和相異度2個對立互補的角度而提出的自適應移動窗口標準差法和過程光譜相似度法，并采用HPLC法進行驗證，表明該方法在中藥品質控制和鑒別中具有廣泛的應用前景。

6.4 中藥組分體內過程及藥動學評價

對中藥組分的體內過程和藥動學進行評價時，大多采用色譜及其聯(lián)用技術，如HPLC、UPLC-MS、HPLCMS和GC-MS等，建立靈敏、準確的分析方法。顏娟等[65]以新西蘭白兔為實驗對象，分別通過靜脈、腹腔和肌肉注射等3種不同給藥方式，并采用HPLC技術對中藥金蓮花中有效成分牡荊苷在體內的藥動學及組織分布規(guī)律進行了研究。Lv等[66]建立了液-液萃取結合靈敏的反相HPLC(RP-HPLC)方法，對小鼠經口給予何首烏提取物后的血漿中2,3,5,4'-四羥基-2-O-β-D-葡萄糖苷進行檢測分析，為從中藥中提取的生物活性物質的臨床研究提供了實驗依據。Sun等[67]將傳統(tǒng)抗抑郁的中藥梔子厚樸湯中提取的4種主要成分分別給大鼠灌胃使用，然后采用HPLC法測定4種成分的血藥濃度，考察了其中京尼平苷成分的藥動學以及各成分的相互作用對京尼平苷藥動學的影響。

7 生化藥物分析技術

7.1 多肽類藥物分析

近年來，多肽類藥物由于毒副作用較低、生物活性強、無代謝異化、用量少等特點，在醫(yī)藥領域愈發(fā)受到重視。侯江濤等[68]研究了胎盤多肽注射液對重癥肌無力患者免疫指標的影響，發(fā)現(xiàn)胎盤多肽能提高患者的T淋巴細胞轉化率，從而在一定程度上增強了患者的免疫功能和抵抗力。黃立峰等[69]采用色譜技術對舟山眼鏡蛇毒蕈堿樣多肽成分進行純化，并利用質譜儀和Edman降解法發(fā)現(xiàn)其N端16個氨基酸的部分序列與已知蛇毒磷脂酶A2基本一致，且發(fā)現(xiàn)該多肽成分具有較強的磷脂酶A2活性，故判斷其為一種眼鏡蛇毒磷脂酶A2，具有治療神經退行性疾病的潛力。

在現(xiàn)代多肽類藥物合成工藝中，F(xiàn)moc固相合成法占主導地位，然而在合成過程中，易產生缺失肽、斷裂肽、氧化肽等工藝雜質以及氧化、水解、降解、二硫鍵錯配、消旋、聚合等因素引入的雜質。因此，建立可對多肽類藥物中各類雜質進行可靠、準確、高效檢測的方法，是多肽類藥物質量控制的關鍵。

7.2 海洋藥物分析

如今，醫(yī)藥研究領域已將尋找天然抗腫瘤藥物的資源從陸地擴展到海洋，發(fā)現(xiàn)了許多活性高、毒副作用小且作用機制新穎的海洋抗腫瘤藥物。王翠翠等[70]在實驗研究中，發(fā)現(xiàn)文蛤多肽Mere15具有抑制人肺癌A549細胞增殖作用，并探討了其抑制微管蛋白聚合的作用機制。Cheng等[71]結合丙酮沉淀、超濾截留、DEAE Sepharose Fast Flow離子交換、Superdex75凝膠層析和C18反相柱層析等多種分離分析手段，采用活性追蹤的方法，從玻璃海鞘（Ciona savignyi）中分離純化出一種能誘導腫瘤細胞凋亡的多肽CS5931，其有可能成為一類新型抗腫瘤藥物。

7.3 單克隆抗體藥物分析

單克隆抗體（簡稱單抗）藥物分析較多肽類藥物更為復雜，因此需要系統(tǒng)的、完善的、多方位的分析研究方法。畢華等[72]建立了重組人源化兔抗血管內皮生長因子（VEGF）單抗的質控方法和質量標準，其中分析方法主要包括：采用人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）增殖抑制試驗，測定單抗的生物學活性；采用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）和體積排阻HPLC（SEC-HPLC）方法，測定單抗純度；采用胰酶酶切和HPLC法，測定單抗肽圖；采用定量PCR技術，實時檢測CHO宿主細胞DNA殘留量；采用ELISA法，分別測定單抗與VEGF的結合力、殘留蛋白A（ProA）含量和殘留菌體蛋白含量；采用水平等電聚焦電泳法，測定單抗等電點。張梅等[73]制備了抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白單抗，測定了單抗與抗原的相對親和力，并進行了單抗的抗原識別表位分析、中和試驗及融合抑制試驗，建立了體外鑒定單抗生物學特性的方法。

7.4 其他生物大分子分析

劉永福等[74]構建了Tricine-SDS-PAGE和LC-MS多反應監(jiān)測（MRM）分析方法，用于定量測定多肽和蛋白質，并通過比較超濾法、有機溶劑沉淀法和固相萃取法，確認乙腈沉淀法用于血漿內源性多肽提取的效果最佳。安鑫等[75]基于在模擬人體生理條件下，1，4-二羥基-9-10-蒽醌-2-醛縮-4-氟苯基氨基硫脲（EDMHT）可與人血清白蛋白（HSA）相互作用而生成復合物， 導致HSA的內源熒光產生特異性變化，且體系的同步熒光強度與溶液中HSA的濃度呈良好的線性關系， 從而建立了以EDMHT為分子探針、用固定波長同步熒光光譜分析測定蛋白質含量的新方法。

8 其他

8.1 生物發(fā)光焦磷酸測序分析技術

遺傳變異可導致病人出現(xiàn)對藥物反應的個體差異，而利用基因檢測技術確定病人基因突變位點，則有助于實現(xiàn)基因導向性的個體化用藥。焦磷酸測序是一種基于生物發(fā)光反應的實時DNA序列測定技術,其反應體系中的熒光素酶決定測序反應的靈敏度，而傳統(tǒng)焦磷酸測序反應使用的是野生型北美熒光素酶Photinus pyralis luciferase,該酶熱穩(wěn)定性較差,因此由該酶配制的焦磷酸測序反應體系對熱不穩(wěn)定,影響焦磷酸測序的靈敏度。為了建立熱穩(wěn)定的焦磷酸測序反應體系, 有研究者全合成了耐熱突變日本螢火蟲熒光素酶的編碼序列,并將其插入到表達載體pET28a(+)中構建重組質粒,將重組質粒轉化到大腸桿菌中,篩選得到的陽性重組菌成功表達了N端帶有6×His(組氨酸)標簽的耐熱突變日本螢火蟲熒光素酶。熱穩(wěn)定性實驗表明，與傳統(tǒng)焦磷酸測序反應體系相比，由該重組耐熱日本螢火蟲熒光素酶配制的測序反應體系對熱穩(wěn)定性有了極大的提高,該測序反應液在37 ℃放置1 h后仍能得到正確的測序結果。這一研究成果為建立穩(wěn)定可靠的現(xiàn)場及時快速焦磷酸測序反應體系奠定了基礎[76]。劉云龍等[77]則建立了一種基于全血直接PCR的焦磷酸測序法，用于檢測亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性，結果，僅需1μL全血樣本，即可對2個亞甲基四氫葉酸還原酶基因位點677CT和1298AC進行高效擴增。

8.2 時間分辨熒光分析法

時間分辨熒光分析法（time resolved fluorescence assay，TR-FA）是近年發(fā)展起來的非同位素免疫分析技術，是目前最靈敏的微量分析技術，被公認為是最有發(fā)展前途的一種非同位素標記分析技術。李麗華等[78]建立了環(huán)丙沙星時間分辨熒光免疫分析法（CPF-TRFIA），該法具有靈敏度高、特異性好的優(yōu)點，適用于高通量篩查。溫柏平等[79]建立釤(Sm3+)標記抗甲胎蛋白(AFP)單抗和銪(Eu3+)標記抗糖類抗原19-9(CA19-9)單抗的雙標記TRFIA，此法靈敏、簡便、準確,有助于消化道腫瘤和睪丸癌等的輔助診斷。

9 結語

藥物分析技術水平的不斷提高帶動了藥物分析學科的飛速發(fā)展，現(xiàn)代藥物分析方法已經歷革命性的變化，正朝著高靈敏、高通量、高專屬和高自動化的方向邁進。藥物分析學科的發(fā)展為創(chuàng)新藥物的研究、開發(fā)與制備以及藥物有效性和安全性的動態(tài)監(jiān)控提供了更強大的技術保障，并促進藥物科學研究取得新的進步。

[1]Wu Y,Jin Y,Li Y,et al.NIR spectroscopy as a process analytical technology (PAT) tool for on-line and real-time monitoring of an extraction process[J].Vib Spectrosc,2012,58:109-118.

[2]李文龍，瞿海斌.黃芪提取過程總皂苷質量濃度的在線監(jiān)測[J].中草藥，2012，43（8）：1531-1535.

[3]Xu B,Wu Z S,Lin Z Z,et al.NIR analysis for batch process of ethanol precipitation coupled with a new calibration model updating strategy[J].Anal Chim Acta, 2012, 720（30）:2-28.

[4]張玥,蘇明波,周宇波.組蛋白去乙?；?(HDAC6)抑制劑分子水平高通量篩選模型的建立[J].生物技術通報，2012(8):181-188.

[5]張志明,孫瑩,趙莉莉,等.以苯丙氨酰-tRNA合成酶為靶點的新型抗結核藥物高通量篩選模型的建立和應用[J].微生物學通報，2012，39（10）:1437-1466.

[6]張麗蓉,趙莉莉,魏玉珍,等.以肽脫甲酰基酶為靶點的抗結核藥物高通量篩選模型的建立和應用[J].中國醫(yī)藥生物技術，2012，7（2）:110-115.

[7]劉媛,董志,肖曉秋,等.人二型大麻受體激動劑高通量篩選模型的建立[J].細胞與分子免疫學雜志，2012，82（2）:194-196.

[8]Dai J, Wang G, Li W, et al.High-throughput screening for anti-infl uenza A virus drugs and study of the mechanism of procyanidin on infl uenza A virus-induced autophagy[J].J Biomol Screen, 2012, 17(5): 605-617.

[9]Liu C,Wang L,Xu Z,et al.A multilayer microdevice for cell-based highthroughput drug screening[J].J Micromech Microeng, 2012,22 (6):065008.

[10]林琳，李曉東，丁麗霞，等.拉曼光譜測定氟康唑晶型的應用研究[J].中國藥學雜志,2012，47（11）：915-919.

[11]劉永,楊華蓉,林大勝,等.近紅外光譜法測定三七通舒膠囊粉末的混合均勻度[J].華西藥學雜志,2012,27( 4) :418-420.

[12]Li D,Wang M,Yang C,et al.Solid state characterizations and analysis of stability in azelnidipine polymorphs[J].Chem Pharm Bull,2012,60( 8):995-1002.

[13]佟鈴霞，李紅霞.葉酸偶聯(lián)納米紫杉醇的制備[J].首都醫(yī)科大學學報，2012,33（5）:565-568.

[14]顏敏,黃海萍，喻亮宇.頂空氣相色譜法測定燈盞花滴丸中殘留溶劑[J].藥物分析雜志,2012,32(1):100-102.

[15]董喆,馮克然,張露勇.微波消解-石墨爐原子吸收法測定軟膠囊殼中重金屬鉻的方法學研究[J].中國藥學雜志,2012,47(9):717-719.

[16]葉艷青,馬金晶,楊新周,等.原子熒光光譜法測定傣藥蓬萊葛中的痕量砷和汞[J].藥物分析雜志,2012,32(3): 443-446.

[17]甘盛,施曉光,韓婷,等.維生素B2注射液中鎘、砷和鉛的電感耦合等離子體質譜法測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2012,43(4):298-300.

[18]夏苗芬,陸元勛.《中國藥典》2010年版一部中二氧化硫殘留測定方法的改進[J].中國藥師,2012,15(3):422-423.

[19]周建良,施貝,羅鐳,等.陳碧蓮離子色譜法測定浙貝母中二氧化硫殘留量[J].中國現(xiàn)代應用藥學,2012,29(11):1025-1028.

[20]Yuan Y Z, Zhang M, Fan X L,et al.Impurity profi ling of etimicin sulfate by liquid chromatography ion-trap mass spectrometry[J].J Pharm Biomed Anal,2012,70:212-223.

[21]Wang X, Zhou H, Zheng J, et al.Identifi cation and characterization of four process-related impurities in retigabine[J].J Pharm Biomed Anal,2012,71:148-151.

[22]Liu C H,Lu D D,Deng X X,et al.The analysis of major impurities of lipophilic-conjugated phosphorothioate oligonucleotides by ionpair reversed-phase HPLC combined with MALDI-TOF-MS[J].Anal Bioanal Chem,2012,403(5): 1333-1342.

[23]Wang B L,Wang H,Wang E,et al.Isolation and structure characterization of related impurities in Sodium Tanshinone IIA Sulfonate by LC/ESIMSn and NMR[J].J Pharm Biomed Anal,2012,67/68:36-41.

[24]Gao T,Liu Y X,Ji Y B,et al.Structural elucidation of impurities in 5-n-butyl-4-{4-[2-(1H-tetrazole-5-yl)-1H-pyrrol-1-yl]phenylmethyl}-2,4-dihydro-2-(2,6-dichlorophenyl)-3H-1,2,4-triazol-3-one (Ib), a novel nonpeptide a ngiotensin AT1receptor antagonist[J].J Pharm Biomed Anal, 2012,66:81-386.

[25]Guo X, Li C,Duan L, et al.Separation of the enantiomers of naringenin and eriodictyol by amylose-based chiral reversed-phase highperformance liquid chromatography[J].Drug Discov Ther,2012,6(6):321-326.

[26]周婕,劉倩,蘇楠,等.新型鍵合纖維素手性固定相拆分氯西加酮對映體[J].藥物分析雜志,2012,32(1):67-70.

[27]周穎,黃敏,王琰,等.HPLC手性流動相添加劑法拆分藥典收載三種含N手性藥物及其機制探討[J].中國藥學雜志,2012,47(13):1069-1073.

[28]Song L, Guo Z, Chen Y.Separation and determination of chiral composition in penicillamine tablets by capillary electrophoresis in a broad pH range[J].Electrophoresis,2012,33(13):2056-2063.

[29]邢文國,孟憲興,馮維春,等.N-(2-羥丙基)三甲胺鹽-β-環(huán)糊精的合成及其在非水毛細管電泳拆分酸性手性藥物中的應用[J].分析試驗室,2012,31(11):37-40.

[30]宋冬梅,徐倩昱,任美婷,等.HPLC-QTOF MS法測定馬來酸依那普利及中間體中的對甲苯磺酸乙酯[J].藥物分析雜志,2012,32(5):834-837.

[31]Hsu W Y,Wang V S,Lai C C,et al.Simultaneous determination of components released from dental composite resins in human saliva by liquid chromatography/multiple-stage ion trap mass spectrometry[J].Ele ctrophoresis,2012,33(2):719-725.

[32]張園園,李銀峰,王杰晶,等.藥物中痕量磺酸酯類物質的檢測技術研究進展[J].藥物評價研究,2012,35(4):304-307.

[33]杜曉琳,劉利,雍小蘭.體內藥物分析方法學研究中易忽略的 LC-MS /MS法基質效應和逆轉化問題[J].中國新藥雜志,2012,21(22):2701-2704.

[34]張璟,陳陽,李沛,等.基于微透析技術及HPLC-ESI-MS測定大鼠關節(jié)腔透析液中雙氯芬酸鈉濃度及其應用[J].中國臨床藥理學與治療學,2012,17(11):1233-1239.

[35]Ma R H, Yang J, Qi L W, et al.In vivo microdialysis with LC–MS for analysis of spinosin and its interaction with cyclosporin A in rat brain,blood and bile[J].J Pharm Biomed Anal,2012(61):22-29.

[36]聶穎蘭,范斌,閆寒,等.微透析與現(xiàn)代分析技術在線聯(lián)用的研究進展[J].中國實驗方劑學雜志,2012,18(5):252-255.

[37]Xin G Z,Cao L,Shi Z Q, et al.Direct pharmacokinetic analysis of puqietinone by in vivo microdialysis sampling and turbulentflow chromatography coupled with liquid chromatography-mass spectrometry[J].J Chromatogr B ,2012,899:127-134.

[38]王培龍,范理,蘇曉鷗,等.分子印跡固相萃取-氣相色譜-質譜法測定豬尿中4種β-受體激動劑[J].分析化學，2012,40(3):470-473.

[39]Zhang X F,Xu S,Lim J M,et al.Molecularly imprinted solid phase microextraction fiber for trace analysis of catecholamines in urine and serum samples by capillary electrophoresis[J].Talanta,2012,99:270-276.

[40]Zheng X, Huang X T, Li N, et al.Determination of geniposidic acid in rat plasma by LC–MS/MS and its application to in vivo pharmacokinetic studies[J].J Chromatogr B,2012,887/888:138-142.

[41]Li F,Yang X W.Analysis of antinflammatory dehydrodiisoeugenol and metabolites excreted in rat feces and urine using HPLC-UV[J].Biomed Chromatogr, 2012,26(6):703-707.

[42]Li P F,Ma P,Wang Y, et al.Liquid chromatography–electrospray quadrupole linear ion trap mass spectrometry method for the quantitation of palonosetron in human plasma and urine: application to a pharmacokinetic study[J].J Chromatogr B,2012,895/896:10-16.

[43]Liu Y,Yu P H,Sun X M, et al.Metabolite target analysis of human urine combined with pattern recognition techniques for the study of symptomatic gout[J].Mol Biosyst,2012,8(11):2956-2963.

[44]Su S W,Liao Y C, Whang C W.Analysis of alendronate in human urine and plasma by magnetic solid-phase extraction and capillary electrophoresis with fluorescence detection[J].J Sep Sci,2012,35(5/6):681-687.

[45]Feng Z J,Sun X W, Yang J D,et al.Metabonomics analysis of urine and plasma from rats given long-term and low-dose dimethoate by ultraperformance liquid chromatography-massspectrometry[J].Chem Biol Interact,2012,199(3):143-153.

[46]Gu Y, Lu C,Zha Q,et al.Plasma metabonomics study of rheumatoid arthritis and its Chinese medicine subtypes by using liquid chromatography and gas chromatography coupled with mass spectrometry[J].Mol Biosyst,2012,8(5):1535-1543.

[47]Guo B.LC-MS-based znalytical strategies for targeted profiling of metabolites/biomarkers in complex systems[J].Curr Drug Metab,2012,13(9):1205.

[48]Guo Y M ,Wang X M,Qiu L ,et al.Probing gender-specific lipid metabolites and diagnostic biomarkers for lung cancer nusing Fourier transform ion cyclotron resonance mass spectrometry[J].Clin Chim Acta,2012,414:135-141.

[49]Liu C B,Pan C Q,Liang Y.Screening and identifcation of serum proteomic biomarkers for gastric adenocarcinoma[J].Exp Ther Med,2012,3(6):1005-1009.

[50]Yang K,Zhao C,Cao Y A,et al.In vivo and in situ imaging of head and neck squamous cell carcinoma using near-infrared fuorescent quantum dot probes conjugated with epidermal growth factor receptor monoclonal antibodies in mice[J].Oncol Rep,2012,27(6):1925-1931.

[51]Li J B,Chen K,Liu H G,et al.Activatable near-infrared fl uorescent probe for in vivo imaging of fi broblast activation protein-alpha[J].Bioconjug Chem,2012,23(8):1704-1711.

[52]Xu J, Wu J, Zhu L Y, et al.Simultaneous determination of iridoid glycosides, phenethylalcohol glycosides and furfural derivatives in Rehmanniae Radix by high performance liquid chromatography coupled with triple-quadrupole mass spectrometry[J].Food Chem,2012,135(4):2277-2286.

[53]Zhao X, Long Z, Dai J, et al.Identifi cation of multiple constituents in the traditional Chinese medicine formula Zhi-Zi-Chi decoction and rat plasma after oral administration by liquid chromatography coupled to quadrupole time-of-fl ight tandem mass spectrometry[J].Rapid Commun Mass Spectrom,2012,26(20):2443-2453.

[54]Wang W, Li P, Wang X, et al.Quantifi cation of saponins in Dioscorea panthaica Prain et Burk rhizomes with monolithic column using rapid resolution liquid chromatography coupled with a triple quadruple electrospray tandem mass spectrometry[J].J Pharm Biomed Anal,2012,71:152-156.

[55]Cui P, Han H, Wang R, et al.Identification and determination of Aconitum alkaloids in Aconitum herbs and Xiaohuoluo pill using UPLCESI-MS[J].Molecules,2012,17(9):10242-10257.

[56]盧燕，李華麗，林牡丹，等.微波萃取-UPLC同時測定虎杖中5種主要活性成分的含量 [J].中國中藥雜志，2012，37(13):1994-1997.

[57]Yin J Y, Jiang Z H, Yu H, et al.A new application of an aqueous diphase solvent system in one-step preparation of polysaccharide from the crude water extract of Radix Astragali by high-speed counter-current chromatography[J].J Chromatogr A,2012,1262:92-97.

[58]Cao G, Cai H, Cong X, et al.Global detection and analysis of volatile components from sun-dried and sulfur-fumigated herbal medicine by comprehensive two-dimensional gas chromatography/time-of-flight mass spectrometry[J].Analyst,2012,137(16):3828-3835.

[59]Qian Z, Zhao J, Li D, et al.Analysis of global components in Ganoderma using liquid chromatography system with multiple columns and detectors[J].J Sep Sci,2012,35(20):2725-2734.

[60]Shi Y H, Xie Z Y, Wang R,et al.Quantitative and chemical fi ngerprint analysis for the quality evaluation of Isatis indigotica based on ultraperformance liquid chromatography with photodiode array detector combined with chemometric methods[J].Int J Mol Sci,2012,13(7):9035-9050.

[61]焦豪妍,王玉生,劉瑤,等.廣東海風藤揮發(fā)油GC-MS指紋圖譜研究[J].中藥材,2012,35(9):1431-1434.

[62]Chunnian H,Yong P,Yuxiong F,et al.Quick comparison of Radix Paeonia Alba, Radix Paeonia Rubra, and Cortex Moutan by high performance liquid chromatography coupled with monolithic columns and their chemical pattern recognition[J].Pharmacogn Mag,2012,8(31):237-243.

[63]Zhu H,Wang C,Qi Y,et al.Rapid quality assessment of Radix Aconiti Preparata using direct analysis in real time mass spectrometry[J].Anal Chim Acta,2012,752:69-77.

[64]楊輝華，郭拓，馬晉芳，等.一種近紅外光譜在線監(jiān)測新方法及其在中藥柱層析過程中的應用[J].光譜學與光譜分析,2012,32(5):1247-1250.

[65]顏娟,商愛民,王書華,等.金蓮花中牡荊苷在兔體內藥動學及組織分布研究[J].中成藥,2012,34(4):650-653.

[66]Lv G Y, Cu H, Chen S, et al.Pharmacokinetic profle of 2,3,5,4′-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside in mice after oral administration of Polygonum multiforum extract[J].Drug Dev Ind Pharm, 2012, 38(2): 248-255.

[67]Sun Y, Feng F, Yu X.Pharmacokinetics of geniposide in Zhi-Zi-Hou-Pu decoction and in different combinations of its constituent herbs[J].Phytother Res, 2012, 26(1): 67-72.

[68]侯江濤,汪雙雙,楊曉軍,等.胎盤多肽注射液對重癥肌無力患者免疫指標的影響[J].海南醫(yī)學，2013,23(7):28-29.

[69]黃立峰,俞昌喜.舟山眼鏡蛇毒蕈堿樣多肽MP 的部分理化性質測定[J].中國生化藥物雜志,2012,33(6):725-231.

[70]王翠翠,劉 明,王鳳霞,等，文蛤多肽抑制腫瘤細胞微管蛋白聚合[J].中國生化藥物雜志,2012,33(3):225-228.

[71]Cheng L,Wang C,Liu H,et al.A novel polypeptide extracted from Ciona savignyi induces apoptosis through a mitochondrial-mediated pathway in human colorectal carcinoma cells[J].Clin Colorectal Cancer,2012,11(3):207-214.

[72]畢華,范文紅,韓春梅,等.重組人源化兔抗VEGF單克隆抗體質控方法與質量標準研究[J].藥物分析雜志,2012,32(6):1054-1058.

[73]張梅,王小波,付遠輝,等.抗人呼吸道合胞病毒融合糖蛋白單克隆抗體的制備及體外鑒定[J].中國生物工程雜志，2012,32(2):63-68.

[74]劉永福,賈小芳,騰珍林,等.液質聯(lián)用多反應監(jiān)測法定量目標多肽或蛋白質[J].中國生物化學與分子生物學報,2012,28(1):86-92.

[75]安鑫，時蕾，郝二軍，等.14-二羥基- 9- 10-蒽醌- 2 -醛縮- 4-氟苯基氨基硫脲探針測定生物樣品中蛋白質含量的光譜法[J].河南師范大學學報：自然科學版，2012,40（6）：73-76.

[76]徐澍，鄒秉杰，王建平,等.耐熱熒光素酶的表達及熱穩(wěn)定焦磷酸測序體系的建立[J].生物工程學報,2012,28(6):763-771.

[77]劉云龍,陳之遙,武海萍,等.全血直接擴增結合焦磷酸測序法測定亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性[J].分析化學,2012,40(7):1037-1042.

[78]李麗華,白瑞櫻,孫遠明,等.環(huán)丙沙星時間分辨熒光免疫分析方法的建立與應用[J].食品科學，2012，33（8）：216-220.

[79]溫柏平,莊 宇,代宏劍.甲胎蛋白與CA19-9雙標記時間分辨熒光免疫分析法的建立[J].臨床檢驗雜志,2012,30(12):978-980.