董昕欣,劉 偉,邴國霞,張劭俁,李文京,王傳彬,原 霖,韓 雪,張 碩,李雁冰,郭建宏
(1.中國動物疫病預防控制中心,北京 朝陽100125;2.中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所,黑龍江 哈爾濱150001;3.中國農業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所,甘肅 蘭州730046)
獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室是指隸屬于各級獸醫(yī)主管部門,承擔動物疫病檢測、診斷和監(jiān)測等任務的獸醫(yī)實驗室。按照《國家中長期動物疫病防治規(guī)劃(2012-2020年)》[1],獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室作為動物疫病預防控制機構的組成部分,主要承擔動物疫病診斷和檢測、動物疫情和免疫狀況監(jiān)測、動物疫病防控科學研究等工作,對動物疫病防控發(fā)揮著重要支撐作用。開展獸醫(yī)實驗室檢測能力比對,是評價獸醫(yī)實驗室檢測技術水平的重要手段,也是加強獸醫(yī)實驗室質量控制的有效方法[2]。為提高全國各省級獸醫(yī)實驗室的檢測能力和技術水平,按農業(yè)部要求,中國動物疫病預防控制中心組織實施了2014年省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室能力比對,全國32個省級獸醫(yī)實驗室全部參加,在規(guī)定時間內完成了比對樣品制備、分發(fā)、檢測和結果回收。比對結果客觀反映了實驗室的檢測能力和技術水平,對該結果進行分析討論有利于進一步做好獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室管理工作。報告如下。
本次比對依據(jù)農業(yè)部辦公廳和中國動物疫病預防控制中心有關2014年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對的文件[3-4]要求,共設置4個比對項目,分別是H7N9亞型禽流感抗體(H7N9-AIAb)檢測、口蹄疫病毒(FMDV)檢測、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)檢測、禽白血病病毒(ALV)檢測。全國共有32個省級獸醫(yī)實驗室(含新疆生產建設兵團)參加此次比對。
2.1 試驗方法與標準 針對4個檢測能力比對項目,采用國家參考實驗室或專業(yè)實驗室推薦的方法和試劑,其中部分試劑由參加比對的省級實驗室自行準備,見表1。
表1 比對試驗的方法、標準和主要試劑
2.2 比對樣品制備
2.2.1 制備方式 各國家參考實驗室和專業(yè)實驗室分別完成相應樣品的制備、標定、分裝和編號,并將樣品和標定值送交中國動物疫病預防控制中心統(tǒng)一保存,作為盲樣下發(fā)使用。
2.2.2 H7N9-AIAb樣品 雞血清抗體樣品5份,由參考值分別為<1、4、7的3組樣品中各抽取1~2份樣品組成。
2.2.3 FMDV樣品 口蹄疫病毒樣品5份,參考值分別為陰性、O型陽性、O型陽性、A型陽性、A型陽性。
2.2.4 PRRSV樣品 豬繁殖與呼吸綜合征病毒樣品5份,參考值分別為陰性、弱陽性、弱陽性、強陽性、強陽性。
2.2.5 ALV樣品 禽白血病病毒樣品5份,由參考值分別為陰性、弱陽性、強陽性3組樣品中各抽取1-2份樣品組成。
2.3 比對樣品傳遞 比對樣品為具有生物學活性的血清、尿囊液或細胞培養(yǎng)物,為保持其良好的生物學活性,樣品存放在-20℃以下冰柜中。分發(fā)時將樣品和試劑放入裝有冰袋的保溫箱中保存,由參加比對的省級實驗室派專人在規(guī)定的時間內統(tǒng)一領取,并在12 h之內送達參加比對的實驗室。
2.4 評判標準
2.4.1 H7N9-AI檢測評判標準 檢測值與參考值的偏差不超過1個滴度,判為結果準確。
2.4.2 FMDV檢測評判標準 O型陽性和A型陽性樣品的檢測結果應為“陽性”;陰性樣品的檢測結果應為“陰性”。
2.4.3 PRRSV檢測評判標準 強陽性和弱陽性樣品的檢測結果應為“陽性”;陰性樣品的檢測結果應為“陰性”。
2.4.4 ALV檢測評判標準 強陽性和弱陽性樣品的檢測結果應為“陽性”;陰性樣品的檢測結果應為“陰性”。
3.1 總體結果 根據(jù)比對結果評判標準,在32個參加省級實驗室中,有29個實驗室對所有項目的檢測結果全部準確,有3個實驗室部分比對項目檢測值存在較大偏差。出現(xiàn)較大偏差的主要是H7N9亞型禽流感抗體血凝抑制試驗檢測項目,見表2。
表2 32個實驗室比對結果統(tǒng)計
3.2 H7N9-AIAb檢測比對結果 30個實驗室的檢測結果全部正確,說明大多數(shù)實驗室在血凝抑制技術方面較為成熟。1個實驗室(第23號)對參考值4log2樣品的檢測結果出現(xiàn)錯誤,高于參考值兩個滴度。1個實驗室(第28號)對參考值4log2樣品的檢測結果出現(xiàn)錯誤,低于參考值兩個滴度。
對于參考值相同的雙份重復樣品的檢測,大部分實驗室(30/32)檢測結果自身重復性較好,說明絕大部分實驗室的隨機誤差較小;而第23號、第25號2個實驗室對于參考值相同的兩份樣品檢測值不一致,反映出這些實驗室在質控體系方面存在問題。結果見圖1。
3.3 FMDV檢測比對結果 32個實驗室對FMDV弱強陽性和陰性樣品的檢測結果全部正確,見表3。
圖1 各實驗室H7N9-AI檢測值離散
表3 各實驗室FMDV檢測結果頻次與參考值對照
3.4 PRRSV檢測比對結果 31個實驗室對PRRSV弱強陽性和陰性樣品的檢測結果全部正確,1個實驗室1份弱陽性樣品檢測結果為陰性。見表4。
表4 各實驗室PRRSV檢測結果頻次與參考值對照
3.5 ALV檢測比對結果 32個實驗室對ALV弱強陽性和陰性樣品的檢測結果全部正確,見表5。
表5 各實驗室ALV檢測結果頻次與參考值對照
從比對結果來看,在參加比對的32個省級獸醫(yī)實驗室中,有29個實驗室對所有項目的檢測結果全部準確,有3個實驗室部分比對項目檢測值存在較大偏差,說明大部分省級獸醫(yī)實驗室具備相應的檢測能力和技術水平。出現(xiàn)較大偏差的主要是H7N9亞型禽流感抗體血凝抑制試驗檢測項目,說明定量或半定量的血清學檢測項目,其難度和要求大于定性的分子生物學檢測項目;也說明這部分實驗室在半定量的檢測技術方面還不夠穩(wěn)定。
本次實驗室檢測能力比對中設置了平行樣品,用以評估實驗室檢測體系的穩(wěn)定性。結果顯示,大部分實驗室的檢測結果平行性好,僅少數(shù)實驗室對參考值相同的兩份樣品的檢測值不一致。這說明部分實驗室在檢測中存在較多的隨機誤差,應當更加明確各個操作環(huán)節(jié)的細節(jié)要求,減少隨意性操作,增加實驗室檢測結果的穩(wěn)定性。
血清學檢測和病原學檢測是獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室的基礎檢測方法,本次比對的試驗項目包含了血凝抑制試驗、ELISA、PCR、熒光定量PCR等多種常用方法;檢測的疫病類別也涵蓋了當前重點防控的幾個重大動物疫病,因此比對結果能客觀地反映實驗室的檢測能力和技術水平。我國以前在獸醫(yī)領域開展實驗室檢測能力比對相對較少,出入境檢疫系統(tǒng)曾開展過禽流感AGID抗體的定性檢測及H5、H9亞型HI抗體定量檢測的比對[7],部分動物疫控實驗室參加過國際間或地方實驗室自發(fā)組織的比對,而本次比對是全國范圍的省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室之間的比對,對于即將全面開展的全國各市、縣級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室比對具有一定的借鑒意義。
[1]國務院辦公廳.國務院辦公廳關于印發(fā)國家中長期動物疫病防治規(guī)劃(2012-2020年)的通知[Z].國辦發(fā)[2012]31號.北京:國務院辦公廳,2012-05-20.
[2]王文,張繼紅,蘭玲,等.2010年新疆獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對試驗的探討與建議[J].中國動物檢疫,2011,28(9):19-21.
[3]農業(yè)部辦公廳.農業(yè)部辦公廳關于開展2014年獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對工作的通知[Z].農辦醫(yī)[2014]13號.北京:農業(yè)部辦公廳,2014-03-28.
[4]中國動物疫病預防控制中心.關于印發(fā)《2014年省級獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室檢測能力比對實施方案》的通知[Z].疫控(安)[2014]48號.北京:中國動物疫病預防控制中心,2014-04-03.
[5][農業(yè)部.農業(yè)部關于印發(fā)《獸醫(yī)系統(tǒng)實驗室考核管理辦法》的通知[Z].農醫(yī)發(fā)[2009]15號.北京:農業(yè)部,2009-08-11.
[6]李掌林.雛議實驗室間的比對試驗工作[J].現(xiàn)代測量與實驗室管理,2004(2):36-39.
[7]劉來福,張鶴曉,張利峰,等.家禽禽流感病毒AGID抗體定性檢測及H5、H9亞型HI抗體定量檢測能力驗證結果分析[J].現(xiàn)代測量與實驗室管理,2004(2):29-32