丁琳 凌麗燕 段達(dá)榮

1.浙江省平湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江平湖314201；2.浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院細(xì)菌室，浙江臺(tái)州318000

2010～2012年院內(nèi)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌的感染狀況及耐藥分析

丁琳1凌麗燕1段達(dá)榮2

1.浙江省平湖市第二人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江平湖314201；2.浙江省臺(tái)州市第一人民醫(yī)院細(xì)菌室，浙江臺(tái)州318000

目的了解平湖市第二人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）內(nèi)產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（ESBLs）的肺炎克雷伯菌臨床感染及耐藥情況，為臨床用藥物提供參考。方法對(duì)2010年1月～2012年12月我院臨床送檢標(biāo)本中分離出的肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs率及其耐藥性進(jìn)行分析。結(jié)果產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌總檢出率為35.6%，并且每年有遞增的態(tài)勢(shì)。產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌對(duì)青霉素類和頭孢菌素類的耐藥率極高；對(duì)慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星有較高的耐藥性；對(duì)哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星和呋喃妥因較敏感；對(duì)亞胺培南不耐藥。結(jié)論肺炎克雷伯菌存在比較嚴(yán)重的耐藥性，臨床應(yīng)重視細(xì)菌培養(yǎng)，并合理使用抗菌藥物。

超廣譜β-內(nèi)酰胺酶；耐藥性；肺炎克雷伯菌

肺炎克雷伯菌可引起肺炎、尿路感染、敗血癥、傷口感染、腦膜炎等多種疾病，也是醫(yī)院內(nèi)獲得性感染重要的致病菌。近年來由于抗生素的廣泛應(yīng)用，肺炎克雷伯菌對(duì)多種抗菌藥物的耐藥性不斷增強(qiáng)，引起革蘭陰性桿菌耐藥性的主要問題之一是細(xì)菌超廣譜β-內(nèi)酰胺酶（extended spectrum β-lactamases，ESBLs）的產(chǎn)生。為了了解平湖市第二人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）產(chǎn)ESBLs的肺炎克雷伯菌的檢出與耐藥特點(diǎn)及變化趨勢(shì)，本文對(duì)我院2010年1月～2012年12月292株肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs菌株年度陽性率，分布及藥敏試驗(yàn)進(jìn)行分析，報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 菌株來源

選擇我院臨床科室送檢的各類標(biāo)本，包括痰液、尿液、分泌物、血液等，共分離肺炎克雷伯菌292株。同一患者相同部位多次分離的同一細(xì)菌不重復(fù)計(jì)入，其中產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌104株。

1.2 儀器和試劑

細(xì)菌分離所用血平板和麥康凱平板均購(gòu)自鄭州安圖公司，MH瓊脂和藥敏紙片由杭州天和公司提供，細(xì)菌鑒定和藥敏所用儀器ATB微生物分析儀和試劑（ID 32 E和ATB G-5）均購(gòu)自法國(guó)生物梅里埃公司。

1.3 細(xì)菌鑒定及藥敏方法

細(xì)菌分離培養(yǎng)參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行操作，采用ATB微生物鑒定系統(tǒng)對(duì)分離株進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)。

1.4 ESBLs檢測(cè)方法

確證試驗(yàn)按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（CLSI/NCCLS）推薦的紙片擴(kuò)散法進(jìn)行測(cè)定，頭孢他啶與頭孢他啶+克拉維酸、頭孢噻肟與頭孢噻肟+克拉維酸任一組間抑菌區(qū)直徑≥5 mm判為ESBLs陽性，大腸埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603（衛(wèi)生部藥品生物鑒定所）分別為陰性和陽性對(duì)照。

2 結(jié)果

2.1 產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌檢出率

2010年1月～2012年12月，從各類標(biāo)本中共分離出292株肺炎克雷伯菌，其中產(chǎn)ESBLs104株，陽性率為35.6%，痰液檢出產(chǎn)ESBLs最高，陽性率為82.7%，近3年產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌在標(biāo)本中檢出的陽性率依次為31.1%、35.4%、39.6%。結(jié)果見表1、2。

表1 104株產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌在臨床各種標(biāo)本中的分布構(gòu)成比

表2 292株菌株標(biāo)本產(chǎn)ESBLs菌株年度陽性率分布（株）

2.2 細(xì)菌耐藥率

細(xì)菌耐藥率統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表3所示，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)常見抗菌藥物的耐藥率普遍較高，對(duì)青霉素類和頭孢菌素類等耐藥率極高，而對(duì)亞胺培南最敏感，耐藥率為零；對(duì)慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星有一定的敏感性，但總體敏感性均不高，耐藥率在31.0%～64.3%；對(duì)哌拉西林/他唑巴坦、阿莫西林/克拉維酸和呋喃妥因的較敏感，耐藥率均小于15%；對(duì)阿米卡星的耐藥率也較低。

表3 2010～2012年產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)常見抗菌藥物的耐藥率[%（n1/n2）]

3 討論

肺炎克雷伯菌主要因產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶而耐藥，它是通過與β-內(nèi)酰胺環(huán)上的羰基共價(jià)結(jié)合，水解甲氧亞氨基β-內(nèi)酰胺抗菌藥物如頭孢噻肟、頭孢他啶以及氨曲南的β-內(nèi)酰胺酶[1]。根據(jù)2010年中國(guó)細(xì)菌耐藥監(jiān)測(cè)的報(bào)道，克雷伯菌屬產(chǎn)ESBLs平均檢出率大于43.6%[2]。2010年1月～2012年12月我院ESBLs陽性肺炎克雷伯菌總檢出率35.6%，最高時(shí)在2012年為39.6%，仍低于報(bào)道值。這可能由于統(tǒng)計(jì)樣本量不足導(dǎo)致。另外，地域的不同，臨床醫(yī)生在使用抗菌藥物的種類、計(jì)量、頻率等方面存在差異性，而ESBLs是抗菌藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的，從而導(dǎo)致ESBLs的檢出率存在差異性[3]。但是從近3年的檢出的比例來看，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌每年有遞增的態(tài)勢(shì)，檢出率從31.1%到35.4%到39.6%，這與國(guó)內(nèi)諸家報(bào)道基本一致[4-5]。由于二代頭孢在我院的廣泛應(yīng)用，在藥物選擇壓力影響下，導(dǎo)致肺炎克雷伯菌耐藥性增強(qiáng)，相應(yīng)的產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌出現(xiàn)，這方面不僅要臨床醫(yī)生引起重視，其他相關(guān)部門也應(yīng)足夠重視。從標(biāo)本來源角度分析，痰液標(biāo)本中檢出產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌最高，占82.7%。這可能是由于我院痰液標(biāo)本送檢率較其他高所致；另一方面可能與部分年老體弱的呼吸道感染患者大量使用抗菌藥物有關(guān)。

ESBLs主要為質(zhì)粒介導(dǎo)的β-內(nèi)酰胺酶基因（TEM-1、TEM-2、SHV-1）的1個(gè)或數(shù)個(gè)氨基酸突變而來，通過自體耐藥的質(zhì)粒傳遞給其他細(xì)菌，從而導(dǎo)致感染菌的廣泛傳播并形成耐藥菌株[6]，多為CTX-M型與TEM型或SHV型基因同時(shí)存在[7-9]。不同類型ESBLs菌對(duì)不同的二代頭孢有不同活性，SHV型對(duì)頭孢噻肟有較強(qiáng)的耐藥性；CTX-M系列酶對(duì)頭孢噻肟水解能力較強(qiáng)，而對(duì)頭孢他啶的水解能力很弱；TEM-10對(duì)頭孢噻肟敏感，頭孢他啶耐藥；TEM-3可使頭孢他啶和頭孢噻肟都失活。由表3可以看出，肺炎克雷伯菌對(duì)氨芐西林、哌拉西林、頭孢呋辛、頭孢噻肟、頭孢他啶和頭孢曲松耐藥率均大于96.3%，幾乎全部耐藥，說明我院產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌已攜帶多種耐藥基因。由于ESBLs是能水解頭氨曲南等單環(huán)類抗生素，所以其耐藥率也很高，都大于81%，由此提示臨床治療此類細(xì)菌感染時(shí)應(yīng)避免使用頭孢菌素類和氨曲南抗菌藥物。喹諾酮類抗菌藥物環(huán)丙沙星已經(jīng)具有較強(qiáng)的耐藥性，耐藥率為47.6%～57.1%，左氧氟沙星耐藥率也達(dá)到31.0%～48.1%，這是SHV型基因?qū)︵Z酮類藥物產(chǎn)生耐藥性的原因[10]。氨基糖苷類抗生素慶大霉素耐藥率在50%～64.3%，這主要是由于ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)于氨基糖苷類藥物存在AMEs（氨基糖苷類修飾酶）及相關(guān)的耐藥基因，使它們的耐藥率也大大增高[11]，但是阿米卡星耐藥率較低，都低于18.2%，說明阿米卡星目前還不易被此酶鈍化。有報(bào)道稱ESBLs編碼質(zhì)?？梢酝瑫r(shí)攜帶氨基糖苷類、喹諾酮類等藥物的耐藥基因，導(dǎo)致臨床上產(chǎn)ESBLs菌株不僅對(duì)青霉素類、頭孢菌素類產(chǎn)生耐藥，而且也對(duì)其他藥物出現(xiàn)了耐藥，表現(xiàn)為多重耐藥[12]。從本研究資料可以看出，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)慶大霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星的耐藥率在31.0%～64.3%，已出現(xiàn)多重耐藥，與其報(bào)道相一致。但是，近3年來，我院環(huán)丙沙星、左氧氟沙、慶大霉素3種抗菌藥物的耐藥率均出現(xiàn)了下降趨勢(shì)，分別從2010年的57.1%、48.1%、64.3%下降到2012年的47.6%、31.0%、50.0%。這可能與原衛(wèi)生部下發(fā)的《關(guān)于抗菌藥物臨床應(yīng)用管理有關(guān)問題的通知》文件中嚴(yán)格規(guī)定了喹諾酮類藥物臨床應(yīng)用范圍，醫(yī)院嚴(yán)格執(zhí)行文件中喹諾酮類作為內(nèi)科使用的適應(yīng)證及限制其作為外科圍術(shù)期用藥的相關(guān)規(guī)定，并且減少氨基糖苷類抗菌藥物的使用有關(guān)。本資料顯示產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)碳青霉烯類抗菌藥物亞胺培南3年來未檢出耐藥株。碳青霉烯類抗生素可有效抑制大多數(shù)的革蘭陰性細(xì)菌的生長(zhǎng)，特別是能有效治療產(chǎn)ESBLs和持續(xù)高產(chǎn)C類頭孢菌素酶（AmpC酶）的革蘭陰性桿菌所致的感染，但是耐碳青霉烯類的肺炎克雷伯菌呈逐年上升趨勢(shì)，呈現(xiàn)出多藥耐藥株[13]。因此，我們也應(yīng)該謹(jǐn)慎合理地使用碳青酶烯類抗菌藥物。產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)各種復(fù)合制劑如哌拉西林/他唑巴坦有較好的敏感性，臨床效果也較好，這3年的耐藥率控制在10%左右，并有波動(dòng)性下降趨勢(shì)，對(duì)呋喃妥因藥物的耐藥率也比較低，小于14.3%。因此，綜合以上信息資料，對(duì)產(chǎn)ESBLs輕至中度感染者，首選β-內(nèi)酰胺類/β-內(nèi)酰酶抑制劑，如哌拉西林/他唑巴坦；次選氨基糖苷類與頭霉素類抗菌藥物聯(lián)合治療，包括阿米卡星、呋喃妥因等；治療效果不佳時(shí)，應(yīng)及時(shí)換用碳青霉烯類抗菌藥物，包括亞胺培南等；對(duì)嚴(yán)重菌株感染以及醫(yī)院發(fā)生產(chǎn)ESBLs感染時(shí)，可以首選碳青酶烯類抗菌藥物或聯(lián)合治療方案[14]。

綜上所述，肺炎克雷伯菌同時(shí)攜帶多種ESBLs甚至AmpC酶的情況也開始蔓延，使得臨床表現(xiàn)出多藥耐藥性和極高的耐藥率。這種情況應(yīng)引起格外重視，著重加強(qiáng)對(duì)產(chǎn)ESBLs菌株的檢測(cè)，制訂出相關(guān)的用藥指南，確保合理應(yīng)用抗生素，從而最大限度地減少產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶耐藥菌株的出現(xiàn)和傳播。

[1]Fan QL，Yao ZG，Guo HG，et al.Drug resistance of extended-spectrum β-lactamases producing Escherichia coli[J]. Chin J Nosocomial，2008，18（6）：859-861.

[2]Zhu D，Zhang YY，Wang F，et al.Surveillance of bacterial resistance in Shanghai hospitals during 2010[J].Chin J Infect Chemother，2011，5（5）：325-334.

[3]沈旸，涂厲標(biāo)，李旭梅.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶肺炎克雷伯菌與大腸埃希菌耐藥性分析[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2013，30（4）：432-433.

[4]陸麗，應(yīng)春妹.大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析[J].中國(guó)感染控制雜志，2010，9（5）：360-364.

[5]朱鴻，崔海洋，王茁.肺炎克雷伯菌395例產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶陽性率及耐藥性分析[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2013，17（7）：933-935.

[6]Zhou DY，Shen J，Zhou M.Drug sensitivity of extendedspectrum β-lactamases producing in 50 strains[J].Chin J of Clinical Rational Drug Use，2010，3（11）：69.

[7]陳俊瑤，江秀娟.產(chǎn)超廣譜B-內(nèi)酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（4）：872-874.

[8]韓玲芳，李醫(yī)，陳利濤，等.124株肺炎克雷伯菌耐藥性分析和產(chǎn)ESBLs株耐藥基因分型研究[J].現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)，2013，25（4）：398-400.

[9]賴小美，李林，郭有能，等.產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（18）：2385-2386.

[10]Cheung TK，Chu YW，Ma CH，et al.Plasmid mediated resistance to ciprof-loxacin and cefotaxime in clinical isolates of Salmonella enterica seroty peenteritidis in Hong Kong[J].J Antimicrob Chemother，2005，56：586-589.

[11]王冬國(guó)，周鐵麗.產(chǎn)AmpC酶和ESBLs肺炎克雷伯菌的耐藥性分析與耐藥基因檢測(cè)[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2009，19（1）：13-16.

[12]Zheng LH，Zheng JB，Mei X.Drug resistance of extended-spectrum β-lactamases producing strains in mountain hospitals[J].Chin J Nosocomial，2010，20（17）：2687-2688.

[13]周文聰，饒冠利，吳曉燕.耐碳青霉烯類的革蘭陰性桿菌耐藥性及產(chǎn)金屬酶分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2010，20（12）：3401-3403.

[14]Kelesidis T，Karageo Rgopoulos DE，Kelesidis I，et al. Tigecycline for the treatment of multidrug-resistantenterobacteriaceae：a systematic review of the evidence frommicrobiological and clinical studies[J].J Antimicrob Chemother，2008，62（5）：895-904.

Analysis of infection status and drug resistance of ESBLs-product Klebsiella pneumoniae in our hospital from 2010 to 2012

DING Lin1LING Liyan1DUAN Darong21.Department of Laboratory,the Second People's Hospital of Pinghu City,Zhejiang Province,Pinghu314201,China; 2.Department of Bacteriology,the First People's Hospital of Taizhou City,Zhejiang Province,Taizhou318000,China

Objective To investigate the clinical infection and drug resistance of producing extended spectrum betalactamases(ESBLs)of Klebsiella pneumoniae in the Second People's Hospital of Pinghu City(“our hospital”for short), and to provide guidance for clinical application of antibiotics.Methods The percent of Klebsiella pneumonia which produce ESBLs and its drug resistance and in our hospital from January 2010 to December 2012 was collected and analyzed.Results ESBLs-producing Klebsiella pneumoniae accounted for 35.6%and there was an increasing trend year by year.The producing ESBLs Klebsiella pneumoniae exhibited extremely high resistance to penicillin and cephalosporin, higher resistance to Penicillin,Ciprofloxacin,Levofloxacin,sensitive to Piperacillin/Tazobactam,Amikacin and Nitrofurantoin.There was no resistance observed to Imipenem.Conclusion There is serious drug resistance for Klebsiella pneumoniae clinical use.It is necessary to pay more attention to the clinical bacterial culture and clinical used drugs.

Extended-spectrum β-lactamases;Drug resistance;Klebsiella pneumonia

R446.5

A

1673-7210（2014）02（b）-0028-03

2013-10-28本文編輯：張瑜杰）