章小雨綜述,戴曉愛審校

(縉云縣疾病預(yù)防控制中心檢驗科,浙江縉云321400)

免疫膠體金技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用與進(jìn)展

章小雨綜述,戴曉愛審校

(縉云縣疾病預(yù)防控制中心檢驗科,浙江縉云321400)

免疫膠體金技術(shù)是一種以膠體金作為示蹤標(biāo)志物的固相標(biāo)記新型免疫檢測技術(shù),因其具有快速、簡單等優(yōu)點(diǎn),在醫(yī)學(xué)檢驗的定性或定量檢測中得到了日益廣泛的應(yīng)用.本文從免疫膠體金檢測技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展作一簡要綜述.

免疫膠體金;檢測技術(shù);醫(yī)學(xué)檢驗;應(yīng)用進(jìn)展

膠體金也稱金溶膠,是由氯金酸在還原劑的作用下,形成的金顆粒懸液,具有膠體性、光吸收性及呈色性.免疫膠體金技術(shù)是一種以膠體金為示蹤標(biāo)記物,以硝酸纖維素膜為固相載體,利用濾膜的微孔濾過性,通過毛細(xì)管作用使含金標(biāo)記的抗原或抗體與特異性配體在膜上形成結(jié)合物,得到呈色的陽性信號,因而可用于抗原、抗體的定性、定量測定.膠體金最早由法拉第發(fā)現(xiàn)于1857年,直到上世紀(jì)七十年代才開始將膠體金引入免疫化學(xué)領(lǐng)域,建立起一種抗原抗體檢測方法.目前,在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域中,免疫膠體金定性檢測技術(shù)得到快速發(fā)展,半定量、定量方法也已日趨成熟.現(xiàn)就免疫膠體金檢測技術(shù)在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)展作一簡要綜述.

1 定性檢測法

免疫膠體金定性檢測法主要有斑點(diǎn)免疫金滲濾法(DIGFA)和膠體金免疫層析法(GICA).二種方法都具有檢測快速、簡單、特異性強(qiáng)、靈敏度高、抗基質(zhì)干擾強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),因此是一種適合基層現(xiàn)場篩查的快速檢測方法[1].

1.1 斑點(diǎn)免疫金滲濾法免疫金滲濾技術(shù)在上世紀(jì)80年代中期從固相酶免疫檢定技術(shù)上發(fā)展出來的.斑點(diǎn)免疫金滲濾法作為一種初篩試驗手段,體現(xiàn)了較高的早期診斷價值,有著很好的實用前景.李春暉等人[2]認(rèn)為在糞便隱血檢測中,膠體金滲濾法的靈敏度、抗干擾能力均優(yōu)于鄰甲苯胺法.李如林等[3]利用ELISA、流式微球載體技術(shù)(FMA)和膠體金滲濾三種不同方法進(jìn)行血清梅毒抗體檢測,結(jié)果顯示ELISA、FMA和DIGFA的三種方法靈敏度分別為96.00%、100%和94.00%,三種方法的特異性均為100%,提示三種方法的檢測結(jié)果具有極強(qiáng)的一致性.

1.2 膠體金免疫層析法上世紀(jì)90年代初,在免疫金滲濾技術(shù)的基礎(chǔ)上又建立了一種更為簡易快速的免疫層析檢測技術(shù).Marot-Leblond等[4]采用GICA法進(jìn)行陰道念珠菌檢測,結(jié)果敏感性為100%,特異性為82%,優(yōu)于傳統(tǒng)革蘭染色鏡檢和微生物培養(yǎng).方春元等[5]用膠體金早早孕定性檢測試驗和化學(xué)發(fā)光免疫法進(jìn)行比較:2.0IU以下與陰性的符合率為100%、2.0~1000.0IU與弱陽性的符合率為97.2%、1000.0IU以上與強(qiáng)陽性的符合率為97.5%,二者結(jié)果有著較好的一致性.王玉金等[6]建立了一種霍亂弧菌O139膠體金免疫層析快速檢測法,檢測霍亂弧菌O139群的最低檢出濃度為1X 105CFU/ml;與細(xì)菌培養(yǎng)法對比檢測184份臨床標(biāo)本,特異性和靈敏度均達(dá)100%.Brunt等采用GICA技術(shù)檢測大腸桿菌O157,檢測限為500個細(xì)菌[7].梁秋光等[8]用GICA檢測含鼠疫陽性參考血清的鼠型動物溶血血清45份,結(jié)果全部陽性,而間接血凝微量法的對照結(jié)果則無法判斷,表明GICA法在應(yīng)對溶血血清方面有著很大的優(yōu)越性.孟芳等[9]對心臟疾病患者進(jìn)行心肌三聯(lián)測試,其靈敏度肌紅蛋白為100%、肌酸肌酶同工酶為96.3%和肌鈣蛋白為85.2%;結(jié)果表明膠體金法心肌三聯(lián)檢測卡,對診斷急性心肌梗死具有較好的臨床診斷價值.

2 半定量、定量檢測

膠體金本身具有明顯的紅色或粉紅色,可用肉眼與光學(xué)傳感器判斷檢測線(T)的顏色深淺,進(jìn)行半定量、定量分析.

2.1 半定量檢測法早期就有人提出硝酸纖維素膜上的顯色面積與抗體濃度呈正相關(guān)[10],從而建立了半定量測定方法;曹丹如等[11]建立一種伴有定量質(zhì)控點(diǎn)的斑點(diǎn)免疫金滲濾法,可半定量檢測人尿中的微量白蛋白.該立法與散射免疫濁度法的結(jié)果符合性良好,已經(jīng)達(dá)到了對尿微量白蛋白篩查試驗的臨床要求.

2.2 定量檢測法隨著膠體金免疫定量檢測儀的出現(xiàn),開創(chuàng)了一種新型的快速定量分析方法.定量分析方法的原理是基于硝酸纖維素膜上檢測線(T)的顏色深淺與待測物濃度呈現(xiàn)一定的比例關(guān)系[12];利用光學(xué)傳感器對試劑條進(jìn)行掃描,與事先制定的標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,從而得出定量分析的結(jié)果.由于膠體金試紙條檢測線顯色是一個動態(tài)過程,試紙條的生產(chǎn)工藝、檢測時的工作環(huán)境以及待測樣本的差異性等因素都會影響到這一動態(tài)顯色的結(jié)果[13].因此有人提出了一種檢測線(T)/質(zhì)控線(C)比值定量法.T/C比值法是依據(jù)硝酸纖維素膜上的T、C線顯色反應(yīng)的影響因素基本一致,通過T、C線吸光值的比值,在一定程度上可以消除時間、溫度和待測樣本等因素對試紙條顯色過程的影響[14],是一種較為合理的定量檢測方法.謝士嘉等[15]建立的膠體金免疫層析定量方法,能準(zhǔn)確地檢測樣品中的金黃色葡萄球菌腸毒素B,其檢出限為8ng/ml,線性范圍為8~1000ng/ml.聶聰?shù)萚16]所建立的基于T/C比值的膠體金免疫層析方法,對相思子毒素檢測的靈敏度已達(dá)到為30ng/ml,線性范圍30~ 600ng/ml,敏感性與ELISA法相近,已達(dá)到臨床檢測范圍.

3 膠體金技術(shù)的其他應(yīng)用

3.1 在免疫電鏡上的應(yīng)用隨著膠體金技術(shù)的不斷發(fā)展,人們將其與電鏡技術(shù)相結(jié)合,逐步形成了膠體金免疫電鏡技術(shù).它具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定位精確等優(yōu)點(diǎn).吳淑燕等[17]建立膠體金標(biāo)記血小板膜糖蛋白的免疫電鏡技術(shù),結(jié)果表明利用膠體金技術(shù)可以顯著的提高樣品的檢出率,為開展血小板功能研究奠定基礎(chǔ).

3.2 在納米磁與核酸適配體上的應(yīng)用納米磁分離-膠體金與核酸適配體-膠體金為當(dāng)前二種新型的膠體金技術(shù).納米磁性微粒和核酸適配體作為特異性識別元件,能夠?qū)蟹肿訌某煞謴?fù)雜的生物體系中分離出來,起到樣品的濃縮作用,從而提高檢測的靈敏度和檢出率[18].

3.3 在多項聯(lián)合檢測技術(shù)上的應(yīng)用多項聯(lián)合檢測技術(shù)可以同時檢測多種成分,能節(jié)省大量的檢測時間和成本,具有很大的應(yīng)用價值,是未來的發(fā)展方向.吳堅美等[19]建立了一種新型膠體金免疫層析試紙條,可同時檢測巨細(xì)胞病毒、風(fēng)疹病毒、弓形蟲和單純皰疹病毒的4種抗體;與ELISA法對比,其符合率為97.90%~100%.吳文曄等[20]建立了一種能同時檢測檢測黃曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A兩種真菌毒素的膠體金試紙條,二種毒素的靈敏度均可達(dá)到2.5μg/L,且二者之間互不干擾,重復(fù)性、穩(wěn)定性均良好.

4 結(jié)語

作為一種新的免疫學(xué)方法,免疫膠體金技術(shù)是繼免疫酶標(biāo)技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)之后的第四大免疫標(biāo)記技術(shù)[21].與其他方法比較,具有快捷方便等優(yōu)勢,但也存在著檢測結(jié)果易受到試驗環(huán)境因素的影響等不足.如血、尿等標(biāo)本形成的試紙條背景噪聲,對儀器定量分析有明顯的干擾作用[22].另外,免疫膠體金與其他傳統(tǒng)檢測方法相比,在檢出率、靈敏度方面都還存在一定的差異.有報道以ELISA法為標(biāo)準(zhǔn)時,免疫膠體金法測定HBsAg的檢出率為56.76%(105/185)[23];以電化學(xué)發(fā)光免疫分析法為標(biāo)準(zhǔn)時,檢出率只有為32.00%(16/50)[24].穆煜等[25]將膠體金免疫層析法甲型/乙型流感快速檢測試劑用于H1N1型流感病毒的篩查,其陽性預(yù)示值為40.0%,陰性預(yù)示值為95.8%;實驗靈敏度為66.7%,診斷特異性是88.5%.認(rèn)為此法作為初步篩查實驗時還具有一定的局限性.

由此可見,有必要建立一套膠體金制備的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)體系,以保證試劑質(zhì)量,提高檢測穩(wěn)定性.同時將免疫膠體金與其他不同平臺相結(jié)合,可使其檢測技術(shù)再上一個新的臺階,在醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用也會更為廣泛,對于急診標(biāo)本或疫情現(xiàn)場的快速檢測都有著重大意義.

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R446.6

A

1674-1129(2014)03-0279-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.03.015

2013-12-13;

2014-01-07)

章小雨,女,1990年出生,檢驗師,研究方向為微生物檢驗.

戴曉愛,女,1968年出生,副主任技師,研究方向為微生物檢驗.