吳 婷 蔣寶平 田 磊 居文政△

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京210029）

脈絡(luò)寧注射液對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究*

吳 婷1蔣寶平2田 磊1居文政1△

（1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 南京210029）

目的觀察脈絡(luò)寧注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織的保護(hù)作用損傷的療效。方法將24只大鼠隨機(jī)分成3組，即假手術(shù)組、模型組和脈絡(luò)寧組（每組各8只），后兩組采用線(xiàn)栓法造成大鼠多發(fā)性腦梗死，脈絡(luò)寧組給脈絡(luò)寧注射液尾靜脈注射；觀察比較3組大鼠行為學(xué)改變及腦含水量、腦指數(shù)、腦組織內(nèi)SOD、MDA含量變化。結(jié)果 脈絡(luò)寧注射液可降低腦缺血再灌注大鼠的腦指數(shù)與腦含水量，降低大鼠腦組織內(nèi)MDA含量，提高SOD活性（均P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論脈絡(luò)寧注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷有一定的保護(hù)作用。

脈絡(luò)寧注射液 腦缺血再灌注 腦指數(shù) 腦含水量 SOD MDA

脈絡(luò)寧注射液由金銀花、牛膝、玄參、石斛組成，具有養(yǎng)陰清熱、補(bǔ)益肝腎、活血化瘀的功效，其治療腦梗死療效最為顯著［1］。筆者建立大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注（MCAO）模型，觀察尾靜脈注射脈絡(luò)寧注射液后，大鼠神經(jīng)行為學(xué)的改變及腦梗死率、腦含水量、腦指數(shù)指標(biāo)、SOD、MDA的影響，以驗(yàn)證脈絡(luò)寧注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 脈絡(luò)寧注射液，金陵藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)20110501。紅四氮唑（TTC），上海試劑三廠(chǎng)，批號(hào)070410。MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)20031012。SOD試劑盒，南京建成生物工程研究所，批號(hào)20041010。

1.2 動(dòng)物 SD大鼠，清潔級(jí)，雄性，體質(zhì)量250～350 g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（浙）2008-0033，大鼠飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室全屏障清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)房?jī)?nèi)。

1.3 儀器 DGG-9140型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海森信實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；賽多利斯CAP225D電子天平（德國(guó)）；752分光光度計(jì)，上海第三分析儀器廠(chǎng)。

1.4 分組與造模 24只SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、脈絡(luò)寧組各8只。腹腔注射10％水合氯醛，待動(dòng)物麻醉后，用鼠板固定。頸正中切開(kāi)，分離肌肉和筋膜，顯露出右側(cè)頸總動(dòng)脈 （CCA），沿頭部方向分離CCA、頸外動(dòng)脈（ECA）、頸內(nèi)動(dòng)脈（ICA）以及ICA的顱外分支翼突腭動(dòng)脈。結(jié)扎CCA的近端，用眼科剪在距分叉處約1 cm血管壁上剪一小口，將線(xiàn)栓自ECA沿心臟方向插入，剪斷與其相連的ECA血管，線(xiàn)栓經(jīng)CCA分叉處通過(guò)ICA入大腦前動(dòng)脈，將ECA連同線(xiàn)栓一起結(jié)扎固定，縫合肌肉和皮膚，青霉素外涂于傷口以防感染。缺血4 h后再灌注20 h，再灌注時(shí)外拉線(xiàn)使其球端回至ECA內(nèi)即可。假手術(shù)組除不插線(xiàn)外其余步驟同上。

1.5 給藥方法 大鼠術(shù)前12h禁食不禁水。假手術(shù)組于手術(shù)后4 h尾靜脈注射0.9％氯化鈉注射液4 mL/kg，模型組與脈絡(luò)寧組分別在缺血 4 h后尾靜脈注射0.9％氯化鈉注射液4 mL/kg、脈絡(luò)寧注射液4 mL/kg，而后再灌注20 h。

1.6 標(biāo)本采集與檢測(cè) （1）待MCAO大鼠麻醉清醒后4 h及24 h，進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)并加以評(píng)分。（2）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，大鼠斷頭取腦，置于冰鹽水中10 min，將腦組織進(jìn)行冠狀切片，均勻切成2 mm厚腦片，放入2％TTC磷酸鹽緩沖溶液中37℃水浴20 min，缺血壞死的神經(jīng)細(xì)胞，呈現(xiàn)白色，而非壞死的神經(jīng)細(xì)胞呈現(xiàn)鮮紅色。分離并稱(chēng)重梗死區(qū)域，求出梗死區(qū)質(zhì)量占腦質(zhì)量的百分比，即腦梗死率。大鼠斷頭取腦，稱(chēng)質(zhì)量后，置烘箱內(nèi)，106℃烘干后稱(chēng)重。公式：腦指數(shù)＝腦濕質(zhì)量 （g）/體質(zhì)量（100g）；腦含水量 （％）＝（濕質(zhì)量-干質(zhì)量）/濕質(zhì)量× 100％。（3）取腦組織，稱(chēng)質(zhì)量，加冰生理鹽水制成10％腦組織勻漿，測(cè)定MDA含量、SOD活性。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析。P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見(jiàn)表1～表3。與假手術(shù)組比較，模型組、脈絡(luò)寧組大鼠行為學(xué)評(píng)分均呈顯著升高（P＜0.01）；脈絡(luò)寧組大鼠與模型組比較，行為學(xué)評(píng)分顯著降低（P＜0.01），表明脈絡(luò)寧注射液對(duì)大鼠的神經(jīng)功能缺損有顯著改善作用。脈絡(luò)寧注射液組大鼠的腦指數(shù)、腦含水量及腦梗死率明顯低于模型組（P＜0.05）。與假手術(shù)組比較，模型組的SOD活性明顯下降，MDA含量明顯升高 （P＜ 0.05）。與模型組相比，脈絡(luò)寧組SOD活性升高 （P＜ 0.05），MDA含量下降（P＜0.05），表明脈絡(luò)寧注射液可以減少全腦缺血、缺氧后腦組織中SOD的消耗及MDA的生成。

表1 各組大鼠行為學(xué)評(píng)分比較（±s）

表1 各組大鼠行為學(xué)評(píng)分比較（±s）

與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組 別 n 清醒后4 h 清醒后24 h假手術(shù)組 8 0.63±0.14 0.38±0.12模型組 8 6.88±1.25** 6.50±1.41**脈絡(luò)寧組 8 3.98±1.32** 3.02±1.01**△△

表2 各組大鼠腦指數(shù)、腦梗死率及腦含水量比較（±s）

表2 各組大鼠腦指數(shù)、腦梗死率及腦含水量比較（±s）

組 別 n 腦指數(shù)C（g/100 g）假手術(shù)組 8 0.335±0.016模型組 8 0.366±0.027*脈絡(luò)寧組 8 0.336±0.026△腦含水量（％）腦梗死率（％）74.85±2.92 0.00±0.00 81.18±3.08* 8.55±3.28**76.27±3.66△ 6.88±1.76**△

表3 各組大鼠腦勻漿SOD活性、MDA含量比較（±s）

表3 各組大鼠腦勻漿SOD活性、MDA含量比較（±s）

組 別 n SOD（U/mg） MDA（nmol/mg）假手術(shù)組 8 326.6±63.4 14.16±2.31模型組 8 231.7±57.2* 21.04±7.03*脈絡(luò)寧組 8 305.2±66.5△ 14.55±2.87△

3 討論

在腦梗死早期，由于局部血液循環(huán)障礙，導(dǎo)致腦組織缺血水腫、腦細(xì)胞死亡。同時(shí)，由于顱內(nèi)壓升高，壓迫腦部血管，影響腦部微循環(huán)。脈絡(luò)寧注射液能夠擴(kuò)張血管、增加腦血流量、降低腦血管阻力、改善微循環(huán)，從而達(dá)到降低腦指數(shù)、減輕腦水腫、防止腦梗死的作用。發(fā)生腦梗死后快速促使缺血組織血流恢復(fù)，是防治細(xì)胞不可逆損傷的重要條件，但是在再灌注的同時(shí)，也可能加重缺血所致的損傷，其機(jī)制十分復(fù)雜。目前認(rèn)為，自由基連鎖反應(yīng)是多發(fā)性腦梗死后造成腦部功能損傷的主要原因之一，也是缺血再灌注損傷的主要機(jī)制［2-5］。腦?；颊唧w內(nèi)的自由基代謝出現(xiàn)紊亂，動(dòng)態(tài)平衡被破壞，使其含量顯著升高，而體內(nèi)可清除過(guò)多自由基的SOD活性下降，導(dǎo)致腦損傷。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)中的代謝產(chǎn)物，其含量的測(cè)定可以反映脂質(zhì)過(guò)氧化程度，預(yù)知機(jī)體中自由基的含量，間接反映出細(xì)胞造成損傷的程度［6］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，脈絡(luò)寧注射液可降低腦缺血再灌注大鼠的行為指標(biāo)評(píng)分，增加腦組織勻漿中SOD的水平、降低MDA含量、降低腦梗死面積，表明脈絡(luò)寧注射液具有抗氧化的作用，可減輕腦缺血再灌注所造成的損傷，改善腦功能。

［1］吳婷，張軍，儲(chǔ)繼紅，等.脈絡(luò)寧注射液藥理及藥代學(xué)研究進(jìn)展［J］.江蘇中醫(yī)藥，2011，43（9）：93-94.

［2］White BC，Sullivan JM，Degracia DJ，et al.Brain ischemia and reperfusion：molecular mechanisms of neuronalinjury［J］. J Neurol Sci，2000，179（S 1-2）：1-33.

［3］Jiang MZ，Tsukahara H，Ohshima Y，et a1.Effects of antioxidants and nitric oxide on TNF-alpha-induced adhesion molecule expression and NF-kappaB activation in human dermal microvascular endothelial cells［J］.Life Sci，2004，75（10）：1159-1170.

［4］姜德華，金男革，玄漢石，等.大鼠急性局灶腦缺血再灌注腦組織NO含量和NOS活性的變化［J］.臨床神經(jīng)病學(xué)雜志，2000，13（4）：201-203.

［5］Yamawaki M，Sasaki N，Simoyama M，et al.Protective efectof edaravone against hypoxia-reoxygenation injury in rabbitcar diomyocytes［J］.Br J pharmacol，2004，142（3）：618-626.

［6］ 章軍建，阮旭中，張?zhí)K明.大鼠局灶性腦缺血再灌流半暗帶神經(jīng)細(xì)胞壞死與凋亡的動(dòng)態(tài)變化［J］.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，1999，18（3）：170-173.

Study of M ailuoning Injection on Rats w ith Focal Cerebral Ischem ia Reperfusion Injury

WU Ting，JIANG Bao-ping，TIAN Lei，et al.Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu Nanjing 210029，China

Objective：To establish rats with focal cerebral ischemia reperfusion model and to investigate effect of Mailuoning injection on injury induced by cerebral ischemia reperfusion.M ethods：twenty-four male SD rats were random ly divided into three groups with eight rats in each group：sham-operation control group，model group，and Mailuoning group.The model was established by middle cerebral artery occlusion.Neurological deficits scores，cerebral water content，activity of SOD，and the content of MDA were observed.Results：Compared with model group，Mailuoning group can significantly reduce the neurological deficits scores and cerebral water content，decrease the content of MDA，and increase SOD activity.Conclusion：Mailuoning injection can alleviate cerebral ischemia reperfusion injury in rats.

Mailuoning injection；Cerebral ischemia reperfusion；Cerebral index；Cerebral water content

R285.5

A

1004-745X（2014）04-0570-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.04.003

科技部重大新藥創(chuàng)制科技重大專(zhuān)項(xiàng)——中藥新藥臨床評(píng)價(jià)研究技術(shù)平臺(tái)（南京）建設(shè)（No 2012ZX09303009-002）；江蘇省中醫(yī)藥領(lǐng)軍人才（LJ200906）；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目（2010）

△通信作者

2013-12-26）