膝骨關(guān)節(jié)炎患者滑液中炎癥因子的表達(dá)及其與中醫(yī)證型的相關(guān)性分析

侯亞平

（湖南省老年醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，湖南 長沙 410016）

膝骨關(guān)節(jié)炎患者滑液中炎癥因子的表達(dá)及其與中醫(yī)證型的相關(guān)性分析

侯亞平

（湖南省老年醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科，湖南 長沙 410016）

目的 分析膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)不同中醫(yī)證型患者關(guān)節(jié)滑液中炎癥因子水平及其與膝骨關(guān)節(jié)炎中醫(yī)證型的相關(guān)性。方法 90例KOA患者(119膝)根據(jù)中醫(yī)辨證分為腎虛髓虧型、陽虛寒凝型及瘀血阻滯型。抽取關(guān)節(jié)液標(biāo)本，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA法）測定基質(zhì)金屬蛋白酶-13(MMP-13)、白介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、組織型金屬蛋白酶抑制劑-1(TIMP-1)水平。Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)分析其與中醫(yī)證型、年齡、病程之間的關(guān)系。結(jié)果 陽虛寒凝型患者M(jìn)MP-13、IL-1、TNF-α水平明顯高于腎虛髓虧型及瘀血阻滯型（P＜0.05），TIMP-1水平明顯低于腎虛髓虧型及瘀血阻滯型（P＜0.05）；相關(guān)性分析提示MMP-13、IL-1、TNF-α水平與年齡和病程呈正相關(guān)（P＜0.05），TIMP-1水平與年齡和病程呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論 不同中醫(yī)證型的KOA患者炎癥因子水平存在差異，陽虛寒凝型患者炎癥因子水平較腎虛髓虧及瘀血阻滯型患者高，說明此類型的患者軟骨組織免疫炎癥反應(yīng)處于一個高度激活的狀態(tài)；年齡大、病程長的患者炎癥因子水平較年齡小、病程短的患者高，提示KOA患者應(yīng)該注意早期防治，以減少關(guān)節(jié)腔內(nèi)炎癥反應(yīng)對膝關(guān)節(jié)的損傷。

膝骨關(guān)節(jié)炎；炎癥因子；腎虛髓虧證；瘀血阻滯證；陽虛寒凝證

骨關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)屬中醫(yī)學(xué)的“骨痹”范疇[1]，其發(fā)病機(jī)制至今未完全探明，但近年的研究提示基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)、白介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等軟骨損傷因子在OA的發(fā)病中起到重要作用。而組織型金屬蛋白酶抑制劑(TIMPs)等對MMPS的活性起重要的調(diào)節(jié)作用，對于骨關(guān)節(jié)的退變有保護(hù)性作用［2］。為了研究軟骨損傷因子在膝骨關(guān)節(jié)炎（KOA）病因病機(jī)中所起的作用，抽取90例KOA患者關(guān)節(jié)腔滑液，分析其與KOA中醫(yī)證型、年齡、病程之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象

所觀察90例患者均為2011年1月至2012年6月本院門診及住院確診為原發(fā)性KOA的患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)采用美國風(fēng)濕病協(xié)會1995年修訂的標(biāo)準(zhǔn)［3］?；颊呔胁煌潭鹊年P(guān)節(jié)腫脹、疼痛、跛行，蹲起或上、下樓梯時受限或疼痛加重。X線照片檢查均有不同程度的髕骨上下緣或關(guān)節(jié)邊緣唇樣改變，骨贅形成，脛骨髁間棘突或變尖，部分患者關(guān)節(jié)間隙變窄。排除對象：繼發(fā)性KOA，需服用鎮(zhèn)痛藥者，近期堅持服他汀類藥物者。其中男性53例，69膝；女性37例，50膝；年齡55～65歲，平均61.2歲；左膝48例，右膝71例；病程最長者25年，最短者2年，平均6年。按照《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》［1］，將90例膝骨關(guān)節(jié)炎患者分為3型，其中腎虛髓虧型29例，陽虛寒凝型28例，瘀血阻滯型33例。3組患者性別、年齡及病情分布情況如表1所示。結(jié)果表明腎虛髓虧型患者年齡大于其余2型（P＜0.05），而瘀血阻滯型病程長于其余2型（P＜0.05）。

表1 各中醫(yī)證型患者一般資料比較

1.2 MMP-13、IL-1、TNF-α、TIMP-1的測定

1.2.1 標(biāo)本的采集與保存 患者關(guān)節(jié)液的采集：采用髕骨外上緣穿刺法抽取關(guān)節(jié)腔內(nèi)積液約5 mL，將其離心后取上清液2 mL分裝于Eppendorf管中，-20℃低溫冰箱保存待測。

1.2.2 測定方法 采用美國R＆D公司提供的酶聯(lián)免疫吸附試劑盒。采用雙抗體夾心ELISA法進(jìn)行測定。在已預(yù)包被抗MMP-13、IL-1、TNF-α、TIMP-1單抗的酶標(biāo)板內(nèi)加入標(biāo)準(zhǔn)品(倍比稀釋6個梯度)和待測關(guān)節(jié)液樣品，再與HRP標(biāo)記二抗結(jié)合，經(jīng)徹底洗滌后加底物TMB顯色，采用雷杜RT-6000酶標(biāo)儀于450 nm測定吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度對數(shù)為橫坐標(biāo)，以吸光度值為縱坐標(biāo)，去除空白對照組吸光度值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算相應(yīng)的回歸方程。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同中醫(yī)證型患者炎癥因子分布情況

陽虛寒凝型患者M(jìn)MP-13、IL-1、TNF-α水平明顯高于腎虛髓虧型及瘀血阻滯型患者 （P＜0.05），TIMP-1水平明顯低于腎虛髓虧型及瘀血阻滯型患者（P＜0.05）；腎虛髓虧型和瘀血阻滯型患者關(guān)節(jié)液各因子水平無顯著差異(P＞0.05)。見表2。提示KOA中醫(yī)辨證為陽虛寒凝型的患者軟骨組織存在較為嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)，病理損傷較其余2型重。

表2 各證型患者膝關(guān)節(jié)液中MMP-13、IL-1、TNF-α、TIMP-1測定值比較 （±s，μg/L）

表2 各證型患者膝關(guān)節(jié)液中MMP-13、IL-1、TNF-α、TIMP-1測定值比較 （±s，μg/L）

注：與余2組比較*P＜0.05。

組別腎虛髓虧型陽虛寒凝型瘀血阻滯型F值P值n 29 28 33 MMP-13 238.36±32.23 257.32±48.08* 234.35±42.87 11.88＜0.05 IL-1 104.25±25.78 131.04±29.51* 113.49±31.90 13.69＜0.05 TNF-α 81.75±10.55 89.02±9.82* 80.73±16.22 15.45＜0.05 TIMP-1 330.11±57.99 272.94±57.68* 319.36±38.36 5.95＜0.01

2.2 膝關(guān)節(jié)液炎癥因子水平與年齡、病程之間的關(guān)系

結(jié)果提示MMP-13、IL-1、TNF-α水平與年齡和病程呈正相關(guān)（P＜0.05），TIMP-1水平與年齡和病程呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05），見表3。

表3 膝關(guān)節(jié)液中炎癥因子表達(dá)水平與年齡、病程之間的相關(guān)系數(shù)

3 討論

OA多發(fā)于中老年人群，臨床表現(xiàn)以反復(fù)關(guān)節(jié)疼痛，關(guān)節(jié)活動受限為主，極少數(shù)發(fā)展為關(guān)節(jié)畸形。其發(fā)病主要與年齡、性別、遺傳、關(guān)節(jié)損傷(包括急慢性損傷)、關(guān)節(jié)疾病(多為繼發(fā)性)、氣候因素、飲食因素等有關(guān)。病理情況下，KOA在上述致病因素作用下關(guān)節(jié)滑膜、軟骨及其基質(zhì)上發(fā)生免疫反應(yīng)。炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生與免疫細(xì)胞分泌大量炎性因子介導(dǎo)軟骨損傷有關(guān)。

中醫(yī)認(rèn)為血、瘀、寒、濕、風(fēng)及腎虛是OA發(fā)病的主要病理因素［4］。本研究發(fā)現(xiàn)不同中醫(yī)證型的KOA患者炎癥因子水平存在差異，陽虛寒凝型患者炎癥因子水平較腎虛髓虧及瘀血阻滯型患者高，說明此類型的患者膝關(guān)節(jié)軟骨組織免疫炎癥反應(yīng)處于一個高度激活的狀態(tài)。同時發(fā)現(xiàn)年齡大、病程長的患者炎癥因子水平較年齡小、病程短的患者高，提示KOA患者應(yīng)該注意早期防治，以減少關(guān)節(jié)腔內(nèi)炎癥反應(yīng)對膝關(guān)節(jié)軟骨的損傷。另外，在辨證組方時參考OA局部的微觀炎癥因子病理變化，標(biāo)本兼顧，既要補(bǔ)腎強(qiáng)骨，又要活血通絡(luò)，蠲痹止痛［5］。

[1]國家中醫(yī)藥管理局.中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)［S］.南京：南京大學(xué)出版社，1994：48.

[2]杜國輝，賀艷麗，陳建英，等.骨關(guān)節(jié)炎早期診斷的生化指標(biāo)［J］.中國生化藥物雜志，2009，30(3)：209-211.

[3]美國風(fēng)濕協(xié)會.骨關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)1995年修訂［J］.中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2010，14(6)：417.

[4]姚共和，劉向前，盧 敏，等.膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎期刊文獻(xiàn)病機(jī)因子與證候類型分析［J］.江蘇中醫(yī)藥，2005，26(10)：63-64.

[5]侯亞平.骨痹湯對膝骨關(guān)節(jié)炎患者滑液中MMP-13、IL-1、TNF-α、TIMP-1的影響［J］.世界中醫(yī)藥，2012，7（6）：488-490.

（本文編輯 馬 薇）

Expression of Inflammatory Factors in Synovial Fluid of Patients with Knee Osteoarthritis and its Correlation with TCM Syndromes

HOU Yaping
(Department of Integrated Chinese and Western Medicine,Geriatric Hospital of Hunan Province, Changsha,Hunan 410016,China)

Objective To examine the expression of matrix metalloproteinase-13(MMP-13), interleukin-1 (IL-1),tumornecrosisfactor-α (TNF-α),tissue inhibitorofmetalloproteinase-1 (TIMP-1)in the synovialfluid in knee jointsofosteoarthritispatientswith differentTCM syndromes,and analyze the relationship between the levels inflammatory cytokines and the kind of knee osteoarthritis syndromes.Methods 90 patients with knee osteoarthritis patients(119 Knee) are divided into three types according to TCM,type 1 is Shenxu Suikui;type 2 is Yangxu Hanning;type 3 is Yuxue Zuzhi.MMP-13,IL-1,TNF-α and TIMP-1 levels in synovial fluidsamples were measured by double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA). Spearson correlation test was used to analyze the relationship between TCM syndromes types with disease type,age and disease duration.Results ELISA results suggest that MMP-13,IL-1 and TNF-α levels were significantly higher in type 2 patients than that in type 1 and type 3 patients(P<0.05),while TIMP-1 levels were significantly lower than type 1 and type 3 patients (P<0.05); correlation analysis showed that MMP-13, IL-1 and TNF-α levels was positively correlated with age and disease duration (P<0.05), while TIMP-1 levels was negatively correlated with age and disease duration(P<0.05).Conclusion The inflammatory factors levels were variable in patients with different TCM syndrome types of knee osteoarthritis, the levels of inflammatory cytokines was higher in patients with Yangxu Hangning that in patients with Shenxu Suikui and Yuxue Zuzhi,indicating that cartilage tissues in patients with this type were in a highly activated state in immune and inflammatory systems.And we found that inflammatory cytokines levels was higher in patients with older age,longer duration of the disease compared with younger patients with short duration of the disease,suggesting that patients with knee osteoarthritis should be treated with early prevention to reduce the knee osteoarthritis injury by intra-articular inflammation

KOA;inflammatory factor;Shenxu Suikui;Yuxue Zuzhi;Yangxu Hanning

R684.3

B

10.3969/j.issn.1674-070X.2014.04.009.029.03

2013-12-26

湖南省科技廳一般項(xiàng)目（20115K13180）。

侯亞平，男，副主任醫(yī)師，從事中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕免疫疾病的研究。