中藥鑒定與標準研究

錢忠直+林瑞超+肖培根

中藥材品種繁多，習用品、代用品以及多基原、同名異物、同物異名等混亂問題一直是影響中藥安全有效的主要問題之一，如何鑒定復雜的中藥材是相關企業(yè)及監(jiān)管部門關注的難題?；b定、性狀鑒定、顯微鑒定和理化鑒定等傳統(tǒng)鑒定方法存在一定局限性，而且此類人才已遠遠滿足不了中藥現(xiàn)代化的市場需求。因鑒定方法缺失導致多起安全性事件，給中藥臨床應用帶來極大挑戰(zhàn)，如：2000年的馬兜鈴酸腎病事件，主要由含馬兜鈴酸的關木通和廣防己誤當不含馬兜鈴酸的木通和粉防己使用造成；有毒土三七誤當三七使用引起肝損害；亞香棒蟲草混入冬蟲夏草會引起頭暈、嘔吐、心悸等；有劇毒的東莨菪根混入蒼術中制造了“蒼術造假”事件；含土大黃苷的土大黃誤當大黃使用造成制售假藥；山銀花冒充金銀花、西洋參中混入人參、桃仁中摻上苦杏仁，雞冠花籽代替青葙子等混偽品問題時有發(fā)生。目前，中藥安全性已引起全民關注，成為中藥產(chǎn)業(yè)化和國際化的主要挑戰(zhàn)之一。

為解決中藥行業(yè)重大科技問題，保證中藥臨床應用安全、準確、有效，作為“國際生命條形碼計劃”4個中心節(jié)點（加拿大、美國、歐盟和中國）之一的中國學者研究團隊，經(jīng)過不懈的科學探索已取得可喜的成績。通過創(chuàng)新驅(qū)動研究與市場需求相結(jié)合，把鑒定研究、實驗開發(fā)、推廣應用結(jié)合起來，推動了中藥鑒定學的發(fā)展，對規(guī)范中草藥管理、加強藥品質(zhì)量控制、保證用藥安全提供了堅強支撐，完成了4 000余種中草藥及其混偽品的DNA條形碼研究，在國際上首次提出并驗證核基因組序列ITS2作為中草藥通用DNA條形碼^[1]，創(chuàng)建了全新“中草藥DNA條形碼生物鑒定體系”，完成了從跟隨國際研究到引領國際研究的轉(zhuǎn)變。編著了《中藥DNA條形碼分子鑒定》、《中華人民共和國藥典中藥材及原植物彩色圖鑒》等書籍，相關論文發(fā)表在BRV，PNAS，MER，PLoS，Cladistics，BMC，F(xiàn)EMS[1-7] 等國際著名刊物。中國首篇ITS2論文被德國專業(yè)網(wǎng)站選為近25年來在ITS2領域最受關注的16篇文章之一，該篇論文發(fā)表后4年被引用約400次。中國研究團隊構(gòu)建全世界最大的中草藥DNA條形碼鑒定數(shù)據(jù)庫，為每一種藥材貼上自己特有的基因標簽，獲國際國內(nèi)高度關注和評價。起草《中藥材DNA條形碼分子鑒定法指導原則》已獲準納入《中華人民共和國藥典》^[8]。中草藥DNA條形碼生物鑒定體系為中藥鑒定學開拓了嶄新的方法學領域并在行業(yè)內(nèi)廣泛應用，國內(nèi)藥品檢驗所、檢疫檢驗、企業(yè)、高等院校、海關和公安等單位廣泛介入，極大推動了中藥材鑒定的標準化、現(xiàn)代化和國際化進程。中草藥DNA條形碼生物鑒定體系是對經(jīng)典藥用植物分類學方法的有力補充和革命性突破，在國際國內(nèi)藥用植物領域處于領先水平，對中藥材及藥用植物的鑒定具有重要理論指導和應用價值，對解決我國生藥鑒定的重大科技難題具有重大意義。

本專題針對中藥鑒定與標準研究核心問題，以藥用動物、民族藥材、花粉類、細小種子類、有毒類等具有代表性中藥材為研究對象，利用DNA條形碼技術結(jié)合品種考證等開展研究。石林春等^[9]建立了中國動物藥材DNA條形碼數(shù)據(jù)庫，包含800余種動物藥材和大量混偽品及密切相關物種；賈靜等^[10]、張紅印等^[11]、陳俊等^[12]證實COI條形碼能成功鑒定穿山甲、蜈蚣、紫河車等動物藥材，對動物藥材鑒定、資源可持續(xù)利用和瀕危物種保護具有重要意義。馬孝熙等^[13]對蒲黃、松花粉等花粉類藥材，宋明等^[14]對細小種子類藥材車前子的DNA條形碼鑒定研究，有助于在市場流通中監(jiān)管外觀形態(tài)很難區(qū)分的細微類藥材。王果平等^[15]對維吾爾藥材沙棗的形態(tài)和DNA條形碼鑒定研究結(jié)果表明，新疆胡頹子屬3種沙棗可能為同一起源，為確定維吾爾藥材沙棗基原植物提供了科學依據(jù)。張雅琴等^[16]研究證實psbA-trnH序列可作為蕨類藥材的DNA條形碼，能準確、穩(wěn)定鑒定蕨類多基原藥材石韋。

師玉華等^[17]的研究證明ITS2條形碼能夠有效、準確鑒別涼茶藥材雞蛋花及其混偽品，為涼茶原材料雞蛋花藥材的鑒定提供一種新的分子手段。天南星為有毒類中藥，除同屬物種作為混偽品外，半夏屬植物虎掌等也廣泛存在，石林春等^[18]研究證明，ITS2作為DNA條形碼可以準確鑒定天南星3種基原物種及其混偽品。由于功效及在名稱上的相似，蒼、白二術自古以來容易混用，余亞東等^[19]研究證明ITS2序列在藥材白術、蒼術與混偽品的鑒定方面具有很好的效果。馬曉沖等^[20]研究證明ITS2序列可用于區(qū)分名稱容易混淆的木香、川木香、土木香、青木香、紅木香藥材。柴胡品種較多，造成藥材質(zhì)量極不穩(wěn)定，特別是有地區(qū)將有毒的大葉柴胡做柴胡用。于俊林等^[21]采用DNA條形碼分子鑒定可以準確鑒定柴胡與大葉柴胡。另外，ITS2序列對升麻^[22]、牡丹皮^[23]、合歡皮^[24]等藥材及其混偽品也能進行準確區(qū)分。張衛(wèi)等^[25]對21種金銀花品種進行本草考證，證明僅忍冬Lonicera japonica Thunb符合傳統(tǒng)藥用金銀花的植物學特征，為正品藥用金銀花。任風鳴等^[26]采用正交實驗設計對金錢草ISSR-PCR反應體系進行優(yōu)化，為金錢草遺傳多樣性分析、優(yōu)良品種鑒定和選育等奠定基礎。

本專題研究進一步論證了中草藥DNA條形碼生物鑒定體系的可靠性，從基因?qū)用娼鉀Q了中草藥與其常見混偽品的品種識別問題，研究物種具有代表性，樣品材料豐富，既有原植物也有藥材，樣本量大，分析結(jié)論穩(wěn)定并具有可重復性，為中藥鑒定與標準研究提供科學參考。特設本專題供相關領域的同行參閱及批評指正。endprint

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