張 闊 ，徐 媛，于海龍 ，劉寶虎 ，郭 義 ，周 丹 ，陳劍美

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193；2.浙江泰康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，杭州 310111）

疼痛是一種與組織損傷或潛在組織損傷相關(guān)的不愉快的主觀感覺和情感體驗(yàn)，以及保護(hù)性或病理性反應(yīng)[1]。隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快以及社會老齡化的到來，各種疼痛性疾病發(fā)病率迅速上升，其中，肌肉骨骼疼痛是所有疼痛中最普遍、影響范圍最廣的。目前，臨床可用的鎮(zhèn)痛方式多種多樣，以針灸治療和藥物治療為主[2-3]。穴位注射又稱“水針療法”，是將藥物注入腧穴以治療疾病的一種方法。它將現(xiàn)代西醫(yī)學(xué)常用的藥物注射法與中醫(yī)學(xué)的經(jīng)絡(luò)-腧穴理論相結(jié)合，綜合了針灸治療和藥物治療的優(yōu)勢，具有針刺和藥物的雙重作用[4-7]。

本研究以健康小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，觀察穴位注射紅茴香注射液對其耐痛閾的影響，探討生理狀態(tài)下穴位注射是否優(yōu)于肌肉注射，旨在為臨床應(yīng)用穴位注射治療疼痛性疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 試劑與儀器 紅茴香注射液（浙江泰康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號：101201），0.9%氯化鈉注射液（中國大冢制藥有限公司，批號：9F97G2），TD6001型電子秤，TF2-光熱測痛儀，小鼠固定器，10 μL微量進(jìn)液器。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物 清潔級昆明系小鼠，125只，體質(zhì)量（25±5）g，雌雄各半，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)學(xué)院衛(wèi)生學(xué)環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所動物實(shí)驗(yàn)中心提供，動物合格證號：SCXK－（軍）2009-003。在實(shí)驗(yàn)期間給予實(shí)驗(yàn)動物專用飼料喂養(yǎng)，自由飲水、進(jìn)食，保持生活環(huán)境通風(fēng)及清潔衛(wèi)生。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 動物分組 運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字表將125只小鼠隨機(jī)分為5組，即穴位注射紅茴香組（A組）、肌肉注射紅茴香組（B組）、穴位注射生理鹽水組（C組）、肌肉注射生理鹽水組（D組）和空白對照組（E組），每組25只。

2.2 干預(yù)方法 A組、C組：依據(jù)比較解剖法，選取小鼠后正中線上，第4腰椎棘下凹陷處。（相當(dāng)于人體“腰陽關(guān)”穴），分別用紅茴香注射液、0.9%氯化鈉注射液穴位注射，參考“人和動物間體表面積折算的等效劑量比值”折算[5]，每穴注射劑量為0.26 μL/g，相當(dāng)于人體每穴2 mL的用量，1次/日，治療1 d。B、D組：選取小鼠右側(cè)臀大肌，注射劑量同A組和C組。E組：不做任何干預(yù)。

2.3 痛閾測定 小鼠在室內(nèi)適應(yīng)30 min后放于固定盒內(nèi)，將鼠尾距尖端1.5 cm處內(nèi)側(cè)皮膚置于光熱測痛儀的輻射點(diǎn)上。用熱輻射對鼠尾皮膚致痛，由輻射開始到鼠尾擺動以逃避輻射的時間為甩尾的潛伏期，以連續(xù)測3次（每次間隔＞5 min）甩尾潛伏期的平均值作為小鼠耐痛閾。記錄各組干預(yù)后1、3、6、12、24、48、72、96、120、144、168h 小鼠的甩尾時間。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法 運(yùn)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩組比較，若方差齊選用LSD，若方差不齊采用 Dunnett’s T3 法，以 P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

C、D、E組在所有時間點(diǎn)內(nèi)組間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），而 A、B 兩組在注射后 3～120 h 內(nèi)較 C、D、E 組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），且在24～96 h 內(nèi)差異更為明顯（P＜0.01）。見表 1。

A、B組在注射后7 d時間內(nèi)耐痛閾整體趨勢高于其他3組。穴位注射紅茴香注射液后24 h出現(xiàn)耐痛閾明顯上升，48 h達(dá)到頂峰，24～72 h之間維持較高水平，之后逐漸下降，144 h后接近正常水平。肌肉注射紅茴香注射液組也在24～96 h之間維持較高的耐痛閾，120 h后接近正常水平。見圖1。

圖1 5種不同干預(yù)措施組小鼠耐痛閾的變化趨勢Fig.1 The variation trend of pain tolerance threshold of five different interventions groups in mice

4 討論

本研究結(jié)果提示穴位注射紅茴香注射液能顯著提高健康小鼠的耐痛閾，其效應(yīng)在24～96 h最為明顯，這與筆者臨床上使用紅茴香注射液的療效持續(xù)時間相一致。紅茴香性溫，味辛，具有活血通絡(luò)止痛、祛風(fēng)除濕之功效，相關(guān)臨床報道也表明，紅茴香注射液可用于治療肱骨外上髁炎[8]、軟組織損傷[9]、腰椎間盤癥[10]、腰肌勞損等疾病[11]，療效比較顯著。實(shí)驗(yàn)中選取小鼠第4腰椎棘突下凹陷處進(jìn)行穴位注射，此處相當(dāng)于人體腰陽關(guān)穴，具有補(bǔ)腎壯腰，溫經(jīng)通脈，調(diào)節(jié)全身之功。

結(jié)果中雖然穴位注射在多個時間點(diǎn)的整體趨勢要高于肌肉注射，但并不具有統(tǒng)計學(xué)差異。考慮其原因有：一方面，穴位注射具有將穴效與藥效整合的效應(yīng)，紅茴香注射液中存在莽草酸等鎮(zhèn)痛物質(zhì)，注射后可通過局部組織吸收入血，發(fā)揮其鎮(zhèn)痛及抗血小板凝集的作用[12-14]；在針刺過程中還可激活腧穴局部的粗神經(jīng)纖維，將信號傳入后在脊髓水平對痛敏神經(jīng)原起抑制作用[15]。此外，腧穴針刺后能促使局部肥大細(xì)胞脫顆粒，釋放組胺等細(xì)胞因子，并激活下丘腦-垂體-腎上腺軸，引起大量內(nèi)源性神經(jīng)肽類物質(zhì)的釋放[16]，產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。另一方面，本研究對象為健康小鼠，且針灸調(diào)節(jié)作用具有自限性，因此決定了其調(diào)節(jié)能力是有限度的，故本實(shí)驗(yàn)中穴位注射較肌肉注射對健康小鼠耐痛閾尚未顯示出統(tǒng)計學(xué)意義。

綜上所述，本研究證明了穴位注射紅茴香能提高健康小鼠的耐痛閾，為臨床使用該藥物提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。在今后的研究中，筆者將復(fù)制慢性疼痛的動物模型，并觀察穴位注射紅茴香注射液對慢性疼痛小鼠耐痛閾的影響，比較穴位注射與肌肉注射在疼痛模型上的療效差異，進(jìn)一步評價穴位注射紅茴香對痛閾的影響。

表1 不同干預(yù)措施組小鼠在不同時間點(diǎn)的耐痛閾（x±s）Tab.1 The pain tolerance threshold of different interventions at different time points in mice（x±s）s

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