張小麗，王瑞玲，宋 娜，王文靜，張 翠， 張學(xué)東，王沖沖，楊曉莉

四種乙型肝炎病毒表面抗體試劑盒檢測(cè)人乙型肝炎病毒表面抗體效果比較

張小麗1，王瑞玲1，宋 娜1，王文靜1，張 翠1， 張學(xué)東2，王沖沖2，楊曉莉1

目的 分析商品化試劑盒檢測(cè)人乙型肝炎病毒(乙肝)表面抗體(抗-HBs)之間的差異。方法 本院實(shí)驗(yàn)標(biāo)本252份，分別用雅培I2000定量試劑盒、羅氏e601定量試劑盒、安圖Auto Lumo A2000定量檢測(cè)試劑盒和國(guó)內(nèi)主流酶聯(lián)免疫法定性試劑盒(上?？迫A)檢測(cè)人乙肝表面抗體，以假定金標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各廠(chǎng)家的陰、陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析，并對(duì)3個(gè)定量檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行量值相關(guān)性分析。結(jié)果 4種乙肝表面抗體試劑與假定金標(biāo)準(zhǔn)相比，靈敏度和特異性都達(dá)到了93%以上，其中安圖和羅氏的靈敏度和特異性最高，達(dá)到了98%以上；羅氏試劑盒的躍登指數(shù)(靈敏度+特異性-100%)最高，為99.3%；與金標(biāo)準(zhǔn)比較，3種化學(xué)發(fā)光試劑盒檢測(cè)結(jié)果無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，而酶聯(lián)免疫法定性試劑盒檢測(cè)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。結(jié)論 主流乙肝表面抗體試劑盒在檢驗(yàn)乙肝表面抗體時(shí)均存在一定的假陽(yáng)性或假陰性，量值相關(guān)性較好，不影響臨床應(yīng)用分析。

表面抗體；金標(biāo)準(zhǔn)；靈敏度；特異性；量值相關(guān)性

乙型肝炎病毒表面抗體是由乙肝表面抗原誘導(dǎo)而產(chǎn)生的一種保護(hù)性抗體，是人體預(yù)防乙肝病毒入侵的有效屏障[1，2]。一般當(dāng)機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生抗-HBs后，就會(huì)具有免疫力，不會(huì)再感染乙肝病毒[3]。但抗-HBs不會(huì)永久存在，而會(huì)隨著時(shí)間等因素逐漸消失。檢測(cè)抗-HBs主要是用于監(jiān)測(cè)注射乙肝疫苗是否有效及體內(nèi)抗-HBs含量，還可以作為醫(yī)師對(duì)乙肝患者臨床用藥及病情的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)指標(biāo)。目前，抗-HBs檢測(cè)無(wú)確認(rèn)方法，定量檢測(cè)多采用化學(xué)發(fā)光法，定性檢測(cè)多采用酶聯(lián)免疫法[4]。但同一份標(biāo)本不同廠(chǎng)家試劑盒檢測(cè)會(huì)出現(xiàn)陰、陽(yáng)性及量值方面的差異。為此，本研究旨在分析比較四種商品化試劑盒檢測(cè)人乙肝病毒表面抗體之間的差異，為試劑盒選用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般材料 本院門(mén)診、住院患者的血液標(biāo)本252份，含肝移植患者樣本30份。

1.2 方法

1.2.1 儀器及試劑 分別采用雅培Architect I2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀及雅培抗-HBs試劑盒；羅氏生產(chǎn)的e601全自動(dòng)電化學(xué)儀及羅氏抗-HBs試劑盒；安圖生物Auto Lumo A2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀及安圖抗-HBs試劑盒；上?？迫A酶聯(lián)免疫乙肝表面抗體定性試劑盒及PHOMO酶免儀；以及各廠(chǎng)家配套的定標(biāo)液和質(zhì)控品。

1.2.2 數(shù)據(jù)分析比較方法 鑒于表面抗體無(wú)確認(rèn)方法，目前采用多家試劑平行檢測(cè)[5]，本次實(shí)驗(yàn)以通用的驗(yàn)證方法為標(biāo)準(zhǔn)：認(rèn)定3家檢測(cè)結(jié)果相同的為真陽(yáng)性或真陰性，將其定義為金標(biāo)準(zhǔn)；2家試劑檢測(cè)結(jié)果不同定為可疑，不參與結(jié)果統(tǒng)計(jì)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件，陰、陽(yáng)性結(jié)果分析進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，量值相關(guān)性統(tǒng)計(jì)采用線(xiàn)性回歸分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 樣本檢測(cè)結(jié)果 真陽(yáng)性共145份，真陰性共104份，可疑樣本共3份。

2.2 四種試劑盒的靈敏度、特異性及約登指數(shù)分析 雅培Architect I2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀抗-HBs試劑盒、羅氏e601全自動(dòng)電化學(xué)儀抗-HBs試劑盒、安圖Auto Lumo A2000全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀抗-HBs試劑盒檢測(cè)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；科華試劑盒檢測(cè)結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。四種試劑盒與假定金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)抗-HBs的對(duì)比結(jié)果見(jiàn)表1。四種試劑盒的靈敏度、特異性及約登指數(shù)見(jiàn)表2。

表1 四種乙肝病毒檢測(cè)試劑盒與假定金標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)抗-HBs的對(duì)比結(jié)果

表2 四種乙肝病毒檢測(cè)試劑盒的靈敏度、特異性及約登指數(shù) (%)

2.3 量值相關(guān)性分析 羅氏檢測(cè)結(jié)果與雅培檢測(cè)結(jié)果的量值有相關(guān)性(r=0.8953，圖1)；安圖檢測(cè)結(jié)果與雅培檢測(cè)結(jié)果的量值有相關(guān)性(r=0.9007，圖2)；安圖檢測(cè)結(jié)果與羅氏檢測(cè)結(jié)果的量值有相關(guān)性(r=0.9098，圖3)。

圖1 羅氏檢測(cè)結(jié)果與雅培檢測(cè)結(jié)果的量值相關(guān)性分析

圖2 安圖檢測(cè)結(jié)果與雅培檢測(cè)結(jié)果的量值相關(guān)性分析

圖3 安圖檢測(cè)結(jié)果與羅氏檢測(cè)結(jié)果的量值相關(guān)性分析

3 討 論

我國(guó)是乙肝大國(guó)。注射乙肝疫苗是預(yù)防乙肝和乙肝流行的重要手段，還可有效降低肝硬化和肝癌的發(fā)病率和病死率，因此準(zhǔn)確檢測(cè)乙肝表面抗體的濃度對(duì)評(píng)估注射疫苗后的免疫效果及臨床治療具有重要的意義。目前，臨床上普遍應(yīng)用化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)及酶聯(lián)免疫系統(tǒng)進(jìn)行定量和定性分析，但結(jié)果在不同檢測(cè)系統(tǒng)、不同實(shí)驗(yàn)室存在一定的差異，其可比性對(duì)于臨床應(yīng)用非常重要。

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，4種商品化乙肝表面抗體試劑盒均存在一定差異，與金標(biāo)準(zhǔn)相比，三種化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)乙肝表面抗體無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而酶聯(lián)免疫法與金標(biāo)準(zhǔn)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。差異產(chǎn)生的主要原因是不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的抗原、抗體試劑的差異導(dǎo)致非特異性反應(yīng)。化學(xué)發(fā)光法可通過(guò)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，能精確地進(jìn)行定性定量檢測(cè)，線(xiàn)性范圍寬[6]、靈敏度、特異性強(qiáng)，精密度和準(zhǔn)確性均高于酶聯(lián)免疫法，為接種乙肝疫苗后的機(jī)體免疫應(yīng)答狀況，以及乙肝患者治療后HBsAb濃度動(dòng)態(tài)觀察提供可靠的依據(jù)。而酶聯(lián)免疫法方法簡(jiǎn)單、費(fèi)用低，但特異性、靈敏度不及化學(xué)發(fā)光法，無(wú)法定量，容易受到HBsAg的影響[7]，只能滿(mǎn)足臨床對(duì)單純陽(yáng)性、陰性結(jié)果的判斷，更適合用于初篩實(shí)驗(yàn)。

本研究表明，三種化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)試劑盒檢測(cè)同一份樣本量值均存在一定的偏差，與羅氏e601及安圖A2000相比，雅培I2000靈敏度相對(duì)較低，主要出現(xiàn)在陰陽(yáng)臨界值及低濃度的標(biāo)本，與文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致。分析導(dǎo)致結(jié)果不同的主要原因是，不同的化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)由于使用的抗原及抗體、校準(zhǔn)品等不同，產(chǎn)生的 HBsAb類(lèi)型可能有所不同，得到的結(jié)果有一定的偏差；筆者對(duì)三種化學(xué)發(fā)光定量檢測(cè)在線(xiàn)性范圍內(nèi)的樣本進(jìn)行量值相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，R均大于0.85，相關(guān)性較好，與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，不影響臨床應(yīng)用分析。其中國(guó)產(chǎn)化學(xué)發(fā)光試劑盒安圖A2000在本次試驗(yàn)中顯示出較高的靈敏度和特異性，其操作智能化程度高、線(xiàn)性范圍寬、費(fèi)用相對(duì)于進(jìn)口試劑費(fèi)用低，值得臨床推廣使用。對(duì)于本研究中出現(xiàn)的3份可疑樣本，無(wú)法確認(rèn)是真陽(yáng)性還是假陽(yáng)性，筆者認(rèn)為主要與以下因素有關(guān)：首先是制備抗體試劑盒的活性材料來(lái)源于不同人種，存在抗原亞型方面的差異；其次，由于患者不同HBsAg亞型，其產(chǎn)生抗體與試劑盒的反應(yīng)性強(qiáng)弱不同，另一方面由于不同廠(chǎng)家生產(chǎn)的疫苗也不同，其產(chǎn)生抗體與試劑盒的反應(yīng)性強(qiáng)弱也不同。

本研究表明，無(wú)論是進(jìn)口或國(guó)產(chǎn)的乙肝病毒表面抗體試劑盒，在檢測(cè)乙肝表面抗體時(shí)均存在一定的假陽(yáng)性和假陰性。4種商品化表面抗體檢測(cè)試劑均存在一定比例的不符合樣本，需要結(jié)合臨床診斷及其余四項(xiàng)抗原、抗體結(jié)果進(jìn)行綜合分析。對(duì)于多家試劑量值差異的問(wèn)題，除了廠(chǎng)家規(guī)范已有的溯源外，臨床客戶(hù)在使用時(shí)需要做好解釋工作。對(duì)于定期監(jiān)測(cè)乙肝表面抗體濃度的患者，建議采用相同的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行定量檢測(cè)。

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(2014-06-13收稿 2014-08-22修回)

(責(zé)任編輯 尤偉杰)

Comparison of four commercially available assays for antibody to hepatitis B virus surface antigen

ZHANG Xiaoli1，WANG Ruiling1，SONG Na1, WANG Wenjing1, ZHANG Cui1，ZHANG Xuedong2， WANG Chongchong2，and YANG Xiaoli1.

1.Clinical laboratory, General Hospital of Chinese People’s Armed Police Forces,Beijing 100039,China. 2. Autobio Diagnostics Co Ltd, Zhengzhou 450016, China

Objective To study four commercially available assays for antibody to hepatitis B virus surface antigen. Methods A total of 252 specimens were tested by Abbott i2000、Roche e601、Autobio AutoLumoA2000 and a ELISA kit, respectively,and the quantitative results and the performance characteristics of the different test systems were compared. Results The sensitivity and specificity of different manufacturer kits for Anti-HBs were beyond 93%. The detection rates of compared CLIA(Chemiluminescence Immunoassay) commercial Anti-HBs reagents had no significant difference (P>0.05). Conclusions The four commercial Anti-HBs reagents have false positive and false negative results; the correlation analysis for quantitative results is beyond 0.85.

antibody to hepatitis B surface antigen；gold standard；sensitivity；specificity；correlation analysis

張小麗，本科學(xué)歷，技師，E-mail:zxl_5021@sina.com

1.100039北京，武警總醫(yī)院檢驗(yàn)科；2.450016，鄭州安圖生物工程股份有限公司

楊曉莉，E-mail:yangxiaolitwins@163.com

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