王婷，李麗，夏春，武燕，李建兵，程莎

（1.青島市計量測試所，山東青島 266101 ； 2.青島市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，山東青島 266061）

高效液相色譜儀蒸發(fā)光散射檢測器兩種校準用標準物質(zhì)的比較選擇

王婷1，李麗1，夏春1，武燕1，李建兵2，程莎2

（1.青島市計量測試所，山東青島 266101 ； 2.青島市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，山東青島 266061）

對高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）校準用標準物質(zhì)對乙酰氨基酚 - 甲醇溶液和咖啡因 - 甲醇溶液進行了比較選擇。與對乙酰氨基酚相比，咖啡因的缺點是色譜峰對稱性稍差，優(yōu)點是沒有雜質(zhì)峰，更重要的是咖啡因已經(jīng)研制出國家二級標準物質(zhì)，可以很好地溯源，所以咖啡因更適合作 ELSD 的校準物質(zhì)。

高效液相色譜儀；蒸發(fā)光散射檢測器；咖啡因；對 乙酰氨基酚

高靈敏度、性能穩(wěn)定的通用型檢測器的缺乏，在一定程度上制約了高效液相色譜（HPLC）法的應(yīng)用［1］。液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器(ESLD）是20世紀90年代開始應(yīng)用的一種質(zhì)量檢測器，對高效液相色譜儀傳統(tǒng)的檢測器是一個很好的補充。沒有紫外吸收的化合物如皂苷、內(nèi)酯、糖類等化合物在 ELSD 上會有響應(yīng)，而且色譜峰穩(wěn)定性好，靈敏度高，可進行梯度洗脫分析。因而以ELSD 檢測的液相色譜法在我國中藥、食品等檢測領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用［2］。

2002 年實施的國家計量檢定規(guī)程JJG705-2002《液相色譜儀》［3］列出了紫外、二極管陣列、熒光和示差折光4種檢測器的檢定方法。由于ELSD出現(xiàn)較晚，在2002版的規(guī)程中并沒有列出，對ELSD檢測器的溯源管理還處于真空狀態(tài)。2005 年中國藥典列出了必須使用ELSD檢測的26種藥品如黃芪、銀杏葉片、地膚子、知母、浙貝母、硫酸卡那霉素等［4］，ELSD的應(yīng)用范圍隨之?dāng)U大。在現(xiàn)階段，用戶一般使用廠家自帶的標準物質(zhì)進行校準溯源，校準物質(zhì)和校準方法不盡相同。

國內(nèi)外幾家較大的公司校準用標準物質(zhì)主要有對乙酰氨基酚、咖啡因、膽固醇、蔗糖和葡萄糖。何海紅［5］等對對乙酰氨基酚、咖啡因、膽固醇3種化合物進行了討論，認為膽固醇和咖啡因作為檢定用標準物質(zhì)較好。孟潔［6］等對三氯蔗糖和葡萄糖進行分析，發(fā)現(xiàn)三氯蔗糖相對于葡萄糖較為穩(wěn)定，更適于用作校準用標準物質(zhì)。王婷［7］等對用蔗糖和對乙酰氨基酚作為校準用標準物質(zhì)進行了討論，得出了蔗糖響應(yīng)較低、對稱性較差，對乙酰氨基酚溶液作為校準用標準物質(zhì)更適合的結(jié)論。

筆者根據(jù)國內(nèi)外相關(guān)技術(shù)文獻和前期研究的結(jié)論，篩選出兩種較優(yōu)校準物質(zhì)咖啡因和對乙酰氨基酚，對其進行了進一步比較。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-3000B 型，配 UM-5000型 ELSD（上海通微儀器有限公司），安徽晥儀科技有限公司；

咖啡因標準品（C8H10O2N4）：GBW(E) 100063，純度為 99.8%，U=0.2%，中國計量科學(xué)研究院；

對乙酰氨基酚標準品（C8H9NO2）：純度不小于99.0%，美國 Sigma 公司；

甲醇：色譜純，美國 Sigma 公司。

1.2 標準溶液配制

分別精確稱取 25 mg 咖啡因、對乙酰氨基酚于250 mL 容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至標線，超聲混勻，得質(zhì)量濃度為 1.0×10-4g／mL 的標準溶液。

1.3 ELSD 的檢測原理

首先將洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中檢測。

1.4 色譜條件

咖啡因和對乙酰氨基酚對應(yīng)的最佳色譜條件見表1。

表1 色譜條件

2 結(jié)果與討論

2.1 ELSD 校準用物質(zhì)的選擇

對前期篩選出的兩種較優(yōu)的校準物質(zhì)咖啡因和對乙酰氨基酚，根據(jù)其色譜特性進行比較。

2.2 色譜條件的選擇

漂移管溫度和流動相流速是影響 ELSD 響應(yīng)值的重要參數(shù)，因此設(shè)計各項變化條件并反復(fù)試驗，最終選擇出這兩種標準物質(zhì)的最優(yōu)實驗條件?？Х纫蚝蛯σ阴０被觾煞N校準物質(zhì)對應(yīng)的色譜條件試驗范圍見表2。

表2 兩種校準物質(zhì)實驗條件

根據(jù)試驗結(jié)果確定 1.4 色譜條件。在表2 中的實驗條件下，咖啡因在漂移管溫度 20～40℃的變化過程中，響應(yīng)值變化了 63 ；而對乙酰氨基酚在同樣的溫度變化范圍下，響應(yīng)值變化了 132。這說明對乙酰氨基酚對漂移管的溫度變化反應(yīng)更為敏感，不如咖啡因穩(wěn)定。

2.3 保留時間和峰面積的測定

在 1.4 色譜條件下，分別對 1.0×10-4g／mL 的咖啡因-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液進行分析，色譜圖分別見圖1、圖2，保留時間、峰面積及相對標準偏差列于表3。

圖1 咖啡因-甲醇溶液色譜圖

圖2 對乙酰氨基酚 -甲醇溶液色譜

表3 兩種校準物質(zhì)色譜測定結(jié)果

JJG 705-2002 “3.4 整機性能”要求定性測量重復(fù)性（n=6）不大于 1.5%，定量測量重復(fù)性（n=6）不大于 3.0%。從圖1、圖2 可以看出，咖啡因色譜峰對稱性比對乙酰氨基酚的對稱性稍差一些，但對乙酰氨基酚在 2 min 左右有一個雜峰，與對乙酰氨基酚的出峰時間較為接近，咖啡因使用的是國家標準物質(zhì)，純度較高，沒有雜質(zhì)峰影響。由表3數(shù)據(jù)可知，咖啡因的保留時間重復(fù)性優(yōu)于對乙酰氨基酚，而后者峰面積的重復(fù)性優(yōu)于前者。若參照 JJG 705-2002檢定規(guī)程，兩者均符合規(guī)定。但咖啡因已有市售國家二級標準物質(zhì)，純度很好，為選擇咖啡因作為檢定校準用標準物質(zhì)提供了重要依據(jù)。

3 結(jié)論

作為 ESLD 校準物質(zhì)，咖啡因的缺點是色譜峰對稱性稍差，優(yōu)點是沒有雜質(zhì)峰，而保留時間和峰面積的重復(fù)性與對乙酰氨基酚一樣，均符合規(guī)程規(guī)定的要求。對乙酰氨基酚受漂移管的溫度變化響應(yīng)值變化較大，不如咖啡因穩(wěn)定。另外，咖啡因已有國家標準物質(zhì) GBW(E) 100063，純度較高，在法制計量層面已經(jīng)是計量標準的一部分，而對乙酰氨基酚只是較純的化學(xué)試劑。因此咖啡因更適于作為 ESLD檢定校準用標準物質(zhì)。

［1］ Brown P R. High-Performance Liquid Chromatography Past Developments，Present Status，and Future Trends［J］. Anal Chem，1990，62(19): 995A-1008A.

［2］ 陽金勇 .液相色譜用 ELSD 蒸發(fā)光散射檢測器簡介與校準方法研究［J］.科教視野，2007，25: 324-325.

［3］ JJG 705-2002 液相色譜儀檢定規(guī)程［S］.

［4］ 國家藥典委員會 .中華人民共和國藥典［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［5］ 何海紅 .高效液相色譜用蒸發(fā)光散射檢測器檢定方法研究［J］.化學(xué)分析計量，2010，19(2): 78-80.

［6］ 孟潔，孔小平，許建軍，等 .校準蒸發(fā)光散射檢測器選用標準物質(zhì)的比較與分析［J］.化學(xué)分析計量，2010，19(4): 9-10.

［7］ 王婷，夏春，李麗，等 .高效液相色譜儀蒸發(fā)光散射檢測器校準用標準物質(zhì)的選擇［J］.化學(xué)分析計量，2014，23(1): 11-3.

Comparison of Two Kinds of Reference Materials on the Evaporative Scattering Detector for High Performance Liquid Chromatography

Wang Ting1, Li Li1, Xia Chun1, Wu Yan1, Li Jianbing2, Cheng Sha2
(1. Qingdao Institute of Measurement and Testing, Qingdao 266101, China; 2. Qingdao Supervision and Testing Center of Product Quality, Qingdao 266061, China)

The evaporative light scattering detector (ELSD) was tested by caffeine solution and acetaminophen methanol solution. Caffeine had no impurity peak compared with acetaminophen, but the symmetry of the peak was poorer. Caffeine was more suitable to be the reference material as the secondary reference material of caffeine had been developed and had a good traceability.

high performance liquid chromatography; evaporative light scattering detector; caffeine; acetaminophen

O657.7

A

1008-6145(2014)05-0009-03

聯(lián)系人：王婷；E-mail: 249295196@qq.com

2014-06-23

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.05.004