決明子茶中游離蒽醌含量及抗氧化能力的研究

田大年，黃宇

（1.寧夏醫(yī)科大學公共衛(wèi)生學院，寧夏銀川750004；2.寧夏醫(yī)科大學藥學院，寧夏銀川750004）

決明子為豆科植物決明（Cassia obtusifolia L.）或小決明（Cassia tora L.）的干燥成熟種子，為常用中藥。決明子入藥最早記載于《神農本草經》，列為上品，以明目之功而名，性味甘、苦、咸、微寒、無毒，歸肝、腎、大腸經。具有清肝明目、潤腸通便的作用[1]，現(xiàn)代藥理學研究表明，決明子有降血壓，降血脂，保肝抑菌等活性[2-3]，被廣泛應用。另外，決明子又是可以作為藥食兩用的中藥，是保健飲料的良好原料。近年來又發(fā)現(xiàn)決明子提取物具有清除自由基、抵抗氧化的作用[4-6]，因此決明子作為一種保健食品的原料越來越引起重視，極具開發(fā)應用價值。決明子茶是在決明子的基礎上進行炒制后所得的產品，具有潤腸通便功效，也是減肥佳品。蒽醌類為決明子的主要藥效成分，呈游離或與糖結合成苷狀態(tài)，苷類所連接的糖主要是葡萄糖。決明子中蒽醌類化合物因其結構的不同，溶解特性差異也不同。因此應根據其極性和水溶性的大小選擇合適的溶劑提取。提取方法有水熱浸提法、有機溶劑提取法、超臨界萃取技術、微波萃取技術。本文以不同比例的醇/水溶液作為溶劑提取決明子茶中的有效成分，采用醋酸鎂-甲醇法顯色[7]，再利用紫外可見光度法[8]研究提取物中游離蒽醌的含量，采用FRAP法[9-10]研究提取物抗氧化活性。旨在為決明子的保健食品的研究及資源開發(fā)上提供理論依據及檢測手段。

1 材料與儀器

1.1 儀器

UV-2550紫外分光光度計：日本島津；RE-3000旋轉蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠。

1.2 試劑及材料

決明子茶：銀川市雅麗茶食品有限公司，保健型80 g裝；二氯甲烷；1，8-二羥基蒽醌；醋酸鎂甲醇乙醇硫酸亞鐵三水合醋酸鈉；TPTZ （2，4，6－三吡啶基－S－三嗪）；鹽酸；冰醋酸；鐵粉；三氯化鐵均為分析純。

2 方法

2.1 試劑的配制

2.1.1 標準液的配制

精密稱取1，8-二羥基蒽醌0.010 g，量取二氯甲烷100 mL。配制成0.1 mg/mL的1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液置于100 mL量瓶中。

2.1.2 醋酸鎂-甲醇液的配置

精密稱取1.25 g醋酸鎂，量取250 mL甲醇。配制成0.5%的醋酸鎂-甲醇液，置于250 mL容量瓶中。

2.1.3 10 mmol/lTPTZ溶液的配制

準確稱取0.159 4 g TPTZ于50 mL容量瓶中，加40 mmol/L鹽酸溶液定容。搖勻備用。

2.1.4 20 mmol/L FeCl3溶液配制

準確稱取FeCl3粉末0.162 2 g于50 mL容量瓶中，加純化水至刻度，搖勻備用。

2.1.5 醋酸鹽緩沖溶液（PH3.6）

0.775 g三水合醋酸鈉+4 mL冰醋酸，然后用純化水定容至250 mL。搖勻備用

2.2 最大波長的選擇

以1，8-二羥基蒽醌為標準品，于105℃烘2 h后置干燥器內使用。精密量取1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液（0.1 mg/mL）1.0 mL，置于10 mL容量瓶中，水浴蒸發(fā)二氯甲烷至干。殘渣加入0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解并稀釋至刻度，搖勻，測定其吸收特征。

2.3 標準曲線的繪制

分別精密量取1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷的標準液（0.1 mg/mL）0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分別置 10 mL量瓶中，在水浴上揮去二氯甲烷，殘渣加0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解并稀釋至刻度，搖勻，于511 nm處測定其吸收度，以0.5%醋酸鎂-甲醇液作空白對照。

2.4 樣品的提取

取樣品決明子茶10 g，粉碎后，過40目篩，裝瓶標號待用。

2.4.1 樣品的超聲提取

稱取粉碎后的茶1 g，分別置于100 mL錐形瓶中，加入55%（乙醇/水為95%）乙醇各40 mL，置于超聲波清洗器中，溫度為45℃，功率為80 W，超聲處理30 min，靜置冷卻至室溫后抽濾到100 mL容量瓶中，重復提取兩次，合并濾液，用55%的乙醇定容至100mL，既得提取液。

2.4.2 樣品的回流提取

稱取粉碎后的茶1 g，于100 mL圓底燒瓶中加入55%（乙醇/水為95%）乙醇各30 mL分別回流1 h，再各加入25 mL溶劑重復兩次，抽濾，洗滌濾渣后合并溶液，于100 mL容量瓶中定容至刻度備用。

2.5 樣品的含量測定

精密稱取樣品適量，在水浴上揮去溶劑，用適量0.5%醋酸鎂-甲醇液溶解，并轉移至10 mL量瓶中，稀釋至刻度，搖勻，于511 nm處測定吸收度。以0.5%醋酸鎂-甲醇液作空白對照。

2.6 鐵還原抗氧化能力分析

2.6.1 配制FRAP試劑（現(xiàn)配現(xiàn)用）

10 mmol/L TPTZ 溶液：20 mmol/L FeCl3溶液：醋酸鹽緩沖溶液（pH3.6）=1∶1∶10的體積比混勻現(xiàn)用。

2.6.2 標準曲線的繪制

稱取硫酸亞鐵結晶0.695 g置于50 mL容量瓶中，加少許鐵粉防止氧化，作為母液，取此母液2.5 mL稀釋至25 mL，此稀釋液作為硫酸亞鐵標準液。分別取硫酸亞鐵標準液 0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、120 μL于5 mL容量瓶中，用FRAP試劑定容，混勻后在37℃下反應10 min，在593 nm處測吸光度。以硫酸亞鐵的摩爾濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準的曲線。

2.6.3 樣品的分析

分別取樣品提取液20 μL，置于5 mL容量瓶中，用FRAP試劑定容，混勻后在37℃下反應10 min，在593 nm處測吸光度。平行測3次。樣品中總抗氧化能力在標準曲線中查出相應的值，樣品的抗氧化能力以（mmol/L）/g表示。

3 結果分析

3.1 最大吸收波長測定

按照實驗2.2的方法處理，在紫外分光光度計下測定器最大吸收波長結果見圖1。

圖1 最大吸收波長Fig.1 The maximum absorption wavelength

可以發(fā)現(xiàn)醋酸鎂-甲醇法的最大吸收波長為511 nm。

3.2 標準曲線

在511nm處以1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷標準液質量濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制標準其曲線，曲線如圖2。

圖2 1，8-二羥基蒽醌二氯甲烷液標準曲線Fig.2 1，8-two hydroxyanthraquinone methylene chloride solution standard curve

可知在0.005 mg/mL～0.03 mg/mL的濃度范圍內線性良好，相關祥光系數(shù)R2=0.999 8，所得回歸方程為y=44.67x+0.027 2。

3.3 不同提取物中游離蒽醌的含量

不同提取物中游離蒽醌的含量，見表1。

表1 決明子中游離蒽醌的含量Table 1 The content of free anthraquinone in semen cassiae

由表1可看出樣品游離蒽醌百分含量：水回流0.08%；55%乙醇回流0.64%；95%醇回流0.35%；水超聲0.18%；55%醇超聲0.67%；95%醇超聲0.24%。55%醇提取游離蒽醌效果較好。

3.4 FRAP標準曲線

以硫酸亞鐵的摩爾濃度為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪制出標準曲線，如圖3。

圖3 FRAP標準曲線Fig.3 FRAP standard curve

在10 μmol/L～120 μmol/L 線性范圍良好，相關系數(shù)為R2=0.999 7，所得回歸方程為y=0.020 6x+0.040。

3.5 樣品鐵還原抗氧化力

樣品鐵還原抗氧化力見表2。

表2 樣品鐵還原抗氧化力測定Table 2 Samples ferric reducing antioxidant power

由表2可看出樣品的鐵還原抗氧化力為：水回流1.63 mmol/g；55%醇回流 2.14 mmol/g；95%醇回流1.51mmol/g；水超聲1.08mmol/g；55%醇超聲2.14mmol/g；95%醇超聲1.16 mmol/g。

4 討論

本實驗提取決明子茶中有效成分，對游離蒽醌進行了含量測定，并對提取物的抗氧化活性進行了研究。由實驗結果可知，決明子茶提取物中均含有一定量的游離蒽醌，因此決明子茶不管是用水或者是酒沖泡飲用，均有一定的潤腸通便功效?？赡苡捎跐櫮c通便作用較緩和，蒽醌含量較為適中，含量過多則易導致腹瀉等癥狀。本實驗結果為決明子茶具潤腸通便功效提供了理論依據。

決明子茶提取物能夠有效還原Fe3+，從抗氧化能力來看，用55%乙醇提取樣品明顯強于用95%乙醇和水提取的樣品，但因提取液的成分復雜，抗氧化作用的發(fā)揮并不是單靠某一種成分的作用，其具體原因有待進一步深入研究。

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