蘇冰霞+葉海輝+鄧愛妮

摘要采用氫化物發(fā)生原子熒光法測定海南白沙綠茶和紅茶中的硒含量，研究了儀器條件和還原劑等對硒原子熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明，最佳儀器條件為光電倍增管負(fù)高壓300 V，燈電流80 mA；還原劑濃度為1.5%，載流鹽酸濃度5%。該方法線性范圍0～10 μg/L時(shí)，與熒光值線性關(guān)系好，回歸方程為y=75.949x-8.795 4，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。方法檢出限是0.024 μg/kg，測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中硒的回收率為97.7%～109.6%。以國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)為監(jiān)控樣品，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉測定值與標(biāo)準(zhǔn)值吻合。白沙綠茶和紅茶硒元素含量分別是34.4和20.1 μg/kg。該方法線性范圍寬、靈敏度高、檢出限低，可用于茶葉等樣品中硒元素含量的準(zhǔn)確測定。

關(guān)鍵詞原子熒光 ；白沙綠茶 ；白沙紅茶 ；硒

分類號TS272.7

Optimized Determination of Selesium in Baisha Green and Red Tea

SU BingxiaYE HaihuiDENG Aini

(Center of Analysis and Testing / Hainan Provincial Key Laboratory of Quality and Safety for Tropical Fruits and Vegetables, CATAS, Haikou, Hainan 571101, China)

AbstractIn this study the content of selenium in Baisha green and red tea were determined by hydride generation atomic fluorescence spectrometry. The influence factor such as instrument conditions and the concentration of reducing agent were considered. The results showed that the best instrument conditions were the photomultiplier negative pressure 300V, lamp current 80mA; the concentration of reducing agent 1.5%, the concentration of hydrochloric acid current carrying 5%. The fluorescence values were good in the method when the linear range was 0 ~ 10μg/L, regression equation was y=75.949x-8.795 4, correlation coefficient, r=0.999 8, the detection limit was 0.024 μg/kg，and the recovery of method was 97.7% ~ 109.6%. This method was verified by analyzing the national reference material (GBW10016) and the found value was in good agreement with the certified value. The content of selenium in Baisha green and red tea was 0.0772 μg/kg and 0.0456 μg/kg. The method has wide linear range, high sensitivity, low detection limit, which was very suitable for the determination of trace selenium of tea in general laboratory.

Keywordshydride generation-atomic fluorescence spectrometry ;Baisha green tea ;Baisha red tea ; selesium

白沙綠茶和紅茶為海南省五指山區(qū)白沙黎族自治縣境內(nèi)的國營白沙農(nóng)場特產(chǎn)，中國國家地理標(biāo)志產(chǎn)品。因海南中部適宜的氣候與白沙隕石坑地區(qū)獨(dú)特的土壤條件，品質(zhì)優(yōu)良，營養(yǎng)成分高。其中對白沙綠茶的檢測分析證明白沙綠茶含有氨基酸、酶類、芳香特質(zhì)、多酚類和生物堿等各種對人體有益的物質(zhì)，成茶水浸出物為43.2%，水溶性灰分為71.4%。兩項(xiàng)指標(biāo)大大超過國家標(biāo)準(zhǔn)的34%和45%的指標(biāo)。

硒是對人體有益的微量元素，有抗氧化、抗腫瘤、延緩衰老、提高免疫和解毒等生物與生理功能[1-2]。人體自身不能合成硒，只能從食物中適量攝取。補(bǔ)硒過量又會(huì)引起生物體中毒，世界衛(wèi)生組織(WHO)、聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)、國際原子能機(jī)構(gòu)(IAEA)均規(guī)定了明確指標(biāo)：膳食硒的供給量為50～250 μg/d，成人個(gè)體硒最高安全攝入量為400 μg/d[3]。

植物性食物中的硒主要為有機(jī)硒，其利用率較含有機(jī)硒的動(dòng)物高，并且人體從環(huán)境中攝取硒主要來源于植物，目前對富硒植物的產(chǎn)品開發(fā)力度很大，而茶樹富集微量元素能力較強(qiáng)，基于對白沙綠茶等茶葉硒含量分析未見報(bào)道，本研究以國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)為監(jiān)控樣品，采用氫化物發(fā)生原子熒光法測定了海南白沙綠茶和紅茶中的硒含量，為茶葉等植物樣品中硒含量的準(zhǔn)確測定提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1試驗(yàn)材料

白沙綠茶和紅茶購于?？谀蠂?，將茶葉樣品80℃干燥、粉碎、過20目篩后裝入塑料袋中密封備用。

1.1.2儀器與試劑

植物粉碎機(jī)，坩堝，電熱板等；電熱鼓風(fēng)干燥箱；AE200型電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；Millpore-Q超純水器(廣州東銳科技有限公司)；AFS-9130原子熒光光譜儀(北京吉天儀器公司)；硒空心陰極燈；高純氬氣(純度≥99.99%)。高腳燒杯，表面皿，移液管，25 mL玻璃容量瓶。

硼氰化鉀、氫氧化鉀、鐵氰化鉀均為分析純；硝酸、高氯酸、鹽酸均為優(yōu)級純試劑；實(shí)驗(yàn)用水為超純水；硒元素標(biāo)準(zhǔn)溶液1000 μg/mL(國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心)。

1.2方法

1.2.1硒含量測定原理

樣品經(jīng)濃酸加熱消解后，低價(jià)硒被高氯酸氧化成4價(jià)硒，在6 mol/L鹽酸介質(zhì)中，6價(jià)硒被還原成4價(jià)硒。以硼氫化鉀作還原劑，將4價(jià)硒在鹽酸介質(zhì)中還原成硒化氫(H2Se)，由氬氣帶入原子化器進(jìn)行原子化，在硒空心陰極燈照射下，基態(tài)硒原子被激發(fā)到高能態(tài)，在去活化回到基態(tài)時(shí)，發(fā)出特征波長的熒光，其熒光強(qiáng)度值與硒含量成正比[4-5]。

1.2.2硒元素測定方法

1.2.2.1 茶葉消解

植物硒多以有機(jī)形態(tài)存在，儀器測定前需轉(zhuǎn)化為無機(jī)離子。鑒于硒的易揮發(fā)特性，植物硒多采用濕法消解并必須低溫趕酸[3-6]。本實(shí)驗(yàn)稱取0.5 g左右樣品于150 mL高腳燒杯中，加20 mL硝酸，上蓋表面皿，放置過夜；加入2 mL高氯酸，置電熱板上于150℃加熱消化至溶液清亮并冒濃白煙，取下放冷；加5 mL鹽酸溶液(6 mol/L)，于電熱板上加熱并保持微沸5 min。冷卻后，用超純水轉(zhuǎn)移樣液于25 mL容量瓶中，加2 mL濃鹽酸，1 mL鐵氰化鉀溶液，搖勻后放置6 h待測。同時(shí)做空白試驗(yàn)。

endprint

1.2.2.2 不同濃度試劑配制

鐵氰化鉀溶液(100.0 g/L)：稱取鐵氰化鉀10.03 g，用水溶解稀釋至100 mL，混勻。

還原劑硼氫化鉀和氫氧化鉀溶液的配制：各取10～25 g硼氫化鉀和5g氫氧化鉀溶于1 000 mL 蒸餾水中，配制濃度為1.0%、1.5%、2.0%、2.5%，搖勻儲(chǔ)于聚乙烯瓶中備用。

載流鹽酸：分別取15、25、40、50 mL的濃鹽酸，用蒸餾水稀釋至500 mL，配制濃度為3%、5%、8%、10%。

1.2.2.3 工作曲線

取1 000 μg/mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋為100.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。吸取10 mL 100.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液于100 mL容量瓶中，加2 mL濃鹽酸，1 mL鐵氰化鉀溶液，定容搖勻后放置6 h待測。測定時(shí)于自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)稀釋硒的工作曲線濃度為0、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 μg/L。

將原子熒光光度計(jì)打開，連接好電路、氣路、水路各個(gè)系統(tǒng)，將氬氣量調(diào)節(jié)至0.2～0.3 MPa。打開原子熒光光度計(jì)軟件，輸入各種參量，然后將儀器預(yù)熱，儀器穩(wěn)定后，開始測試工作曲線和樣品硒的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 原子熒光儀器測量條件優(yōu)化選擇

2.1.1光電倍增管負(fù)高壓優(yōu)化

設(shè)置燈電流80 V，其他條件不變，測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液隨負(fù)高壓(270、280、290、300、310、320、330V)對熒光強(qiáng)度的影響，結(jié)果見圖1。負(fù)高壓增大，熒光強(qiáng)度值增大，但空白的熒光強(qiáng)度也隨之增大并且影響光電倍增管壽命，故在靈敏度滿足要求時(shí)，應(yīng)盡量降低負(fù)高壓，經(jīng)過試驗(yàn)及儀器調(diào)試發(fā)現(xiàn)負(fù)高壓300 V即可達(dá)到要求。

2.1.2燈電流優(yōu)化

試驗(yàn)設(shè)置負(fù)高壓300 V，其他條件不變，測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液隨燈電流的高低對熒光強(qiáng)度的影響，結(jié)果見圖2。燈電流增大時(shí)，在一定范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度隨之增大，當(dāng)燈電流為80 mA時(shí)，熒光強(qiáng)度最大，燈電流值過大，會(huì)影響空心陰極的壽命并使噪聲增大，因此選擇此電流值測定。

2.1.3硼氰化鉀還原劑濃度選擇

硼氰化鉀(KBH4)是使Se還原并生成H2Se的重要試劑，其濃度過低，會(huì)導(dǎo)致還原不完全，分析結(jié)果偏低；濃度過高，會(huì)生成大量的氫氣而降低測試靈敏度[6]。本實(shí)驗(yàn)配制KBH4溶液(以0.5%KOH溶液配制)濃度分別為1%、1.5%、2.0%、2.5%來測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定結(jié)果見圖3。熒光強(qiáng)度隨KBH4濃度增加而增強(qiáng)，當(dāng)其濃度大于2%時(shí)熒光強(qiáng)度趨于平穩(wěn)。同時(shí)其噪聲也增加。選用1.5% KBH4溶液作為還原劑測定結(jié)果較好。

2.1.4載流鹽酸濃度選擇

鹽酸對Se的還原作用提供酸性條件，酸度大小對Se的準(zhǔn)確測定有較大的影響。本次試驗(yàn)以負(fù)高壓300 V，燈電流80 mA，硼氰化鉀(KBH4)1.5%，配制鹽酸溶液濃度分別為3%、4%、5%、6%、8%、10%來測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定結(jié)果見圖4。熒光強(qiáng)度隨鹽酸濃度增加先增強(qiáng)而后減弱，當(dāng)其濃度4%至5%時(shí)，熒光強(qiáng)度值最大。因此配制5%鹽酸溶液作為載流。

確定儀器條件如負(fù)高壓、燈電流、原子化器高度、載氣和屏蔽氣流量。見表1。

2.2工作曲線的繪制

根據(jù)1.2.2.3方法得到硒元素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度系列見表2，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線見圖5。

圖5結(jié)果表明硒元素含量在1.00～10.00 μg/L時(shí)，與熒光值線性關(guān)系好，回歸方程為y=75.949x-8.795 4，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。

2.3 方法檢出限

將10個(gè)樣品空白測定值計(jì)算檢出限，平均值減去3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差即為本方法的檢出限，計(jì)算結(jié)果見表3。

2.4 茶葉中硒元素的測定結(jié)果

茶葉中硒元素測定值見表4。

2.5加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

對國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)進(jìn)行平行樣品多次分析。并加入1 mL的1.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容后測定硒含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見表5?？梢娀厥章试?7.7%～109.6%。

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)研究以國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)為監(jiān)控樣品，采用氫化物發(fā)生原子熒光法測定海南白沙綠茶和紅茶中的硒含量，為篩選富硒植物提供一定的檢測方法依據(jù)。實(shí)驗(yàn)研究了儀器條件和還原劑等對硒原子熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明最佳儀器條件為光電倍增管負(fù)高壓300 V，燈電流80 mA；還原劑濃度為1.5%，載流鹽酸濃度5%。該方法線性范圍為0～10 μg/L時(shí)與熒光值線性關(guān)系好，回歸方程為y=75.949x-8.795 4，相關(guān)系數(shù)r = 0.999 8。方法檢出限是0.024 μg/kg，測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中硒的回收率為97.7%～109.6%。國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉測定值與標(biāo)準(zhǔn)值吻合。白沙綠茶和紅茶硒元素含量分別是34.4 、20.1 μg/kg。

氫化物發(fā)生原子熒光法測定靈敏度高、線性范圍寬、方法簡單快速[7-8]，對于譜線在200～290 nm 的元素，具有靈敏度高、檢出限低、適用于多元素同時(shí)分析的優(yōu)點(diǎn)[9-10]。本方法簡單易操作，分析成本低，適合大批量茶葉等植物樣品中硒的測定分析。

參考文獻(xiàn)

[1] 趙洪進(jìn)，劉家國，劉艷娟，等. 富硒麥芽中硒的氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定[J]. 現(xiàn)代食品科技，2007(03)：72-74.

[2] 李明遠(yuǎn). 微波消解-氫化物原子熒光光譜法測定食品中的微量元素硒[J]. 光譜實(shí)驗(yàn)室，2007(05)：618-621.

[3] 錢薇，蔣倩，王如海，等.程序控溫石墨消解-氫化物原子熒光光譜法測定植物中痕量硒[J]. 光譜學(xué)與光譜分析，2014(01)：235-240.

[4] GB 5009.93-2010，食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)，食品中硒的測定.

[5] 王震，范世華，方肇倫. 順序注射蒸氣發(fā)生非色散原子熒光光譜法測定環(huán)境樣品中痕量硒[J]. 分析化學(xué)研究簡報(bào)，2005(02)：195-197.

[6] 茍?bào)w忠，唐文華，張文華，等. 氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定植物樣品中的硒[J]. 光譜學(xué)與光譜分析，2012(05)：1 401-1 404.

[7] 王梅，張紅香，鄒志輝，等. 原子熒光光譜法測定富硒螺旋藻片中不同形態(tài)、價(jià)態(tài)的硒[J]. 食品科學(xué)，2011(06)：179-183.

[8] 徐永新，雒昆利. 氫化物發(fā)生原子熒光光譜法對水中總硒含量測試方法改進(jìn)研究[J]. 光譜學(xué)與光譜分析，2012(02)：532-536.

[9] 杜明，趙鐳，趙廣華，等. 生物樣品中微量硒測定方法的進(jìn)展[J]. 理化檢驗(yàn)-化學(xué)分冊，2007(09)：797-802.

[10] 丁剛，胡家英，周可金. 微波消解-原子熒光法測定富硒油菜籽中硒的方法研究[J]. 湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2007(02)：195-198.

endprint

1.2.2.2 不同濃度試劑配制

鐵氰化鉀溶液(100.0 g/L)：稱取鐵氰化鉀10.03 g，用水溶解稀釋至100 mL，混勻。

還原劑硼氫化鉀和氫氧化鉀溶液的配制：各取10～25 g硼氫化鉀和5g氫氧化鉀溶于1 000 mL 蒸餾水中，配制濃度為1.0%、1.5%、2.0%、2.5%，搖勻儲(chǔ)于聚乙烯瓶中備用。

載流鹽酸：分別取15、25、40、50 mL的濃鹽酸，用蒸餾水稀釋至500 mL，配制濃度為3%、5%、8%、10%。

1.2.2.3 工作曲線

取1 000 μg/mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋為100.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。吸取10 mL 100.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液于100 mL容量瓶中，加2 mL濃鹽酸，1 mL鐵氰化鉀溶液，定容搖勻后放置6 h待測。測定時(shí)于自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)稀釋硒的工作曲線濃度為0、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 μg/L。

將原子熒光光度計(jì)打開，連接好電路、氣路、水路各個(gè)系統(tǒng)，將氬氣量調(diào)節(jié)至0.2～0.3 MPa。打開原子熒光光度計(jì)軟件，輸入各種參量，然后將儀器預(yù)熱，儀器穩(wěn)定后，開始測試工作曲線和樣品硒的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 原子熒光儀器測量條件優(yōu)化選擇

2.1.1光電倍增管負(fù)高壓優(yōu)化

設(shè)置燈電流80 V，其他條件不變，測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液隨負(fù)高壓(270、280、290、300、310、320、330V)對熒光強(qiáng)度的影響，結(jié)果見圖1。負(fù)高壓增大，熒光強(qiáng)度值增大，但空白的熒光強(qiáng)度也隨之增大并且影響光電倍增管壽命，故在靈敏度滿足要求時(shí)，應(yīng)盡量降低負(fù)高壓，經(jīng)過試驗(yàn)及儀器調(diào)試發(fā)現(xiàn)負(fù)高壓300 V即可達(dá)到要求。

2.1.2燈電流優(yōu)化

試驗(yàn)設(shè)置負(fù)高壓300 V，其他條件不變，測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液隨燈電流的高低對熒光強(qiáng)度的影響，結(jié)果見圖2。燈電流增大時(shí)，在一定范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度隨之增大，當(dāng)燈電流為80 mA時(shí)，熒光強(qiáng)度最大，燈電流值過大，會(huì)影響空心陰極的壽命并使噪聲增大，因此選擇此電流值測定。

2.1.3硼氰化鉀還原劑濃度選擇

硼氰化鉀(KBH4)是使Se還原并生成H2Se的重要試劑，其濃度過低，會(huì)導(dǎo)致還原不完全，分析結(jié)果偏低；濃度過高，會(huì)生成大量的氫氣而降低測試靈敏度[6]。本實(shí)驗(yàn)配制KBH4溶液(以0.5%KOH溶液配制)濃度分別為1%、1.5%、2.0%、2.5%來測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定結(jié)果見圖3。熒光強(qiáng)度隨KBH4濃度增加而增強(qiáng)，當(dāng)其濃度大于2%時(shí)熒光強(qiáng)度趨于平穩(wěn)。同時(shí)其噪聲也增加。選用1.5% KBH4溶液作為還原劑測定結(jié)果較好。

2.1.4載流鹽酸濃度選擇

鹽酸對Se的還原作用提供酸性條件，酸度大小對Se的準(zhǔn)確測定有較大的影響。本次試驗(yàn)以負(fù)高壓300 V，燈電流80 mA，硼氰化鉀(KBH4)1.5%，配制鹽酸溶液濃度分別為3%、4%、5%、6%、8%、10%來測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定結(jié)果見圖4。熒光強(qiáng)度隨鹽酸濃度增加先增強(qiáng)而后減弱，當(dāng)其濃度4%至5%時(shí)，熒光強(qiáng)度值最大。因此配制5%鹽酸溶液作為載流。

確定儀器條件如負(fù)高壓、燈電流、原子化器高度、載氣和屏蔽氣流量。見表1。

2.2工作曲線的繪制

根據(jù)1.2.2.3方法得到硒元素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度系列見表2，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線見圖5。

圖5結(jié)果表明硒元素含量在1.00～10.00 μg/L時(shí)，與熒光值線性關(guān)系好，回歸方程為y=75.949x-8.795 4，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。

2.3 方法檢出限

將10個(gè)樣品空白測定值計(jì)算檢出限，平均值減去3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差即為本方法的檢出限，計(jì)算結(jié)果見表3。

2.4 茶葉中硒元素的測定結(jié)果

茶葉中硒元素測定值見表4。

2.5加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

對國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)進(jìn)行平行樣品多次分析。并加入1 mL的1.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容后測定硒含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見表5?？梢娀厥章试?7.7%～109.6%。

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)研究以國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)為監(jiān)控樣品，采用氫化物發(fā)生原子熒光法測定海南白沙綠茶和紅茶中的硒含量，為篩選富硒植物提供一定的檢測方法依據(jù)。實(shí)驗(yàn)研究了儀器條件和還原劑等對硒原子熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明最佳儀器條件為光電倍增管負(fù)高壓300 V，燈電流80 mA；還原劑濃度為1.5%，載流鹽酸濃度5%。該方法線性范圍為0～10 μg/L時(shí)與熒光值線性關(guān)系好，回歸方程為y=75.949x-8.795 4，相關(guān)系數(shù)r = 0.999 8。方法檢出限是0.024 μg/kg，測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中硒的回收率為97.7%～109.6%。國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉測定值與標(biāo)準(zhǔn)值吻合。白沙綠茶和紅茶硒元素含量分別是34.4 、20.1 μg/kg。

氫化物發(fā)生原子熒光法測定靈敏度高、線性范圍寬、方法簡單快速[7-8]，對于譜線在200～290 nm 的元素，具有靈敏度高、檢出限低、適用于多元素同時(shí)分析的優(yōu)點(diǎn)[9-10]。本方法簡單易操作，分析成本低，適合大批量茶葉等植物樣品中硒的測定分析。

參考文獻(xiàn)

[1] 趙洪進(jìn)，劉家國，劉艷娟，等. 富硒麥芽中硒的氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定[J]. 現(xiàn)代食品科技，2007(03)：72-74.

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1.2.2.2 不同濃度試劑配制

鐵氰化鉀溶液(100.0 g/L)：稱取鐵氰化鉀10.03 g，用水溶解稀釋至100 mL，混勻。

還原劑硼氫化鉀和氫氧化鉀溶液的配制：各取10～25 g硼氫化鉀和5g氫氧化鉀溶于1 000 mL 蒸餾水中，配制濃度為1.0%、1.5%、2.0%、2.5%，搖勻儲(chǔ)于聚乙烯瓶中備用。

載流鹽酸：分別取15、25、40、50 mL的濃鹽酸，用蒸餾水稀釋至500 mL，配制濃度為3%、5%、8%、10%。

1.2.2.3 工作曲線

取1 000 μg/mL硒標(biāo)準(zhǔn)溶液逐級稀釋為100.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液。吸取10 mL 100.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液于100 mL容量瓶中，加2 mL濃鹽酸，1 mL鐵氰化鉀溶液，定容搖勻后放置6 h待測。測定時(shí)于自動(dòng)進(jìn)樣器自動(dòng)稀釋硒的工作曲線濃度為0、1.0、2.0、4.0、8.0、10.0 μg/L。

將原子熒光光度計(jì)打開，連接好電路、氣路、水路各個(gè)系統(tǒng)，將氬氣量調(diào)節(jié)至0.2～0.3 MPa。打開原子熒光光度計(jì)軟件，輸入各種參量，然后將儀器預(yù)熱，儀器穩(wěn)定后，開始測試工作曲線和樣品硒的濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 原子熒光儀器測量條件優(yōu)化選擇

2.1.1光電倍增管負(fù)高壓優(yōu)化

設(shè)置燈電流80 V，其他條件不變，測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液隨負(fù)高壓(270、280、290、300、310、320、330V)對熒光強(qiáng)度的影響，結(jié)果見圖1。負(fù)高壓增大，熒光強(qiáng)度值增大，但空白的熒光強(qiáng)度也隨之增大并且影響光電倍增管壽命，故在靈敏度滿足要求時(shí)，應(yīng)盡量降低負(fù)高壓，經(jīng)過試驗(yàn)及儀器調(diào)試發(fā)現(xiàn)負(fù)高壓300 V即可達(dá)到要求。

2.1.2燈電流優(yōu)化

試驗(yàn)設(shè)置負(fù)高壓300 V，其他條件不變，測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液隨燈電流的高低對熒光強(qiáng)度的影響，結(jié)果見圖2。燈電流增大時(shí)，在一定范圍內(nèi)熒光強(qiáng)度隨之增大，當(dāng)燈電流為80 mA時(shí)，熒光強(qiáng)度最大，燈電流值過大，會(huì)影響空心陰極的壽命并使噪聲增大，因此選擇此電流值測定。

2.1.3硼氰化鉀還原劑濃度選擇

硼氰化鉀(KBH4)是使Se還原并生成H2Se的重要試劑，其濃度過低，會(huì)導(dǎo)致還原不完全，分析結(jié)果偏低；濃度過高，會(huì)生成大量的氫氣而降低測試靈敏度[6]。本實(shí)驗(yàn)配制KBH4溶液(以0.5%KOH溶液配制)濃度分別為1%、1.5%、2.0%、2.5%來測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定結(jié)果見圖3。熒光強(qiáng)度隨KBH4濃度增加而增強(qiáng)，當(dāng)其濃度大于2%時(shí)熒光強(qiáng)度趨于平穩(wěn)。同時(shí)其噪聲也增加。選用1.5% KBH4溶液作為還原劑測定結(jié)果較好。

2.1.4載流鹽酸濃度選擇

鹽酸對Se的還原作用提供酸性條件，酸度大小對Se的準(zhǔn)確測定有較大的影響。本次試驗(yàn)以負(fù)高壓300 V，燈電流80 mA，硼氰化鉀(KBH4)1.5%，配制鹽酸溶液濃度分別為3%、4%、5%、6%、8%、10%來測定10 μg/L的硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，測定結(jié)果見圖4。熒光強(qiáng)度隨鹽酸濃度增加先增強(qiáng)而后減弱，當(dāng)其濃度4%至5%時(shí)，熒光強(qiáng)度值最大。因此配制5%鹽酸溶液作為載流。

確定儀器條件如負(fù)高壓、燈電流、原子化器高度、載氣和屏蔽氣流量。見表1。

2.2工作曲線的繪制

根據(jù)1.2.2.3方法得到硒元素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度系列見表2，標(biāo)準(zhǔn)工作曲線見圖5。

圖5結(jié)果表明硒元素含量在1.00～10.00 μg/L時(shí)，與熒光值線性關(guān)系好，回歸方程為y=75.949x-8.795 4，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。

2.3 方法檢出限

將10個(gè)樣品空白測定值計(jì)算檢出限，平均值減去3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差即為本方法的檢出限，計(jì)算結(jié)果見表3。

2.4 茶葉中硒元素的測定結(jié)果

茶葉中硒元素測定值見表4。

2.5加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

對國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)進(jìn)行平行樣品多次分析。并加入1 mL的1.0 μg/L硒標(biāo)準(zhǔn)溶液，定容后測定硒含量并計(jì)算回收率，結(jié)果見表5?？梢娀厥章试?7.7%～109.6%。

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)研究以國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉(GBW10016)為監(jiān)控樣品，采用氫化物發(fā)生原子熒光法測定海南白沙綠茶和紅茶中的硒含量，為篩選富硒植物提供一定的檢測方法依據(jù)。實(shí)驗(yàn)研究了儀器條件和還原劑等對硒原子熒光強(qiáng)度的影響。結(jié)果表明最佳儀器條件為光電倍增管負(fù)高壓300 V，燈電流80 mA；還原劑濃度為1.5%，載流鹽酸濃度5%。該方法線性范圍為0～10 μg/L時(shí)與熒光值線性關(guān)系好，回歸方程為y=75.949x-8.795 4，相關(guān)系數(shù)r = 0.999 8。方法檢出限是0.024 μg/kg，測定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中硒的回收率為97.7%～109.6%。國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)茶葉測定值與標(biāo)準(zhǔn)值吻合。白沙綠茶和紅茶硒元素含量分別是34.4 、20.1 μg/kg。

氫化物發(fā)生原子熒光法測定靈敏度高、線性范圍寬、方法簡單快速[7-8]，對于譜線在200～290 nm 的元素，具有靈敏度高、檢出限低、適用于多元素同時(shí)分析的優(yōu)點(diǎn)[9-10]。本方法簡單易操作，分析成本低，適合大批量茶葉等植物樣品中硒的測定分析。

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