李前勇 ，張德志 ，徐 蓉 ，吳艷秋 ，詹 飛 ，吳潤彪

（1.西南大學(xué)榮昌校區(qū)動物醫(yī)學(xué)系，重慶 榮昌 402460；2.重慶市榮昌縣科學(xué)技術(shù)委員會，重慶 榮昌 402460）

1 四種流產(chǎn)性疾病的流行現(xiàn)狀

1.1 牛布氏桿菌病 布氏桿菌病是一種流行廣泛、危害很大的人畜共患性細菌性傳染病，我國對該病的控制標準設(shè)定為血清陽性率低于0.5%，但因頻繁引種、奶業(yè)生產(chǎn)快速發(fā)展等因素導(dǎo)致該病的發(fā)病率是控制標準的2倍以上，個別報道達到7.73%[1]。奶牛感染布氏桿菌后流產(chǎn)率可達31.2%。據(jù)報道，我國青海省每年因布病流產(chǎn)的犢牛約6萬頭，新疆每年因布病流產(chǎn)、空懷等少生幼畜達100～140萬頭[2]，造成的經(jīng)濟損失嚴重，對奶牛業(yè)的健康發(fā)展影響較大。

1.2 牛傳染性鼻氣管炎（IBR） 牛傳染性鼻氣管炎是由牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）引起的一種接觸性傳染病。我國奶牛感染較為嚴重，肖定漢等[3]報道，1991年至1995年期間北京地區(qū)奶牛IBRV的平均年感染率為8.03%，而1996～1998年的平均年感染率則上升到32.7%；艾玉萍等[4]報道，貴州省奶牛IBRV的感染率為5.45%；朱海明等[5]對我國北京、天津、山東、河北、河南、四川、云南等7個省市的牛群IBRV的感染狀況進行了調(diào)查，結(jié)果IBR陽性率為29.45%，其中天津、山東、河南、云南4個地方的IBRV感染率達到30%以上；石冬梅等[6]報道，河南省奶牛IBRV抗體陽性率為59.29%。

1.3 牛病毒性腹瀉-黏膜?。˙VD） 牛病毒性腹瀉-黏膜病是由牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）引起的一種急性、熱性傳染病。本病主要是在上世紀80年代以后，我國從德國、丹麥、美國、新西蘭等國家引入種源時帶入的，多年來因人們對該病的重視程度不夠而導(dǎo)致目前呈現(xiàn)廣泛性流行趨勢。張俊杰等[7]報道，北京地區(qū)規(guī)模化奶牛場牛群BVD的血清陽性率達到94.1%；黑龍江省規(guī)模化奶牛場自2006年后連續(xù)3年監(jiān)測到 BVD感染率為54.66%、57.68%、62.09%[8]；湖南省規(guī)?；膛瞿膛VD的血清陽性率為92.17%[9]；河南省奶牛BVD感染率為53.8%[10]；上海地區(qū)奶牛場育成牛的BVD血清陽性率為43.3%、成年乳牛為37.8%、犢牛為96%[11]。

1.4 牛新孢子蟲病 奶牛新孢子蟲病是由犬新孢子蟲感染引起的一種原蟲病，對牛的危害嚴重。廣泛性分布于澳大利亞、美國、新西蘭、南非、歐洲及亞洲，感染率在10%～40%之間，最高可達82%。2002年，我國學(xué)者徐雪平等[12]在對新疆部分地區(qū)牛群新孢子蟲病的血清學(xué)調(diào)查中，首次檢出該病血清學(xué)陽性牛，證明了我國牛群存在新孢子蟲?。淮撕?，劉群等[13]報道了北京地區(qū)奶牛新孢子蟲病陽性感染率為26.67%；蔡光烈等[14]報道了吉林省牛新孢子蟲病的感染率為17.32%；閆雙等[15]調(diào)查發(fā)現(xiàn)新疆地區(qū)具有流產(chǎn)病史的奶牛的新孢子蟲感染率為20.4%；吳茂霞等[16]報道，云南省奶牛新孢子蟲感染率為10.3%。

2 四種流產(chǎn)性疾病對奶牛生殖器官及功能的損害

2.1 布氏桿菌病 奶牛布氏桿菌病的病原主要是牛種布氏桿菌，其中1型、2型或3型布氏桿菌是引起奶牛流產(chǎn)的主要致病菌類型。懷孕奶牛感染后，因引發(fā)胎盤炎而導(dǎo)致妊娠后5～6個月內(nèi)流產(chǎn)，甚至產(chǎn)生子宮炎、敗血性全身感染，不少情況下還可引起奶牛多次流產(chǎn)。成年公牛感染后可引起睪丸炎和關(guān)節(jié)炎，是引起奶牛兩性不育的重要因素。

2.2 IBR 奶牛感染IBRV后，可經(jīng)血液循環(huán)進入胎膜、胎兒，引起胎兒感染發(fā)病，呈現(xiàn)急性死亡，繼而導(dǎo)致奶牛流產(chǎn)。生產(chǎn)中調(diào)查發(fā)現(xiàn)，IBRV感染懷孕奶牛后多數(shù)在妊娠4～6月齡出現(xiàn)流產(chǎn)，產(chǎn)第1、2胎次的母牛發(fā)病較多見[5]。

2.3 BVD BVDV感染后，影響母牛卵巢卵泡的發(fā)育，引起母牛發(fā)情紊亂、受精障礙；還可造成母牛子宮、卵巢上皮細胞呈現(xiàn)空泡樣變性、腫脹，甚至壞死，進而導(dǎo)致妊娠母牛流產(chǎn)、死胎。

2.4 新孢子蟲病 犬是新孢子蟲的中間宿主和終末宿主，奶牛通過采食新孢子蟲孢子化卵囊污染過的草料和飲水后引起感染。進入牛體內(nèi)的孢子化卵囊形成速殖子后，可通過胎盤垂直傳播，進而感染胎牛，引起母牛流產(chǎn)、死胎，新生犢牛運動障礙、腦炎等。

3 四種流產(chǎn)性疾病的疫苗研究進展

3.1 牛布氏桿菌疫苗 到目前為止，世界上大約有200多種布氏桿菌疫苗，聯(lián)合國糧農(nóng)組織與衛(wèi)生組織推薦牛使用的有流產(chǎn)布氏桿菌19號弱毒苗（S19號弱毒苗）、馬爾他布氏桿菌Rev·1號弱毒活苗（Rev·1菌苗）及流產(chǎn)布氏桿菌45/20號菌滅活佐劑苗（45/20菌苗）。在我國，主要推廣使用的布氏桿菌苗有豬布氏桿菌2號弱毒苗和馬耳他布氏桿菌5號弱毒苗，此兩種疫苗均為我國自主研制的優(yōu)良布魯氏菌苗，具有毒力穩(wěn)定、使用安全、免疫力好、免疫譜寬等優(yōu)點[17]。但各種傳統(tǒng)牛布氏桿菌病弱毒苗均存在不能用于懷孕母牛、免疫接種后產(chǎn)生的血清學(xué)反應(yīng)與野毒菌感染相似，臨床難于區(qū)分等缺點。近年來，國內(nèi)外學(xué)者運用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)在牛布氏桿菌新型疫苗方面進行了許多探索。Tibor等[18]用抗卡那霉素基因置換B.abortus S19菌和B.melitensis Rev-1的p39基因，獲得了兩株布氏桿菌p39缺失的工程菌苗，兩株基因缺失工程菌苗消除了變態(tài)反應(yīng)源，既保存了傳統(tǒng)苗的免疫原性和保護率，又提高了疫苗使用的安全性；HeY.Q.等[19]用重組蒼白桿菌表達了流產(chǎn)布魯氏菌Cu-Zn SOD蛋白，小鼠實驗表明該蛋白免疫原性較好，對流產(chǎn)布魯氏菌感染有一定的免疫保護力。

3.2 牛傳染性鼻氣管炎疫苗 早在1957年美國獸醫(yī)學(xué)家就用牛腎細胞傳代的方法獲得了牛IBR免疫原性好的弱毒疫苗，給牛肌肉注射后可以獲得較強的免疫力，但妊娠6～8月的母牛接種后極易引起流產(chǎn)；20世紀80年代，美國與比利時又研制成功了改良型的牛IBR弱毒疫苗，該苗采用滴鼻法接種，接種72h后即可獲得保護力，妊娠母牛也可安全使用。我國于20世紀90年代從匈牙利引進牛IBR Bartna-Nu/8毒株，中國獸醫(yī)監(jiān)察所在此基礎(chǔ)上成功研制出了適合我國奶牛的IBR弱毒疫苗[5]；此后，我國自主分離致弱的IBRV LNM疫苗株獲得成功，并研制成了具有良好保護力的IBR疫苗[29]。與弱毒疫苗比較，滅活疫苗相對比較安全。用乙醇或皂角苷使IBRV強毒滅活，制成的滅活苗可使動物獲得預(yù)防強毒攻擊的免疫能力；俄羅斯科學(xué)家采用細胞單層傳代培養(yǎng)法獲得了IBRV半制品制備的滅活疫苗，該疫苗免疫原性保持期可長達4年[21]。

3.3 牛病毒性腹瀉-黏膜病疫苗 Oregon C24V株弱毒疫苗是世界上首個成功研發(fā)并用于奶牛生產(chǎn)的BVD疫苗[22]；我國青海省畜牧科學(xué)研究院自行研制的牛BVD弱毒疫苗在牦牛生產(chǎn)中使用后，能明顯降低牦牛BVD的發(fā)病率，疫苗安全無副作用[23]。此后，我國學(xué)者對BVD疫苗的研究報道十分活躍，侯衛(wèi)東等[24]研制出了BVD囊素油乳劑滅活苗，李海濤等[25]研制出了含BVD 2個血清型的弱毒疫苗。在牛BVD新型疫苗方面，王楠等[26]構(gòu)建了BVD pVAXI/E0重組質(zhì)粒疫苗，動物實驗證實可產(chǎn)生較好的體液和細胞免疫應(yīng)答；吳明福等[27]構(gòu)建了含有BVD Oregon C24V株結(jié)構(gòu)蛋白P14、E2和非結(jié)構(gòu)蛋白NS33種基因的DNA疫苗。

3.4 新孢子蟲病疫苗 目前，國外牛新孢子蟲病唯一可靠的商品苗是Neoguard?牛新孢子蟲速殖子滅活蟲苗，該苗可在奶牛配種前或妊娠后前3個月注射，每次注射5mL，間隔半個月注射1次，共注射2次，每年免疫1～2次，注射該苗后可通過體液免疫和細胞免疫途徑使牛只獲得堅強的抵抗力[28-29]；RomeroJ.J.等[30]研究證實，新孢子蟲速殖子滅活蟲苗接種奶牛后，流產(chǎn)的百分率下降了一半。在活疫苗研究方面，科學(xué)家分別采用改變培養(yǎng)溫度、γ射線誘導(dǎo)等方式篩選出了新孢子蟲弱毒株[31-32]，由此制成的弱毒苗免疫小鼠后均能減輕攻毒小鼠的大腦病理性變化，誘導(dǎo)小鼠機體產(chǎn)生免疫力。載體疫苗方面，Nishikawa等[33]構(gòu)建了含NcSRS2的病毒載體，運用該載體免疫小鼠后能促進γ-干擾素的產(chǎn)生，降低新孢子蟲在小鼠大腦中的定植，阻止新孢子蟲在小鼠子宮內(nèi)經(jīng)胎盤傳播；高建偉等[34]構(gòu)建了含新孢子蟲P0基因的真核表達載體pVAXI-NcP0，用該重組載體免疫沙鼠后，能促進沙鼠的體液免疫和細胞免疫。

4 小結(jié)

綜上所述，牛布氏桿菌病、傳染性鼻氣管炎、病毒性腹瀉-黏膜病及新孢子蟲病等感染奶牛后均可引起流產(chǎn)，而這四種疾病在我國奶牛群中的陽性感染率多數(shù)較高，是導(dǎo)致我國奶牛流產(chǎn)率增高的重要因素之一。采用疫苗接種進行防控是現(xiàn)實之需。傳統(tǒng)的布病苗、鼻氣管炎苗、病毒性腹瀉苗等盡管免疫效果較好，但卻存在排菌（毒）、妊娠期間接種會感染胎兒等問題，而牛新孢子蟲速殖子蟲苗大多還停留在實驗室研發(fā)階段，且現(xiàn)有的商品級新孢子蟲苗的實際免疫效果也還存在爭論。上述四種疾病的新型疫苗均處于實驗室研發(fā)階段，與生產(chǎn)推廣的距離還很大。為保障整個奶牛產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，迫切需要加大科研投入，在傳統(tǒng)疫苗的優(yōu)化、新型疫苗的研發(fā)等多方面開展大量工作，盡早開發(fā)出安全、高效的新型疫苗。

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