周偉

（重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院急救中心 重慶 401520）

滋肺陰合補(bǔ)肝腎法對(duì)陰虛陽(yáng)亢型腎性高血壓大鼠收縮壓、一氧化氮的影響

周偉

（重慶市合川區(qū)人民醫(yī)院急救中心 重慶 401520）

目的：通過(guò)檢測(cè)陰虛陽(yáng)亢型腎性高血壓大鼠（RHR）血清一氧化氮（NO）的含量，探討滋肺陰合補(bǔ)肝腎法對(duì)RHR的降壓機(jī)制。方法：篩選2月齡健康雄性SD大鼠78只，隨機(jī)分為手術(shù)組65只與假手術(shù)組（F組）13只。手術(shù)組通過(guò)結(jié)扎左腎動(dòng)脈建立腎性高血壓模型，再對(duì)高血壓大鼠給予附子湯4周，制備陰虛陽(yáng)亢證模型。篩選造模成功的陰虛陽(yáng)亢證RHR，隨機(jī)分為卡托普利組（B組）、滋肺陰組（C組）、補(bǔ)肝腎組（D組）、滋肺陰合補(bǔ)肝腎組（簡(jiǎn)稱綜合組或E組）及模型組（A組）。F組與A組給予等量生理鹽水灌胃，其余各用藥組每日早8點(diǎn)灌胃給藥1次，連續(xù)4周。比色法測(cè)定血清NO濃度。結(jié)果：治療后各組血壓的變化：治療4周后，與A組比較，D組、E組及B組血壓明顯降低（P＜0.05）；與C組比較，D組、E組及B組明顯降低（P＜0.05）；與B組比較，E組明顯降低（P＜0.05）。各組大鼠血清NO的變化：與F組比較，A組NO明顯降低（P＜0.05）；與A組比較，D組、E組及B組NO明顯升高（P＜0.05）；與C組比較，D組、E組及B組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與B組比較，E組NO明顯升高（P＜0.05）。結(jié)論：滋肺陰合補(bǔ)肝腎法對(duì)陰虛陽(yáng)亢型RHR的降壓機(jī)制與增加舒血管物質(zhì)一氧化氮、抑制血管壁增厚有關(guān)。

滋肺陰補(bǔ)肝腎；腎性高血壓大鼠；收縮壓；一氧化氮

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 2月齡的健康SD大鼠78只，雄性，體重（220±20）g。

1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)藥物 附子湯（造模用）：制附子20 g，配制成含生藥0.10 g/mL溶液；滋肺陰方：沙參麥門冬湯去桑葉、扁豆，選用：北沙參15 g、麥冬15 g、玉竹15 g、天花粉12 g、甘草6 g（1號(hào)方），配制成含生藥1.3 g/mL溶液；補(bǔ)肝腎方：根據(jù)方顯明[1]等的正交實(shí)驗(yàn)，選用：天麻 10 g、鉤藤 15 g、石決明 20 g、川牛膝10 g、桑寄生9 g（2號(hào)方），配制成含生藥1.4 g/mL溶液；滋肺陰方合補(bǔ)肝腎方：3號(hào)方=1號(hào)方+2號(hào)方，配制成含生藥2.7 g/mL溶液?？ㄍ衅绽?、1%戊巴比妥鈉、青霉素。

1.1.3 主要實(shí)驗(yàn)試劑 NO比色法試劑盒。

1.1.4 主要實(shí)驗(yàn)儀器 ZH-HX-Z無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)，離心機(jī)，超低溫冰箱（－70℃），722分光光度計(jì)。

1.2 造模方法 取SD雄性大鼠78只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，采用ZH-HX-Z無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)尾套法測(cè)基礎(chǔ)血壓，禁食禁水24 h后，在室溫下手術(shù)。具體步驟：1%戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔麻醉，仰臥固定，腹部備皮，常規(guī)消毒，沿腹正中線打開腹腔，徹底分離左腎動(dòng)脈及其周圍筋膜，穿無(wú)菌線絲，將直徑0.25 mm的針灸針與左腎動(dòng)脈血管長(zhǎng)軸平行放置，用無(wú)菌線絲扎緊腎動(dòng)脈和針灸針后抽出針灸針，造成腎動(dòng)脈狹窄，不觸及右側(cè)腎臟和動(dòng)脈，關(guān)腹，術(shù)后連續(xù)3 d腹腔注射青霉素3×104U/d預(yù)防感染；假手術(shù)組方法同模型組，只分離左腎動(dòng)脈，不結(jié)扎。術(shù)后2周尾套法測(cè)血壓，所有大鼠于每日同一時(shí)間段（上午9～12時(shí)）測(cè)量血壓，連測(cè)3次取平均值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，以收縮壓高于基礎(chǔ)血壓20 mmHg、且收縮壓高于115 mmHg者被認(rèn)為腎性高血壓大鼠造模成功[2]。對(duì)RHR加灌附子湯4周，并每隔1 d激惹使其打斗，制備陰虛陽(yáng)亢證RHR模型。根據(jù)毛色變硬光澤度降低、性情易激惹、飲水量增加，確定為陰虛陽(yáng)亢證模型成功。

1.3 分組與給藥 將造模成功的陰虛陽(yáng)亢證RHR大鼠50只隨機(jī)分為5組，即卡托普利（B）組、滋肺陰（C）組、補(bǔ)肝腎（D）組、綜合（E）組和模型（A）組，每組10只，分籠飼養(yǎng)。B組給予卡托普利，C組給予1號(hào)方，D組給予2號(hào)方，E組給予3號(hào)方，每天早8點(diǎn)灌胃給藥，每日1次，共4周。用藥劑量分別按人和動(dòng)物體表面積進(jìn)行折算。假手術(shù)組與模型組給予等量蒸餾水灌胃。

1.4 觀測(cè)指標(biāo) （1）血壓：采用ZH-HX-Z無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)測(cè)血壓。（2）一氧化氮：末次給藥24 h后，大鼠稱重，腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血制備血清，比色法檢測(cè)血清NO含量。

2 結(jié)果

2.1 各組血壓變化 各組大鼠基礎(chǔ)血壓之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。術(shù)后第2周末，與F組比較，A組、各用藥組血壓明顯增高（P＜0.05），且均超過(guò)115 mmHg，與其基礎(chǔ)血壓的差值均大于20 mmHg，根據(jù)判斷標(biāo)準(zhǔn)，說(shuō)明造模成功。術(shù)后第6周末血壓，A組、各用藥組血壓較假手術(shù)組均明顯增高（P＜0.05）。治療4周后：與A組大鼠比較，D組、E組及B組血壓明顯降低（P＜0.05），C組有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與C組比較，D組、E組及B組有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與B組比較，E組明顯降低（P＜0.05），D組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表 1。

2.2 各組血清NO的變化 與F組比較，A組NO濃度明顯降低（P＜0.05）；與A組比較，D組、E組及B組NO明顯升高（P＜0.05），C組NO雖有升高趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與C組比較，D組、E組及B組NO有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與B組比較，E組明顯升高血清NO（P＜0.05），D組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表2。

表1 各組大鼠治療前后收縮壓的變化 (±S)mmHg

表1 各組大鼠治療前后收縮壓的變化 (±S)mmHg

注：與 F 組比較，▲P ＜0. 05；與 A 組比較，#P ＜0. 05；與 B 組比較，★P ＜0. 05；與 C 組比較，●P ＜0. 05；與 D 組比較，◆P ＜0.05。

組別 n 劑量(g/kg) 基礎(chǔ)血壓 手術(shù)后第2周末血壓手術(shù)后第6周末血壓治療4周后血壓F組 A組B組C組D組E組10 10 10 10 10 10----0.0033 6.56 6.70 13.26 F值112.3±2.21 110.6±2.91 110.3±2.87 111.0±2.71 110.4±2.63 110.7±2.58 0.764 113.9±2.77 144.8±2.94▲145.8±2.53▲146.0±2.05▲145.5±2.17▲146.4±2.37▲272.141 111.9±2.69 169.7±2.67▲171.2±2.57▲171.3±2.87▲169.4±2.59▲170.9±2.51▲814.199 112.0±2.26 188.8±1.99▲144.5±2.74#●178.8±4.0★147.7±1.79#●136.1±1.78#★●◆933.041

表2 各組大鼠血清一氧化氮的變化 (±S) μmo1/mL

表2 各組大鼠血清一氧化氮的變化 (±S) μmo1/mL

注：與 F組比較，▲P ＜0. 05；與 A 組比較，#P ＜0. 05；與 B 組比較，★P ＜0. 05；與 C 組比較，●P ＜0. 05；與 D 組比較，◆P ＜0.05。

組別 n 劑量(g/kg) NO F組A組B組C組D組E組F值10 10 10 10 10 10----0.00331 6.56 6.70 13.26 48.36±7.05 18.79±2.34▲34.16±0.38#●19.34±0.81★33.26±0.28#●41.01±0.29#★●◆203.562

3 討論

高血壓是人類心、腦血管病最重要的危險(xiǎn)因子，其發(fā)病機(jī)制及病理過(guò)程至今尚未完全闡明。血管內(nèi)皮細(xì)胞功能受損參與了高血壓的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程。前人已通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明了天麻鉤藤飲正交方對(duì)肝陽(yáng)上亢證高血壓大鼠不僅有降壓效果，且與卡托普利比較無(wú)明顯差異。本實(shí)驗(yàn)在前人實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上通過(guò)建立陰虛陽(yáng)亢型RHR模型，觀察滋肺陰合補(bǔ)肝腎法對(duì)陰虛陽(yáng)亢型RHR血壓、血管內(nèi)皮功能的影響。

“五行學(xué)說(shuō)”認(rèn)為，金能生水，水能涵木，金衰不能制木，故木旺化火生風(fēng)，而致眩暈。針對(duì)這一病機(jī)，由天麻、鉤藤、石決明、川牛膝、桑寄生、北沙參、麥冬、玉竹、天花粉及甘草組方，以天麻和石決明平抑肝陽(yáng)，鉤藤清熱平肝，川牛膝、桑寄生補(bǔ)肝腎，北沙參養(yǎng)陰清肺，麥冬養(yǎng)陰潤(rùn)肺，玉竹滋陰潤(rùn)肺，天花粉清熱生津，甘草調(diào)和諸藥：諸藥同用，共奏養(yǎng)陰潤(rùn)肺、滋水涵木、平肝潛陽(yáng)之功。

血管內(nèi)皮細(xì)胞是循環(huán)血液與血管平滑肌間的機(jī)械屏障。血管內(nèi)皮細(xì)胞合成和分泌包括前列環(huán)素I2（PGI2）、NO在內(nèi)的舒血管性物質(zhì)[3]。PGI2和NO能抑制VSMC增殖，VEC可以通過(guò)調(diào)節(jié)PGI2和NO分泌的多少來(lái)維持血管的增殖平衡[4]。只要內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能遭到破壞，其維持的舒/縮血管功能、抑制/促進(jìn)生長(zhǎng)平衡失衡，可導(dǎo)致內(nèi)皮功能紊亂。高血壓時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能與結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，NO合成或分泌不足[5]。NO抑制血管壁增厚引起收縮壓下降：（1）NO通過(guò)升高環(huán)磷酸鳥苷阻止ANG II的產(chǎn)生，還通過(guò)下調(diào)血管緊張素II 1型受體（AT1R）基因表達(dá)[6]，使其數(shù)目下調(diào)，抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖和管壁增厚、管腔狹窄[7]，從而抑制血管壁彈性減退。且無(wú)論外源性NO或是內(nèi)源性NO均能抑制體外培養(yǎng)的血管平滑肌細(xì)胞增殖[8～9]。（2）NO通過(guò)升高血小板內(nèi)環(huán)磷酸鳥苷，從而抑制血小板聚集，發(fā)揮抗凝作用，避免因血栓刺激VEC造成內(nèi)皮功能紊亂而出現(xiàn)抑制/促進(jìn)生長(zhǎng)平衡失衡。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果說(shuō)明滋肺陰合補(bǔ)肝腎法可通過(guò)升高陰虛陽(yáng)亢型RHR血清NO、抑制血管壁增厚及重構(gòu)降低收縮壓。

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R 554.1

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10.13638/j.issn.1671-4040.2014.01.065

2013-08-05）