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      馬齒莧總黃酮提取工藝研究

      2014-09-18 04:47:54陶貴斌趙晶麗高紅梅
      關(guān)鍵詞:馬齒莧蘆丁吉林

      陶貴斌,趙晶麗,郭 悅,高紅梅*

      (1.長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,長春 130117;2.吉林工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,吉林 吉林 132013)

      馬齒莧總黃酮提取工藝研究

      陶貴斌1,趙晶麗2,郭 悅1,高紅梅1*

      (1.長春中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,長春 130117;2.吉林工業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,吉林 吉林 132013)

      目的 采用正交試驗(yàn)優(yōu)選提取馬齒莧中總黃酮的最佳工藝條件。方法 以總黃酮含量為指標(biāo),通過正交試驗(yàn)考察料液比、提取次數(shù)、提取時(shí)間等因素對馬齒莧總黃酮提取率的影響,優(yōu)選馬齒莧總黃酮的水提取工藝。結(jié)果 最佳條件為料液比為1∶20,煎煮2次,每次1.5 h。結(jié)論 采用水煎煮法提取馬齒莧中總黃酮,方法簡單,成本低廉。

      馬齒莧;總黃酮;正交試驗(yàn);分光光度法

      馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧Portulaca oleracea L.的干燥地上部分,又名五行草,以其葉青,梗赤,花黃,根白,子黑也。用于熱毒血痢,癰腫療瘡,濕疹,丹毒,蛇蟲咬傷,便血,痔血,崩漏下血[1]?,F(xiàn)代藥理研究[2-3]證明,馬齒莧中黃酮類成分為有效成分之一。

      具有抗氧化、降糖等作用。本實(shí)驗(yàn)對馬齒莧總黃酮的水提工藝方法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究,為馬齒莧的開發(fā)利用研究提供科學(xué)依據(jù)。

      1 儀器與試藥

      1.1 藥材來源 馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧的干燥地上部分,采自吉林省長白山地區(qū),經(jīng)鑒定,符合《中國藥典》[1]2010 版(一部)馬齒莧標(biāo)準(zhǔn)。

      1.2 儀器 TU-1810PC型分光光度計(jì);電子天平(d=0.000 01 g);蘆丁對照品(中國藥品生物制品鑒定所,批號100080-200707);試劑、試藥均為分析純。

      2 方法與結(jié)果

      2.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[4-5]選用正交表L(34),分別以

      9總黃酮提取量作為考察指標(biāo),對馬齒莧總黃酮提取過程中影響較大的溶劑量(A)、提取時(shí)間(B)、提取次數(shù)(C)3個(gè)因素進(jìn)行考察,每個(gè)因素3個(gè)水平,見表1。

      表1 四因素三水平正交試驗(yàn)表

      2.2 提取方法[6-7]稱取藥材9分,每分200 g,按L9(34)正交表實(shí)驗(yàn),提取液濾過合并,濃縮成稠膏狀,70℃減壓干燥得浸膏,作為供試品。

      2.3 溶液的制備

      2.3.1 供試品溶液的制備 稱取供試品(過60目)約0.3 g,研細(xì),精密稱定,加70%乙醇250 mL,精密稱重,超聲處理30 min,冷卻至室溫,70%乙醇補(bǔ)足失重,搖勻,精密量取續(xù)濾液2 mL,備用。

      2.3.2 對照品溶液的制備 稱取蘆丁約20 mg,精密稱定,置10 mL容量瓶中,加70%溶解,并稀釋至刻度,搖勻。精密移取1 mL,置10 mL容量瓶,用70%乙醇定容,得到0.201 6 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

      2.4 測定波長的選擇 精密量取供試品溶液和對照品溶液各2 mL分別置10 mL容量瓶中,加水1 mL,加入5%亞硝酸鈉0.4 mL,搖勻,放置6 min,加入10%硝酸鋁0.4 mL,搖勻,放置6 min,加入4.3%氫氧化鈉4.0 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min,測定200~800 nm范圍內(nèi)吸收波長,結(jié)果對照品溶液在510 nm有最大吸收波長,供試品溶液在510 nm有最大吸收波長,二者吸收波長基本一致。因此確定510 nm為測定波長。

      2.5 方法學(xué)考察

      2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取蘆丁對照品溶液0.5,1.0,1.5,2、2.5,3 mL,分別置 10 mL 量瓶中,加水至3 mL,加入5%亞硝酸鈉0.4 mL,搖勻,放置6 min,加入10%硝酸鋁0.4 mL,搖勻,放置6 min,加入4.3%氫氧化鈉4.0 mL,再加水至刻度,搖勻,放置15 min,以試劑做空白為參比,在510 nm波長處測定吸光度,結(jié)果得線性方程為:Y=2.668 4X+0.017 5,r2=0.999 9。總黃酮含量在0.033 6~0.201 6 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

      2.5.2 精密度實(shí)驗(yàn) 精密量取蘆丁對照品溶液(0.201 6 mg/mL)0.5 mL置10 mL量瓶中,按“2.4”項(xiàng)下加水至3 mL繼續(xù)操作,在波長510 nm處連續(xù)6次測定吸光度,結(jié)果RSD為0.54%(n=6),表明儀器的精密度良好。

      2.5.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取蘆丁對照品溶液(0.201 6 mg/mL)0.5 mL,按“2.4”項(xiàng)下測定方法,測定0,5,10,15,20,30 min 時(shí)吸光度,結(jié)果對照品的RSD為0.68%,供試品的RSD為0.51%,表明對照品溶液在30 min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

      2.5.4 重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn) 取馬齒莧總黃酮提取物,共6分,按“2.3.1”項(xiàng)下制備供試品溶液,分別精密量取供試品溶液2 mL置10 mL量瓶中,按“2.4”項(xiàng)下測定吸光度,結(jié)果供試品中總黃酮平均含量為10.21%,RSD為1.04%(n=6),表明本方法重復(fù)性良好。

      2.5.5 加樣回收率 取已知含量(10.21%)馬齒莧總黃酮提取物6分,每分0.5 g,精密稱定,并加入一定量的蘆丁對照品,按“2.4”項(xiàng)下供試品溶液制備方法,依法獨(dú)立操作,按“2.4”項(xiàng)下測定吸光度,計(jì)算回收率。以蘆丁的含量計(jì),平均加樣回收率為98.03%,RSD為1.67%。

      2.5.6 最佳工藝驗(yàn)證試驗(yàn) 稱取馬齒莧藥材500 g,按最佳提取工藝,即加入20倍量水,煎煮2次,每次1.5 h ,合并濾液,濃縮干燥,稱重。平行3次試驗(yàn)。

      3 小結(jié)

      參照三氯化鋁顯色法原理[8]提取馬齒莧中的總黃酮,是一種簡便、快速的方法,具有較高的精密度和準(zhǔn)確度。提取溶劑量、時(shí)間次數(shù)各因素對提取影響順序?yàn)?提取次數(shù)>提取溶劑量>提取時(shí)間,提取次數(shù)對總黃酮含量影響較大,但第3次提取液顏色變淺、提取量較低,不適宜再提取。

      :

      [1]中華人民共和國藥典委員會(huì).中國藥典[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2010.

      [2]王國玉,王浩宇,佟繼銘.馬齒莧的化學(xué)成分與藥理作用研究現(xiàn)狀[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012,29(1):82-85.

      [3]高紅梅,陳新,王月珍.馬齒莧降血糖有效部位研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(3):536-537.

      [4]張愛軍,徐多多,張喜,等.紫外可見分光光度法測定烏腺金絲桃中總黃酮的含量[J].吉林中醫(yī)藥,2012,32(11):1148-1149.

      [5]何凌.淫羊藿總黃酮提取物的制備工藝研究[J].吉林中醫(yī)藥,2007,27(11):57-58.

      [6]韓亞男,程新宇,侯俊玲,等.大孔樹脂純化甘草地上部分總黃酮的工藝[J].吉林中醫(yī)藥,2014,34(1):82-86.

      [7]董金香,孫旭,邱野,等.大孔樹脂純化葛根總黃酮工藝研究[J].吉林中醫(yī)藥,2011,31(9):909-910,924

      [8]李慶杰,王懷生,王蓮萍,等.卷柏總黃酮提取工藝研究[J].長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2012,28(2):355-356.

      Extraction process of portulaca total flavone

      TAO Guibin1,ZHAO Jingli2,GUO Yue1,GAO Hongmei1*
      (1.Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China;2.Jilin Vocational College of Industry and Technology,Jilin 132013,Jilin Province,China)

      ObjectiveTo optimize the extraction technology of portulaca total flavones by orthogonal test.MethodsUsing the content of total flavonoids as index,the water extraction technology of portulaca total flavones was optimized by observing the effect of factors such as the ratio of solid to liquid,times of extracting,extracting time on the extraction ratio of portulaca total flavones by orthogonal test.ResultsThe best conditions were as follows:the ratio of solid to liquid was 1:20,with 2 decoctions of 1.5 h each time.ConclusionIt was easy and cheap to extract portulaca total flavones by boiling with water method.

      portulaca oleracea L;total flavones;orthogonal test;spectrophometric method

      R248.1

      A

      2095-6258(2014)05-0808-02

      10.13463/j.cnki.cczyy.2014.05.017

      吉林省科學(xué)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(20130727017YY);吉林省中醫(yī)藥管理局科技項(xiàng)目(2012-016)。

      陶貴斌(1980-)男,藥學(xué)碩士。研究方向:藥物分析。

      高紅梅,女,副教授,電子信箱:ghmice 2010@126.com。

      2014-05-20)

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