徐恩民　張穎　劉少寧等

摘要：為建立測(cè)定氟苯尼考制劑中非法添加的磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）高效液相色譜分析方法，本研究使用C18色譜柱，以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（27∶73）作為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫（流速1.0 mL/min）；采用二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm；進(jìn)樣量20 μL。結(jié)果表明，磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）分別在進(jìn)樣濃度為31.25～500.00 μg/mL和12.50～200.00 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r2分別為0.9996和1.0000）；平均回收率分別為98.6%（SM2）和99.8%（SMM）；檢出限分別為0.125 μg/mL（SM2）和0.225 μg/mL（SMM）。建立的方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可行，適用于氟苯尼考制劑中非法添加的磺胺二甲嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：氟苯尼考制劑；磺胺二甲嘧啶；磺胺間甲氧嘧啶

中圖分類號(hào)：S859文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2014）07-0129-03

AbstractA detection method of SM2 and SMM illegally adulterated in florfenicol preparations were established by high performance liquid chromatography （HPLC）. The chromatography was performed with C18 column at 270 nm using PDAD. The mobile phase consisted of a mixture of acetonitrile-0.2%acetic acid （27∶73） at a constant flow rate of 1.0 mL/min. The injection volume was 20 μL. The results showed that there were good linear relations （with r2 as 0.9996 and 1.0000 respectively） when the injection concentration was 31.25～500.00 μg/mL （SM2） and 12.50～200.00 μg/mL （SMM） repectively. The average recovery rate was 98.6% （SM2） and 99.8% （SMM）. The detection limit was 0.125 μg/mL（SM2） and 0.225 μg/mL（SMM） respectively. This method was simple， accurate and feasible and was suitable for detection of SM2 and SMM illegally adulterated in florfenicol preparations.

Key wordsFlorfenicol preparations； SM2； SMM

氟苯尼考是20世紀(jì)80年代研制的一種獸醫(yī)專用氯霉素類廣譜抗菌藥，為氯霉素的結(jié)構(gòu)同系物，在作用機(jī)理及抗菌譜方面與氯霉素和甲砜霉素相似，但卻不會(huì)產(chǎn)生類似氯霉素和甲砜霉素質(zhì)粒介導(dǎo)的耐藥性，而且對(duì)許多氯霉素耐藥菌株仍然敏感，因此在我國當(dāng)前獸藥市場(chǎng)具有很好的應(yīng)用前景[5]。然而近年來，獸藥中非法添加的現(xiàn)象愈演愈烈，農(nóng)業(yè)部針對(duì)此現(xiàn)象調(diào)研并展開了系列非法添加物檢查方法的研究工作[4]。本試驗(yàn)就氟苯尼考制劑中非法添加磺胺二甲嘧啶和磺胺間甲氧嘧啶的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究。

1材料與方法

1.1儀器

Waters e2695高效液相色譜儀，Waters 2998 二極管陣列檢測(cè)器，AE240梅特勒電子天平。

1.2試藥

磺胺間甲氧嘧啶（SMM）對(duì)照品，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)C0031007，含量99.4%；磺胺二甲嘧啶（SM2）對(duì)照品，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)H0371008，含量99.8%；甲醇為色譜純；冰醋酸為優(yōu)級(jí)純。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1色譜條件Waters Atlantis T3 色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-0.2%冰醋酸溶液（27∶73）；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)270 nm；進(jìn)樣量20 μL。

1.3.2溶液的制備 ①對(duì)照品溶液的制備：分別稱取SM2、SMM對(duì)照品適量，用0.1 mol/L NaOH溶液超聲處理溶解后，加27%乙腈水溶液分別制成每1 mL含1.0、0.5 mg的溶液，再分別取適量以27%乙腈水溶液稀釋10倍，作為對(duì)照品溶液。

②空白溶液的制備：取氟苯尼考制劑適量，用流動(dòng)相稀釋成含氟苯尼考50 μg/mL的溶液，作為空白溶液。

③供試品溶液的制備：在氟苯尼考制劑中添加SM2、SMM，用流動(dòng)相配制成含氟苯尼考50 μg/mL、SM2 100 μg/mL、SMM 50 μg/mL的溶液。

1.3.3專屬性考察按上述色譜條件，對(duì)供試品溶液和空白溶液進(jìn)行分析比對(duì)，以確定氟苯尼考是否對(duì)SM2、SMM峰有影響。

1.3.4最低檢測(cè)限按上述色譜條件，對(duì)對(duì)照品溶液進(jìn)一步稀釋，同時(shí)記錄色譜圖及光譜圖。報(bào)告溶液光譜圖失真的最大濃度為檢測(cè)限。

1.3.5線性關(guān)系考察精密量取對(duì)照品溶液，加27%乙腈水溶液稀釋分別制成含SM2 31.25、62.50、125.00、250.00、500.00 μg/mL的溶液，按上述色譜條件分析，以峰面積對(duì)進(jìn)樣濃度進(jìn)行回歸，求SM2的回歸方程；同法稀釋分別制成含SMM 12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 μg/mL的溶液，求SMM的回歸方程。

1.3.6中間精密度試驗(yàn)于不同時(shí)間制備3批樣品，由不同人員進(jìn)行檢測(cè)，每份樣品至少進(jìn)樣兩次，取平均值。

1.3.7回收率試驗(yàn)用對(duì)照品分別配制相當(dāng)SM2、SMM測(cè)試濃度的80%、100%、120%的系列溶液，進(jìn)樣分析并計(jì)算回收率。

2結(jié)果與分析

2.1專屬性考察結(jié)果

供試品溶液和空白溶液色譜圖對(duì)比結(jié)果見圖1～2，表明空白溶液中無SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰與SM2、SMM色譜峰分離度符合要求。

3判定依據(jù)

在相同試驗(yàn)條件下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)色譜峰與相應(yīng)對(duì)照品峰保留時(shí)間一致（差異小于等于±5%）；并且在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，如供試品色譜圖中與對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處有色譜峰檢出，分別提取相同保留時(shí)間的色譜峰峰頂點(diǎn)的光譜圖，二者的光譜圖無明顯差異且最大吸收波長(zhǎng)一致（差異小于等于±2 nm），判為檢出各測(cè)試藥物。

若峰形和測(cè)定數(shù)值結(jié)果無法判定，用重疊色譜法判定，即將對(duì)照品溶液與供試品溶液按1∶1比例混合進(jìn)樣，按如下兩種方式進(jìn)行判定：①如果供試品色譜峰在與對(duì)照品保留時(shí)間相同處有色譜峰，且色譜峰半峰寬變化不大于10%，峰高或峰面積成比例變化，判為檢出各測(cè)試藥物；②如果供試品色譜峰峰面積小于對(duì)照品檢測(cè)限峰面積，則判為未檢出各測(cè)試藥物。

4小結(jié)

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）同屬于磺胺類藥物，是一種廣譜抗菌藥，其不合理使用會(huì)引起在動(dòng)物性食品中殘留等進(jìn)而危害到人類健康[2，3]。目前，我國還沒有關(guān)于氟苯尼考制劑中添加磺胺類藥物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，類似于此種的非法添加現(xiàn)象就給獸藥監(jiān)管帶來了困難。本試驗(yàn)對(duì)色譜條件、專屬性、最低檢測(cè)限、線性關(guān)系、回收率等方面進(jìn)行考察，建立了高效液相色譜法測(cè)定氟苯尼考制劑中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相對(duì)于以往測(cè)定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重現(xiàn)性好、影響因素少、引入物質(zhì)少等優(yōu)點(diǎn)，大大提高了檢測(cè)效率[1]。試驗(yàn)結(jié)果也表明，本研究建立的方法精密度、線性、回收率試驗(yàn)均符合《中國獸藥典》要求，能有效檢測(cè)氟苯尼考制劑中是否添加SM2、SMM及其添加量。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國獸藥典委員會(huì). 中華人民共和國獸藥典一部[M].2010年版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2011.

[2]孫雷，畢言鋒，李丹，等. 豬肉中磺胺類藥物殘留檢測(cè)能力驗(yàn)證分析[J].中國獸藥雜志， 2012，46（2）：23-26.

[3]王云龍，閔紅巖. 磺胺類藥物在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的正確使用[J].中國獸藥雜志， 2004， 38（9）：52.

[4]農(nóng)業(yè)部.關(guān)于組織開展中獸藥非法添加禁用藥物和其他藥物成分檢測(cè)查處工作的通知[Z].2009.

[5]朱力軍，趙暉.高效液相色譜法測(cè)定氟苯尼考及其制劑的含量[J].中國獸藥雜志， 2000， 34（6）：19-20.

1.3.6中間精密度試驗(yàn)于不同時(shí)間制備3批樣品，由不同人員進(jìn)行檢測(cè)，每份樣品至少進(jìn)樣兩次，取平均值。

1.3.7回收率試驗(yàn)用對(duì)照品分別配制相當(dāng)SM2、SMM測(cè)試濃度的80%、100%、120%的系列溶液，進(jìn)樣分析并計(jì)算回收率。

2結(jié)果與分析

2.1專屬性考察結(jié)果

供試品溶液和空白溶液色譜圖對(duì)比結(jié)果見圖1～2，表明空白溶液中無SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰與SM2、SMM色譜峰分離度符合要求。

3判定依據(jù)

在相同試驗(yàn)條件下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)色譜峰與相應(yīng)對(duì)照品峰保留時(shí)間一致（差異小于等于±5%）；并且在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，如供試品色譜圖中與對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處有色譜峰檢出，分別提取相同保留時(shí)間的色譜峰峰頂點(diǎn)的光譜圖，二者的光譜圖無明顯差異且最大吸收波長(zhǎng)一致（差異小于等于±2 nm），判為檢出各測(cè)試藥物。

若峰形和測(cè)定數(shù)值結(jié)果無法判定，用重疊色譜法判定，即將對(duì)照品溶液與供試品溶液按1∶1比例混合進(jìn)樣，按如下兩種方式進(jìn)行判定：①如果供試品色譜峰在與對(duì)照品保留時(shí)間相同處有色譜峰，且色譜峰半峰寬變化不大于10%，峰高或峰面積成比例變化，判為檢出各測(cè)試藥物；②如果供試品色譜峰峰面積小于對(duì)照品檢測(cè)限峰面積，則判為未檢出各測(cè)試藥物。

4小結(jié)

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）同屬于磺胺類藥物，是一種廣譜抗菌藥，其不合理使用會(huì)引起在動(dòng)物性食品中殘留等進(jìn)而危害到人類健康[2，3]。目前，我國還沒有關(guān)于氟苯尼考制劑中添加磺胺類藥物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，類似于此種的非法添加現(xiàn)象就給獸藥監(jiān)管帶來了困難。本試驗(yàn)對(duì)色譜條件、專屬性、最低檢測(cè)限、線性關(guān)系、回收率等方面進(jìn)行考察，建立了高效液相色譜法測(cè)定氟苯尼考制劑中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相對(duì)于以往測(cè)定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重現(xiàn)性好、影響因素少、引入物質(zhì)少等優(yōu)點(diǎn)，大大提高了檢測(cè)效率[1]。試驗(yàn)結(jié)果也表明，本研究建立的方法精密度、線性、回收率試驗(yàn)均符合《中國獸藥典》要求，能有效檢測(cè)氟苯尼考制劑中是否添加SM2、SMM及其添加量。

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[3]王云龍，閔紅巖. 磺胺類藥物在養(yǎng)豬生產(chǎn)中的正確使用[J].中國獸藥雜志， 2004， 38（9）：52.

[4]農(nóng)業(yè)部.關(guān)于組織開展中獸藥非法添加禁用藥物和其他藥物成分檢測(cè)查處工作的通知[Z].2009.

[5]朱力軍，趙暉.高效液相色譜法測(cè)定氟苯尼考及其制劑的含量[J].中國獸藥雜志， 2000， 34（6）：19-20.

1.3.6中間精密度試驗(yàn)于不同時(shí)間制備3批樣品，由不同人員進(jìn)行檢測(cè)，每份樣品至少進(jìn)樣兩次，取平均值。

1.3.7回收率試驗(yàn)用對(duì)照品分別配制相當(dāng)SM2、SMM測(cè)試濃度的80%、100%、120%的系列溶液，進(jìn)樣分析并計(jì)算回收率。

2結(jié)果與分析

2.1專屬性考察結(jié)果

供試品溶液和空白溶液色譜圖對(duì)比結(jié)果見圖1～2，表明空白溶液中無SM2、SMM吸收峰，氟苯尼考峰與SM2、SMM色譜峰分離度符合要求。

3判定依據(jù)

在相同試驗(yàn)條件下，供試品色譜圖中如出現(xiàn)色譜峰與相應(yīng)對(duì)照品峰保留時(shí)間一致（差異小于等于±5%）；并且在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)，如供試品色譜圖中與對(duì)照品相應(yīng)保留時(shí)間處有色譜峰檢出，分別提取相同保留時(shí)間的色譜峰峰頂點(diǎn)的光譜圖，二者的光譜圖無明顯差異且最大吸收波長(zhǎng)一致（差異小于等于±2 nm），判為檢出各測(cè)試藥物。

若峰形和測(cè)定數(shù)值結(jié)果無法判定，用重疊色譜法判定，即將對(duì)照品溶液與供試品溶液按1∶1比例混合進(jìn)樣，按如下兩種方式進(jìn)行判定：①如果供試品色譜峰在與對(duì)照品保留時(shí)間相同處有色譜峰，且色譜峰半峰寬變化不大于10%，峰高或峰面積成比例變化，判為檢出各測(cè)試藥物；②如果供試品色譜峰峰面積小于對(duì)照品檢測(cè)限峰面積，則判為未檢出各測(cè)試藥物。

4小結(jié)

磺胺二甲嘧啶（SM2）和磺胺間甲氧嘧啶（SMM）同屬于磺胺類藥物，是一種廣譜抗菌藥，其不合理使用會(huì)引起在動(dòng)物性食品中殘留等進(jìn)而危害到人類健康[2，3]。目前，我國還沒有關(guān)于氟苯尼考制劑中添加磺胺類藥物的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，類似于此種的非法添加現(xiàn)象就給獸藥監(jiān)管帶來了困難。本試驗(yàn)對(duì)色譜條件、專屬性、最低檢測(cè)限、線性關(guān)系、回收率等方面進(jìn)行考察，建立了高效液相色譜法測(cè)定氟苯尼考制劑中非法添加SM2和SMM的方法。本方法相對(duì)于以往測(cè)定SM2和SMM含量常用到的滴定法、紫外法而言具有重現(xiàn)性好、影響因素少、引入物質(zhì)少等優(yōu)點(diǎn)，大大提高了檢測(cè)效率[1]。試驗(yàn)結(jié)果也表明，本研究建立的方法精密度、線性、回收率試驗(yàn)均符合《中國獸藥典》要求，能有效檢測(cè)氟苯尼考制劑中是否添加SM2、SMM及其添加量。

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[4]農(nóng)業(yè)部.關(guān)于組織開展中獸藥非法添加禁用藥物和其他藥物成分檢測(cè)查處工作的通知[Z].2009.

[5]朱力軍，趙暉.高效液相色譜法測(cè)定氟苯尼考及其制劑的含量[J].中國獸藥雜志， 2000， 34（6）：19-20.