復(fù)方柴胡提取物中空栓制備工藝優(yōu)選及質(zhì)量控制

李 麗，李 璐，王金莉

（1.遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院，遼寧 錦州 121001；2.遼寧省營口市鲅魚圈區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心，遼寧 營口 115007）

柴胡（Bupleuri Radix）為傘形科植物柴胡（Bupleurum chinense DC.）或狹葉柴胡（Bupleurum scorzoneri folium Willd.）的干燥根。柴胡提取物（Radix Bupleuri Extract）主要有效成分為柴胡皂苷和揮發(fā)油，具有退熱、疏肝解郁、升陽氣等功能[1]。本研究采用正交試驗優(yōu)選復(fù)方柴胡提取物中空栓制備工藝，并對中空栓質(zhì)量進行評價。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器 DK-S26型電熱恒溫水浴鍋、DHG-9140型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海精宏實驗設(shè)備有限公司生產(chǎn)；JJ200型電子天平，上海精密儀器生產(chǎn)。

1.1.2 主要藥品及試劑 柴胡提取物由遼寧醫(yī)學院畜牧獸醫(yī)學院動物藥學實驗室提供，1 g相當于原生藥15 g；氟尼辛葡甲胺，湖北威德利化學有限責任公司；PEG4000、PEG400，上海江萊生物科技有限公司；半合成脂肪酸甘油酯38#，湖北東信藥業(yè)有限公司。

1.2 復(fù)方柴胡提取物中空栓基質(zhì)的篩選 選擇半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物（在PEG4000中加入30%PEG400）進行試驗[2]，以基質(zhì)與藥物的混合均勻程度、硬度、融變時限作為考察指標，對不同基質(zhì)進行篩選。結(jié)果選擇半合成脂肪酸甘油酯:PEG混合物（3:1）作為栓劑基質(zhì)。結(jié)果見表1。

表1 復(fù)方柴胡提取物中空栓基質(zhì)篩選Tab le1 Selection of matrix of Com pound Bup leurum extract ho llow suppository

1.3 復(fù)方柴胡提取物中空栓劑置換價測定 以柴胡提取物與氟尼辛葡甲胺4:1比例混合物為模型藥物，用半合成脂肪酸甘油酯:PEG混合物（3:1）作為栓劑基質(zhì)，進行置換價測定。

1.3.1 制備純基質(zhì)栓 稱取適量半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物水浴加熱至60℃，熔化后傾入栓劑模型中，室溫下靜置約1 min，將栓模倒轉(zhuǎn)，使中心未凝的基質(zhì)流出,形成空腔，冷卻。稱取適量的半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物填入栓殼內(nèi)，封口，冷卻，刮平，啟模得純基質(zhì)栓10枚，稱重，每粒平均重G克。

1.3.2 制備含藥中空栓 稱取適量柴胡提取物和氟尼辛葡甲胺混合物，過100目篩，置乳缽中研細。另取半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物適量置蒸發(fā)皿中，于水浴上熔化。當基質(zhì)溶化時，可停止加熱，攪拌使全部熔化后傾入栓劑模型中,室溫下靜置約1 min，將栓模倒轉(zhuǎn)，形成空腔，放冷后稱取適量的柴胡提取物和氟尼辛葡甲胺混合物填入殼內(nèi)，封口，放冷，刮平，啟模得含藥栓10粒，稱重，得每粒平均重M克。每粒含主藥量W克。

1.3.3 置換價的計算[2]利用公式計算出復(fù)方柴胡提取物中空栓的置換價（displacement value,DV）：

式中，G-純基質(zhì)平均栓重；M-含藥栓平均栓重；W-每枚栓的平均含藥重。

利用測得置換價計算出制備含藥栓需要的基質(zhì)重量x：

式中，y-處方中藥物的劑量；n-擬制備栓劑的枚數(shù)。

1.4 復(fù)方柴胡提取物中空栓制備

1.4.1 正交試驗設(shè)計 以藥物與基質(zhì)的比例（A）、藥液溫度（B）及脫模時間（C）為考察因素，以外觀質(zhì)量和融變時限為考察指標，采用L9（34）正交表進行正交試驗。因素水平見表2，正交試驗設(shè)計見表3。

表2 正交試驗因素水平表Tab le2 Factors and leve ls of orthogonaltest

1.4.2 質(zhì)量控制

1.4.2.1 顏色檢查 視檢，觀察栓劑的顏色。

1.4.2.2 硬度檢查 觸檢，感受栓劑硬度。

1.4.2.3 重量差異 取3種藥栓各6粒，精密稱量總重量，求得平均粒重后，再分別精密稱各粒的重量，每粒重量與平均粒重相比較，檢查有無超出重量差異限度的藥粒。

1.4.2.4 融變時限 指栓劑在規(guī)定的檢查條件下全部融化、軟化變形或溶解的限度要求，取3種藥栓樣品各1粒，將其固定在鐵架臺上，將3個裝有100 mL水的燒杯放入37℃的水浴鍋中預(yù)熱，將每個藥栓分別放入燒杯中，觀察其溶解時間及狀態(tài)。

1.4.2.5 微生物限度 取本品5 g，置0.9%無菌氯化鈉溶液50 mL中溶解，量取10 mL，500 r/min離心5 min，棄去藥渣，上層液再以3 000 r/min離心30 min，棄去上清液，取底部集菌液2 mL，全部洗入增菌培養(yǎng)基中，依照中國獸藥典附錄微生物限度檢查法檢查，判定結(jié)果。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析 采用統(tǒng)計軟件SPSS 13.0中的單因素方差分析（ONE-WAY ANOVA）進行統(tǒng)計分析，試驗數(shù)據(jù)值以平均值±標準差表示。均值的多重比較采用Duncan法進行。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)方柴胡提取物中空栓基質(zhì)的篩選 以基質(zhì)與藥物的混合均勻程度、硬度、融變時限作為考察指標，選擇半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物對不同基質(zhì)進行篩選。結(jié)果選擇半合成脂肪酸甘油酯:PEG混合物（3:1）作為栓劑基質(zhì)。

2.2 復(fù)方柴胡提取物中空栓劑置換價測定 共制備純基質(zhì)栓10枚，平均栓重G為0.58 g，共制備含藥栓10枚，平均栓重M為0.64 g，每枚栓的平均含藥重W為0.13 g，經(jīng)計算復(fù)方柴胡提取物中空栓置換價DV為1.86。根據(jù)DV，可進一步計算出制備栓劑所需的基質(zhì)的量x。

2.3 正交試驗設(shè)計 以外觀和融變時限為評價指標進行綜合評分，所占分值比例分別為40%、60%；評分標準為：外觀滿分10分，共制備10枚栓，每枚栓完整光滑0.5分，混合均勻0.5分，外觀評分=外觀值/最大外觀值×0.4×100；按中國獸藥典標準執(zhí)行，融變時限評分=融變時限/最大融變時限×0.6×100，綜合評分=時限評分+外觀評分[3]。試驗結(jié)果見表3，方差分析見表4。

表3 正交試驗結(jié)果Tab le3 Results of orthogonaltest

表4 方差分析表Table4 Variance of analysis

采用綜合評分模式，以綜合評分結(jié)果為指標，方差分析結(jié)果表明，A＞B＞C，因素A和因素B對綜合評分結(jié)果有顯著性影響，而因素A與因素B之間差異不顯著。由數(shù)值直觀分析可知，各因素對復(fù)方柴胡提取物中空栓制備工藝的影響次序為A2＞A1＞A3，B2＞B1＞B3，C2＞C1＞C3。綜合分析結(jié)果，選取的制劑制備工藝為A2B2C2，即藥粉與基質(zhì)間比例為1:2，藥液溫度50℃，脫模時間25 min。

22..44 驗證試驗

2.4.1 標準曲線 依照文獻[3-4]方法進行對照品溶液的制備和供試品的制備，并以吸收度值Y為縱坐標，柴胡總皂苷的濃度X（mg/mL）為橫坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程：Y=1.429 0X+0.995 4，R=0.999 9，表明柴胡皂苷的濃度與吸收度值成線性關(guān)系良好（0.65～9.5 mg/mL）。

2.4.2 樣品栓質(zhì)量控制及柴胡總皂苷含量

2.4.2.1 樣品栓質(zhì)量控制 依據(jù)正交優(yōu)選的最佳工藝，共制備中空栓3批。

顏色檢查：視檢，制得的栓劑為褐色，表面光滑完整，色澤均勻。

硬度檢查：觸檢，感受三種栓劑硬度。

重量差異：檢查結(jié)果無超出重量差異限度的栓劑。栓劑質(zhì)量差異限度檢查標準見表5。

表5 栓劑質(zhì)量差異限度Tab le5 Quality difference limit of suppository

融變時限：制得栓劑均在30 min內(nèi)融化。

微生物限度：依照中國獸藥典附錄微生物限度檢查法檢查，全部符合規(guī)定。

三批樣品栓質(zhì)量檢查結(jié)果表明優(yōu)選的中空栓制備工藝可行，重復(fù)性好，操作簡單，適合大生產(chǎn)。硬度及融變時限結(jié)果見表6。

2.4.2.2 柴胡總皂苷含量 經(jīng)測定，柴胡總皂苷含量穩(wěn)定。結(jié)果見表6。

表6 樣品栓質(zhì)量及柴胡總皂苷含量Table6 Quality of samp le suppository and content oftota l saikosaponins

3 討論

3.1 復(fù)方柴胡提取物中空栓處方中主藥篩選 柴胡及其提取物具有退熱、疏肝解郁、升陽氣、提高免疫力等作用[5]，氟尼辛葡甲胺為芬那酸類解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥，具有鎮(zhèn)痛、解熱、抗炎和抗風濕作用[6]。本研究將柴胡提取物與氟尼辛葡甲胺作為復(fù)方柴胡提取物中空栓處方的主藥，旨在發(fā)揮柴胡提取物與氟尼辛葡甲胺在家畜發(fā)熱性疾病治療中的協(xié)同作用，提高復(fù)方柴胡提取物中空栓的療效。

3.2 復(fù)方柴胡提取物中空栓基質(zhì)的篩選 常用的栓劑基質(zhì)可分為油脂性基質(zhì)和水溶性基質(zhì)兩大類。油脂性基質(zhì)包括可可豆脂、半合成脂肪酸甘油酯及合成脂肪酸酯，水溶性基質(zhì)包括甘油明膠、聚乙二醇（PEG）及非離子型表面活性劑類。半合成脂肪酸甘油酯熔點適宜，在常溫下為固體，遇體溫迅速熔化，適用于直腸栓基質(zhì)，為目前取代天然油脂的較理想的栓劑基質(zhì)。聚乙二醇無生理作用，遇體溫不熔化，在PEG4000中加入30%PEG400效果最佳。本研究選擇半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物作為基質(zhì)，既有利于水溶性藥物的溶解，又有利于釋放脂溶性藥物[2]。

3.3 正交試驗設(shè)計復(fù)方柴胡提取物中空栓制備及質(zhì)量控制 中空栓劑是1984年由日本學者研發(fā)的一種制劑，其外層是由基質(zhì)制成的空殼，將藥物包裹在中空栓殼內(nèi)而形成中空栓[7-8]。本研究采用半合成脂肪酸甘油酯和PEG混合物為基質(zhì)，以柴胡提取物和氟尼辛葡甲胺為主藥制備復(fù)方柴胡提取物中空栓，避免了藥物與基質(zhì)混合后發(fā)生硬度、色澤、熔點和融變時限變化而造成的硬度效應(yīng)，同時也避免了柴胡中有效成分因暴露造成氧化、潮解、變質(zhì)。經(jīng)檢查復(fù)方柴胡提取物中空栓質(zhì)量符合中國獸藥典規(guī)定。復(fù)方柴胡提取物中空栓的局部刺激試驗和體內(nèi)的藥代動力學特點有待于進一步深入研究。

[1]中華人民共和國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典：二部[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010：386.

[2]崔福德.藥劑學[M].5版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2004：11.

[3]梁海寧，沈濤，畢映燕，等.正交試驗優(yōu)選萆清栓制備工藝[J].現(xiàn)代中藥研究與實踐，2012，6：52-53，38.

[4]陳淑，魏亞琴，索志榮.柴胡提取物中總皂苷測定方法研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2012，24：11998-11999，12002.

[5]任艷.復(fù)方中草藥防制肉雞傳染性支氣管炎試驗[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2009，7：72-74.

[6]陳杖榴.獸醫(yī)藥理學[M].3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2009：6.

[7]謝英花，李小云，劉燕，等.甲硝唑中空栓的制備及質(zhì)量控制[J].河北工業(yè)科技，2009，04：234-236.

[8]溫向娟，方昆，仝立國，等.枳樸中空栓制備工藝的研究[J].中醫(yī)藥學報，2012，03：103-105.