王 倩，楊志東，崔 晨，尚 紅

(中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，遼寧 沈陽 110001)

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)是獲得性免疫缺陷綜合癥(acquired immune deficiency syndrome，AIDS)的病原體。自美國1981年診斷出首例AIDS以來，HIV在全球范圍內(nèi)迅速播散，我國AIDS疫情處于總體低流行，特定人群和局部地區(qū)高流行的態(tài)勢(shì)［1-3］。目前，HIV抗體檢測(cè)是臨床診斷HIV感染的主要依據(jù)，但靜脈采血篩查HIV抗體為有創(chuàng)操作，而且容易造成醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露感染，應(yīng)用無創(chuàng)采集的尿液、唾液等樣本檢測(cè)HIV抗體容易被受試者接受，且能夠降低職業(yè)暴露的風(fēng)險(xiǎn)。北京萬泰生物藥業(yè)公司HIV1+2型抗體診斷試劑盒(免疫滲濾法)可以快速檢測(cè)尿液及血漿標(biāo)本中HIV抗體，本研究采用對(duì)照試驗(yàn)方法，評(píng)價(jià)該試劑盒的臨床檢測(cè)性能，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對(duì)象 沈陽地區(qū)背景清晰的受試人員200例:中國醫(yī)科大學(xué)艾滋病研究所確診的HIV陽性感染者80例(蛋白免疫印跡法確證HIV抗體陽性)，AIDS高危人群40例，健康體檢人群80例。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 考核試劑HIV1+2型血液、尿液抗體診斷試劑盒(免疫滲濾法)由北京萬泰生物藥業(yè)股份有限公司提供，參考試劑HIV抗體診斷試劑盒(ELISA法)購自法國生物梅里埃公司，免疫印跡法HIV抗體檢測(cè)試劑盒購自新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太有限公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采集研究對(duì)象的血液及尿液標(biāo)本，血液標(biāo)本按臨床采血技術(shù)規(guī)范要求抽取靜脈血3～5 mL，離心留取血漿備用;尿液標(biāo)本采集隨機(jī)尿3～5 mL，及時(shí)送檢。

1.2.2 檢測(cè)方法 嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作，應(yīng)用參考試劑檢測(cè)研究對(duì)象的血漿樣本，應(yīng)用考核試劑分別檢測(cè)同一研究對(duì)象的血漿及尿液標(biāo)本，確?？己嗽噭┟看卧囼?yàn)均為有效試驗(yàn)，考核試劑與參考試劑檢測(cè)結(jié)果不一致時(shí)應(yīng)對(duì)考核試劑的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)檢，并經(jīng)蛋白免疫印跡法確認(rèn)。

1.2.3 結(jié)果判讀 根據(jù)考核試劑說明書要求，對(duì)照點(diǎn)不顯色，檢測(cè)點(diǎn)無論顯色與否，結(jié)果均判定為無效(圖1);對(duì)照點(diǎn)顯色，檢測(cè)點(diǎn)不顯色，結(jié)果判定為陰性(圖2);對(duì)照點(diǎn)顯色，檢測(cè)點(diǎn)顯色，結(jié)果判定為陽性(圖3)。

圖1 無效結(jié)果Fig.1 The invalid result

圖2 陰性結(jié)果Fig.2 The negative result

圖3 陽性結(jié)果Fig.3 The positive result

1.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)算考核試劑與參考試劑檢測(cè)的陽性符合率、陰性符合率、總符合率與Kappa值，Kappa值與一致性強(qiáng)度關(guān)系見表1。

表1 Kappa值與一致性強(qiáng)度關(guān)系Table 1 Kappa value and consistency intensity

2 結(jié)果與分析

2.1 血漿樣本HIV抗體檢測(cè)情況

考核試劑與參考試劑結(jié)果均顯示80例臨床確診的HIV陽性感染者及2例艾滋病高危人群HIV抗體陽性?？己嗽噭┡c參考試劑檢測(cè)結(jié)果相比較，陽性符合率 100.00%，陰性符合率100.00%，總符合率 100.00%，Kappa 值 1.00，一致性強(qiáng)度為最強(qiáng)(表2)。

2.2 尿液樣本HIV抗體檢測(cè)情況

考核試劑檢測(cè)結(jié)果顯示，55例臨床確診的HIV陽性感染者及1例艾滋病高危人群尿液HIV抗體陽性?？己嗽噭┡c參考試劑檢測(cè)結(jié)果相比較，陽性符合率68.29%、陰性符合率100.0%、總符合率87.00%，Kappa值 0.72，一致性強(qiáng)度為高度(表3)。

表2 血漿樣本HIV抗體檢測(cè)結(jié)果Table 2 HIV antibody results of plasma samples

表3 尿液樣本HIV抗體檢測(cè)結(jié)果Table 3 HIV antibody results of urine samples

3 討論

研究顯示，HIV感染者不僅血液含有HIV抗體，其尿液、唾液、淚液、精液及陰道分泌物中均含有HIV抗體［4-6］。尿液標(biāo)本最易獲得且采集具有無損傷性，其HIV抗體與血液抗體平行，主要為IgG。國外上世紀(jì)末已有尿液HIV抗體的檢測(cè)報(bào)道，國內(nèi)近年開始有尿液HIV抗體的檢測(cè)技術(shù)研究［7-8］。萬泰藥業(yè)公司生產(chǎn)的免疫滲濾法HIV抗體診斷試劑盒可用于檢測(cè)血液及尿液標(biāo)本中HIV-1及HIV-2抗體，本研究以法國生物梅里埃公司HIV抗體診斷試劑盒(ELISA法)為參照，評(píng)估考核試劑萬泰藥業(yè)公司HIV1+2型抗體診斷試劑盒的臨床檢測(cè)性能。

對(duì)平行采集的200例背景清晰的受試者血漿及尿液標(biāo)本應(yīng)用考核試劑檢測(cè)，并與參考試劑檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，考核試劑檢測(cè)血漿HIV抗體與參考試劑相比較，陽性符合率、陰性符合率和總符合率均達(dá)到100%，Kappa值1.00，檢測(cè)結(jié)果一致性強(qiáng)度為最強(qiáng);考核試劑檢測(cè)尿液HIV抗體與參考試劑相比較，陽性符合率68.29%，陰性符合率100%，總符合率87.00%，Kappa值0.72，檢測(cè)結(jié)果一致性強(qiáng)度為高度。

本研究顯示，尿液HIV抗體檢測(cè)敏感性較血液標(biāo)本略低，200例受試者中，25例臨床確診的HIV陽性感染者和1例血液HIV抗體陽性(經(jīng)蛋白免疫印跡法確認(rèn))的AIDS高危人群，尿液標(biāo)本經(jīng)考核試劑檢測(cè)并復(fù)檢后HIV抗體均陰性，分析原因:①受試者尿液HIV抗體濃度低于血液標(biāo)本，與血漿相比，尿液的黏度很低，流過檢測(cè)卡的速度顯著增加，從而使抗原抗體結(jié)合的反應(yīng)時(shí)間縮短;②尿液中的化學(xué)物質(zhì)如無機(jī)鹽、蛋白質(zhì)、酸堿度等可以影響免疫反應(yīng)中抗原抗體的反應(yīng)活性，降低反應(yīng)的敏感度;③大量攝入液體或服用利尿劑等化學(xué)藥物影響尿液HIV抗體的陽性檢出率［8］。此外，有研究報(bào)道［9］，尿液存貯時(shí)間延長可導(dǎo)致假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。因此，尿液采集后應(yīng)盡快檢測(cè)。

綜上所述，免疫滲濾法HIV抗體診斷試劑盒對(duì)血漿樣本檢測(cè)性能優(yōu)越，并適合尿液標(biāo)本的HIV抗體檢測(cè)，由于尿液標(biāo)本采集具有無創(chuàng)傷性且容易獲得，大大降低了醫(yī)務(wù)人員職業(yè)暴露的風(fēng)險(xiǎn)。免疫滲濾法較傳統(tǒng)ELISA法操作簡便、快速，尤其適合基層醫(yī)院及大規(guī)模樣本HIV抗體篩查。

［1］De Cock KM，Jaffe HW，Curran JW.The evolving epidemiology of HIV/AIDS［J］.AIDS，2012，26(10):1205-1213.

［2］衛(wèi)生部新聞辦公室.介紹中國艾滋病疫情現(xiàn)狀［J］.首都公共衛(wèi)生，2010，4(1):1.

［3］李建彬，陳斌，米志強(qiáng)，等.以HIV-15＇LTR為靶點(diǎn)的藥物篩選細(xì)胞模型的構(gòu)建［J］.微生物學(xué)雜志，2011，31(6):96-100.

［4］Taye B，Woldeamanuel Y，Kebede E.Diagnostic detection of human immunodeficincy virus type-1 antibodies in urine，Jimma Hospital，south west Ethiopa［J］.Ethiop Med J，2006，44(4):363-368.

［5］Delaney KP，Branson BM，Uniyal A，et al.Performance of an oral fluid rapid HIV-1/2 test:experience from four CDC studies［J］.AIDS，2006，20(12):1655-1660.

［6］Fouda GG，Yates NL，Pollara J，et al.HIV-specific functional antibody responses in breast milk mirror those in plasma and are primarily mediated by IgG antibodies［J］.Journal of Virology，2011，85(18):9555-9567.

［7］譚卓，黃云堅(jiān)，倪崖，等.垂直流免疫印跡法檢測(cè)尿液HIV-1抗體的技術(shù)研究［J］.國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志，2008，35(2):86-88.

［8］趙立慶，雷素萍，李連學(xué)，等.ELISA法檢測(cè)尿液中HIV-1抗體的研究分析［J］.中國艾滋病性病，2003，9(5):276-277.

［9］Almeda J，Casabona J，Matas L，et al.Evaluation of a commercial enzyme immunoassay for HIV screening in urine［J］.Eur J Clin Microbiol Infect Dis，2004，23(11):831-835.