張壯麗，王陸巡，趙 寧，趙志鴻，王桂芳，張小俊

(鄭州大學(xué)醫(yī)藥科學(xué)研究院，河南鄭州 450052)

鹽酸千金藤堿 (Cepharantine Hydrochloride)是由防己科千金藤屬植物地不容塊根中提取分離出的單體生物堿—千金藤堿 (Cepharanthine)，經(jīng)成鹽制得的一種雙芐基異喹啉類生物堿化合物。鹽酸千金藤堿具有逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥性、抗氧化、抗炎、抑菌、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗肺纖維化、抗腫瘤、升高白細(xì)胞等生物學(xué)活性［1-6］。鹽酸千金藤堿目前僅注射劑一種劑型，劑型單一、給藥途徑單一、患者的順應(yīng)性較差。藥物微囊化后可制備成多種終端劑型，如片劑、膠囊劑等，可增加給藥途徑，提高患者順應(yīng)性，從而提高其藥用價(jià)值。噴霧干燥技術(shù)是藥物微囊化的一個(gè)有效方法，具有操作簡(jiǎn)便、可控性好、成囊率高、產(chǎn)品分散等特點(diǎn)，是最具工業(yè)化應(yīng)用價(jià)值的微囊化方法［7-9］。本實(shí)驗(yàn)采用噴霧干燥法，將鹽酸千金藤堿進(jìn)行微囊化，為鹽酸千金藤堿的新劑型開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

實(shí)驗(yàn)型噴霧干燥機(jī)DC-1500(上海達(dá)程實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司);高效液相色譜儀P680A(美國戴安公司);78-1磁力加熱攪拌器 (金壇市華峰儀器有限公司);ABS135-S(METTLER TOLEDO);顆粒圖像處理儀PIP8.1(歐美克儀器有限公司);超聲波發(fā)生器CSF-1A(上海超聲波儀器廠);DSC-60A型差示掃描量熱儀 (日本島津公司)。

鹽酸千金藤堿 (自制，純度＞98.5%);Eudragit S100(德國羅姆公司;上海云卓貿(mào)易有限公司贈(zèng)送);甲醇 (色譜純，賽默飛世爾科技);蒸餾水;其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備方法 取處方量的Eudragit S100溶于100 mL 95%乙醇中制得4%的溶液，將鹽酸千金藤堿溶于少量甲醇中，加入上述乙醇溶液中，加入適量甘油和蓖麻油，充分溶解后進(jìn)行噴霧干燥。

2.2 色譜條件 Agilent TC-C18色譜柱 (250 mm×4.6mm，5 μm)，流動(dòng)相為甲醇-水-氨水(84∶16∶0.2);檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm;體積流量0.5 mL/min;柱溫為室溫。

2.3 溶液的制備 取鹽酸千金藤堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成約200 μg/mL的對(duì)照品溶液。取鹽酸千金藤堿微囊約0.1 g，精密稱定，于100 mL量瓶中，加甲醇適量超聲1 h使其溶解，放至室溫，加甲醇定容至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液;以空白微囊按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照溶液。

2.4 方法學(xué)考察［10］

2.4.1 專屬性試驗(yàn) 分別吸取“2.3”項(xiàng)下的對(duì)照品、供試品和陰性對(duì)照品溶液各20 μL進(jìn)樣，按“2.2”項(xiàng)色譜條件試驗(yàn)。供試品溶液色譜圖中，有與對(duì)照品溶液保留時(shí)間相同的吸收峰，陰性對(duì)照溶液無此吸收峰。表明該法陰性無干擾，專屬性強(qiáng)。

2.4.2 線性關(guān)系考察 精密稱取鹽酸千金藤堿對(duì)照品適量，用甲醇配成101 mg/mL貯備液，精密吸取1、5、10、20、30、40、50 μL進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)、測(cè)定量 (μg)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為:Y=23.379X － 113.55，(r=0.9999)。結(jié)果表明:在鹽酸千金藤堿0.101～5.05 μg間與峰面積有較好的線性關(guān)系。

2.4.3 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的鹽酸千金藤堿微囊，分別加入一定量的鹽酸千金藤堿對(duì)照品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。測(cè)得低、中、高質(zhì)量濃度的樣品回收率分別為99.71%、100.94%、100.92%，RSD 分 別 為 2.23%、1.99%、1.88%(n=3)。

2.4.4 精密度和重復(fù)性試驗(yàn) 取同一對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，計(jì)算RSD為0.38%。精密稱取6份同一供試品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算RSD為0.22%。表明方法的精密度和重復(fù)性良好。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液，分別于0、2、6、12、24、36、48、72h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定。計(jì)算RSD為2.21%(n=6)，表明鹽酸千金藤堿溶液72 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 包封率及載藥量的測(cè)定 包封率 (%)=微囊中實(shí)際含藥量/實(shí)際投藥總量×100%;載藥量(%)=微囊中實(shí)際含藥量/微囊總重量×100%。按“2.3”項(xiàng)方法處理微囊，計(jì)算微囊包封率及載藥量。

2.6 制備工藝考察

2.6.1 單因素考察 以包封率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)Eudragit S100溶液濃度及其芯材比例進(jìn)行單因素考察。當(dāng)Eudragit S100的濃度分別為2%、3%、4%、5%(100mL乙醇中 Eudragit S100的質(zhì)量濃度)，按“2.1”項(xiàng)方法所制得微囊的包封率分別為46.3%、59.8%、72.4%、65.1%。當(dāng)Eudragit S100的用量為4%時(shí)所制得的微囊包封率最高，外觀較好，呈干燥粉末狀，顯微鏡下觀察有大量微囊，大小較為均勻，故選定Eudragit S100的濃度為4%。選擇芯材比1∶3、1∶4、1∶5，分別進(jìn)行噴霧干燥，得到的微囊進(jìn)行包封率檢測(cè)，結(jié)果分別為59.47%、73.62%、66.16%，故選擇芯材比為1∶4。

2.6.2 正交試驗(yàn)［11-12］在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選擇進(jìn)風(fēng)口溫度 (A)、進(jìn)液速度 (B)、噴霧壓強(qiáng) (C)進(jìn)行考察，各因素均確定為三個(gè)水平，以包封率為考察指標(biāo)，選用L9(34)正交表安排試驗(yàn)。因素水平見表1;結(jié)果及方差分析見表2、表3。

表1 正交試驗(yàn)因素水平Tab.1 Factors and levels

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.2 Results of orthogonal design

表3 方差分析Tab.3 Results of variance analysis

方差分析結(jié)果顯示，各因素影響微囊包封率的順序是A＞B＞C，即進(jìn)風(fēng)口溫度＞進(jìn)樣速度＞噴霧壓強(qiáng)，其中A、B二因素影響顯著。最佳工藝條件為A2B2C2，即進(jìn)風(fēng)口溫度140℃，進(jìn)樣速度6 mL/min，噴霧壓強(qiáng)0.2 MPa。

2.7 驗(yàn)證試驗(yàn) 按正交試驗(yàn)結(jié)果選定的最優(yōu)噴霧干燥工藝進(jìn)行3批驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果見表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 Results of verification test

由驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果可知，3批樣品的產(chǎn)率、載藥量和包封率重復(fù)性較好，表明該處方和工藝可行，重現(xiàn)性良好。

2.8 形態(tài)及粒徑分布 肉眼觀測(cè)到的微囊為白色或乳白色粉末，呈疏松狀，流動(dòng)性較好。顯微鏡下觀察，微囊外觀圓整、表面光滑，無黏連，測(cè)得平均粒徑為23.97 μm。見圖1。

圖1 微囊顯微鏡圖片 (400×)Fig.1 Micrograph of microcapsules(400×)

2.9 差示掃描量熱 (DSC)分析［13-14］分別取鹽酸千金藤堿、空白微囊、鹽酸千金藤堿與空白微囊物理混合物、鹽酸千金藤堿微囊適量，均以空Al2O3為參比，在加熱速率為10℃/min，加熱范圍為20～250℃，氮?dú)怏w積流量40 mL/min的條件下，分別測(cè)得各樣品的DSC曲線，以確定藥物在微囊中的分散狀態(tài)。結(jié)果見圖2。

圖2 DSC圖譜Fig.2 Differential Scanning Calorimetry(DSC)curves

3 討論

3.1 鹽酸千金藤堿味苦，原有劑型單一，給藥途徑單一，微囊化后不但可以掩味，而且可制備成多種終端劑型，豐富其給藥途徑，提高患者的順應(yīng)性，方便臨床使用。

3.2 本實(shí)驗(yàn)采用噴霧干燥法制備鹽酸千金藤堿微囊，以正交試驗(yàn)法優(yōu)選制備工藝，以微囊的收率、載藥量、包封率為指標(biāo)，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，證實(shí)了工藝穩(wěn)定可行;對(duì)所得微囊進(jìn)行了形態(tài)、粒徑和DSC考察，結(jié)果表明，優(yōu)化的工藝適合鹽酸千金藤堿微囊的制備，為日后鹽酸千金藤堿新劑型的開發(fā)提供了實(shí)驗(yàn)參考。

3.3 噴霧干燥法制備微囊，對(duì)工藝參數(shù)的考察十分重要。因本實(shí)驗(yàn)中采用的噴霧干燥機(jī)其出風(fēng)口溫度自動(dòng)與進(jìn)風(fēng)口溫度匹配，因此，未考察出風(fēng)口溫度。

3.4 由DSC圖譜可看出，鹽酸千金藤堿、Eudragit S100自身的特征峰在微囊中均消失，產(chǎn)生了微囊新特征峰，說明鹽酸千金藤堿與Eudragit S100不是簡(jiǎn)單的物理混合，而是以新的相互結(jié)合的狀態(tài)存在，從而形成了微囊。

3.5 制備工藝中加入蓖麻油和甘油可起到良好的增塑作用，有效地減少黏壁和靜電吸附現(xiàn)象。

3.6 前期對(duì)鹽酸千金藤堿的溶解性考察發(fā)現(xiàn)，甲醇對(duì)鹽酸千金藤堿的溶解性好于乙醇，因此，在制備方法中，鹽酸千金藤堿先用少量甲醇溶解，再加入Eudragit S100的乙醇溶液中。

3.7 正交試驗(yàn)的預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，包封率和產(chǎn)率基本呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系，載藥量范圍波動(dòng)不大，因此，正交試驗(yàn)中采用包封率為主要考察指標(biāo)。為了更為全面地考察優(yōu)選工藝的重現(xiàn)性，在驗(yàn)證試驗(yàn)中分別考察了產(chǎn)率、載藥量和包封率。

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