黃芳

1 前言

“微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)”是人教版高中生物學(xué)“生物技術(shù)實(shí)踐”模塊中的重要學(xué)生活動(dòng)。該課題中包括了培養(yǎng)基配制，微生物接種，微生物菌落形態(tài)觀察以及微生物的分離純化。這部分內(nèi)容與人們的生活息息相關(guān)，學(xué)生也對實(shí)驗(yàn)充滿興趣，但按照教材實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及順序安排實(shí)驗(yàn)會(huì)遇到一系列問題（如菌種的來源及保存，無菌條件等）。因此，筆者設(shè)計(jì)此實(shí)驗(yàn)，希望通過此實(shí)驗(yàn)讓學(xué)生掌握微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的操作。

2 培養(yǎng)基的配置及滅菌

按照教材方法與步驟配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基。并將實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)皿以及配置好的培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。

3 培養(yǎng)手指上的微生物菌落并計(jì)數(shù)

3.1 倒平板

待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將每個(gè)培養(yǎng)皿底部用記號筆均分為兩份。一側(cè)用未清洗過的手指均勻涂抹培養(yǎng)基表面；另一側(cè)用洗手液或者香皂清洗過的手指均勻涂抹培養(yǎng)基表面（需要標(biāo)注區(qū)分兩側(cè)）。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，將學(xué)生分為兩組，一組學(xué)生探究不同品牌洗手液的抑菌效果；另一組學(xué)生探究不同品牌香皂的抑菌效果。

3.2 培養(yǎng)

在28℃的條件下，培養(yǎng)微生物48 h后（若環(huán)境溫度較低，需要延長培養(yǎng)時(shí)間），觀察培養(yǎng)基表面的菌落的種類和數(shù)量，如圖1所示。

3.3 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)

設(shè)計(jì)表格統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，見表1。

4 分離培養(yǎng)手指上的微生物

在培養(yǎng)基上不同形態(tài)的菌落中分別取菌種，然后用劃線法接種到培養(yǎng)皿中進(jìn)行單獨(dú)培養(yǎng)。將各培養(yǎng)皿標(biāo)記后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，觀察菌落的形態(tài)及顏色。

5 觀察抑菌圈比較抑菌效果

5.1 制備洗手液和香皂溶液和濾紙片

稱取等量洗手液與香皂分別與等量的蒸餾水混合后攪拌溶解備用。將濾紙剪成半徑為6 mm的小圓片，將濾紙片與制備的溶液充分混合后靠在小燒杯壁，一段時(shí)間后待用。

5.2 紙片瓊脂擴(kuò)散法檢測抑菌圈

用涂布法分別將分離培養(yǎng)的各種微生物接種至滅菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上。將含有香皂和洗手液的濾紙片用灼燒滅菌的鑷子分別貼在涂布接種微生物的培養(yǎng)基的表面，相互間隔一定的距離，置于室內(nèi)倒置培養(yǎng)。

5.3 觀察并測量抑菌圈大小

28℃條件下培養(yǎng)48 h后（若環(huán)境溫度較低，需要延長培養(yǎng)時(shí)間），觀察是否有抑菌圈的出現(xiàn)，并測量抑菌圈大小，如圖2所示。

6 教學(xué)結(jié)果與反思

實(shí)驗(yàn)中學(xué)生可以直觀地觀察到不同的菌落形態(tài)，根據(jù)菌落形態(tài)的不同可以判斷出微生物的種類不同，同時(shí)理解我們生活的環(huán)境及體表均有微生物存在。通過統(tǒng)計(jì)洗手前后培養(yǎng)基表面的菌落數(shù)量，可以發(fā)現(xiàn)洗手后培養(yǎng)基上微生物菌落數(shù)量確實(shí)少于洗手前。為了防止“病從口入”，勤洗手很重要。

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，學(xué)生可以深刻理解微生物培養(yǎng)中無菌操作的重要性，也能體驗(yàn)微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的一般過程和方法。

在實(shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)溫度對微生物培養(yǎng)的影響較大，若環(huán)境溫度較低，則需要一周左右才能觀察到微生物菌落。因此，這個(gè)實(shí)驗(yàn)放在夏季做更好，能縮短實(shí)驗(yàn)周期。

在中學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中，嘗試設(shè)計(jì)更多與生活相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，更能提高學(xué)生的實(shí)驗(yàn)興趣和聯(lián)系生活實(shí)際的能力。endprint