鴨禽流感疫苗免疫程序研究報(bào)告

楊峻+羅青平+艾地云+羅玲+王紅琳+張蓉蓉+溫國(guó)元+張騰飛+汪宏才+邵華斌

摘要：為了科學(xué)制定鴨的禽流感疫苗免疫程序，進(jìn)行了以下三方面的試驗(yàn)：①不同品種雛鴨母源抗體消長(zhǎng)情況測(cè)定。結(jié)果表明，5～7日齡雛鴨AI-HI抗體可維持較高水平，15～17日齡下降至4.0log2以下。②疫苗首免后抗體檢測(cè)。結(jié)果表明，鴨首次免疫后2周可測(cè)出AI-HI抗體，4周時(shí)達(dá)到高峰;抗體水平持續(xù)4周后開始下降。肉鴨免疫一次抗體水平差異較大，不能完全預(yù)防禽流感的發(fā)生。③肉種鴨及蛋種鴨免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定。結(jié)果表明，7～14日齡初免，60日齡二次免疫和120日齡加強(qiáng)免疫（三次免疫），種鴨的AI-HI抗體水平最高分別可達(dá)到9log2、11 log2，二次免疫后8個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為5.6 log2，三次免疫后10個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為7.6 log2以上。

關(guān)鍵詞：鴨;禽流感;滅活疫苗;免疫程序

中圖分類號(hào)：S859.79;S858.32 ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A ? ? ? 文章編號(hào)：0439-8114（2014）21-5213-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.21.042

Immune Procedure of Avian inFluenza Vaccine for Duck

YANG Jun， LUO Qing-ping， AI Di-yun， LUO Ling， WANG Hong-lin， ZHANG Rong-rong， WEN Guo-yuan， ZHANG Teng-fei， WANG Hong-cai， SHAO Hua-bin

（Institute of Animal and Veterinary Science， Hubei Academy of Agricultural Sciences/Hubei Key Laboratory of Animal Embryo and Molecular Breeding， Wuhan 430064， China）

Abstract： In order to scientifically make the immune procedure of avian influenza vaccine for duck， three tests including the detection of the variety of maternal antibody levels in different breeds， the antibody detection after first immunization， and the relationship of immune procedure and antibody levels variety were made. The results showed that the AI-HI antibody levels of 1 week old ducks were relative higher， and then dropped to 4 log2 or even lower at 15 to 17 days old. ?The AI-HI antibody in ducks was detected at 2 weeks after first immunization， and antibody level reached peak at four weeks after first immunization （4.8log2）. The antibody level was stable 4 weeks and then began to drop. The antibody levels in meat ducks had great difference after first immunization. AIV was not prevented completely. The AI-HI antibody level of breeding ducks reached to 9～11 log2 when the ducks got first immunization at 8 days old， the second immunization at 60 days old， and booster immunization were at 120 days old. The antibody level maintained at 6～9 log2 after 10 months.

Key words： duck; avian influenza; inactived vaccine; immune procedure

研究表明，水禽是禽流感病毒的天然宿主，禽流感病毒不僅可長(zhǎng)期在其體內(nèi)寄居，而且可通過其遷徙經(jīng)消化道排毒污染水域而感染其他鳥類和哺乳動(dòng)物[1]。這可能是禽流感病毒長(zhǎng)期適應(yīng)水禽達(dá)到進(jìn)化平衡狀態(tài)的結(jié)果。但自20世紀(jì)90年代中期以后，研究發(fā)現(xiàn)H5N1亞型禽流感病毒對(duì)水禽具有明顯的致病性，并可引起大批水禽發(fā)病死亡，這說明隨著自然生態(tài)的進(jìn)化，禽流感病毒與水禽之間的生態(tài)平衡被打破，水禽也成了禽流感病毒的易感宿主[2-4]。近年來周邊國(guó)家暴發(fā)的禽流感，給中國(guó)養(yǎng)禽業(yè)構(gòu)成了極大威脅，因此及時(shí)開展有關(guān)禽流感疫苗的研究成為當(dāng)前預(yù)防和控制禽流感的必然選擇。有關(guān)禽流感疫苗免疫雞效果的研究報(bào)道較多，但對(duì)水禽系統(tǒng)免疫效果的報(bào)道較少。本研究針對(duì)鴨禽流感滅活疫苗免疫程序中最佳免疫時(shí)間及不同品種鴨免疫效果進(jìn)行了試驗(yàn)，對(duì)預(yù)防和控制鴨禽流感的發(fā)生具有重要參考意義。

1 ?材料與方法

1.1 ?商品疫苗及檢測(cè)用抗原

禽流感滅活疫苗（H5亞型）選擇國(guó)內(nèi)批準(zhǔn)的生產(chǎn)廠家疫苗;用于檢測(cè)AI-HI抗體的抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。AI-HI抗體檢測(cè)方法按常規(guī)方法[5]進(jìn)行。

1.2 ?試驗(yàn)鴨

雛鴨、青年鴨和成年產(chǎn)蛋鴨來自湖北省內(nèi)蛋鴨場(chǎng)和肉鴨場(chǎng)，試驗(yàn)前均未進(jìn)行禽流感免疫。大部分試驗(yàn)結(jié)合當(dāng)?shù)厣a(chǎn)完成。

1.3 ?試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 ?雛鴨母源抗體消長(zhǎng)情況的測(cè)定 ?分別對(duì)3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行母源抗體測(cè)定，每批1日齡雛鴨80只，每2 d采血1次，測(cè)定雛鴨母源抗體，直到AI-HI≤3log2。

1.3.2 ?疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn) ?分別選擇3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的7～14日齡雛鴨進(jìn)行試驗(yàn)，每組免疫60只，首次免疫劑量：每只鴨頸背部皮下注射0.3 mL;免疫后1、2、3、4、6、8、10周各采血一次，測(cè)定AI-HI抗體的消長(zhǎng)情況，確定抗體最早產(chǎn)生時(shí)間。同時(shí)各組分別設(shè)30只條件相同的鴨不免疫禽流感疫苗作對(duì)照。

1.3.3 ?不同日齡雛鴨首免效果觀察 ?試驗(yàn)選擇肉種鴨商品代和產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行試驗(yàn)，分別于3、5、7、9、14、19日齡進(jìn)行免疫，每組免疫60只，各組在半開放鴨舍中隔離飼養(yǎng)，免疫劑量為0.3 mL/只。免疫前檢測(cè)母源抗體水平，免疫后每周采血1次，測(cè)定AI-HI抗體的消長(zhǎng)情況，觀察分析不同品種鴨的最佳免疫日齡。

1.3.4 ?種鴨的免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定 ? 1 000只肉種鴨和1 000只地方產(chǎn)蛋種鴨全部進(jìn)行二次免疫（7～14日齡初免，60日齡二次免疫），在120日齡時(shí)各組均分為兩部分，其中500只進(jìn)行第三次免疫（在二次免疫基礎(chǔ)上，120日齡加強(qiáng)免疫一次）。首免劑量為0.3 mL/只，二次和三次免疫均為0.5 mL/只。免疫后1～4周每周檢測(cè)抗體1次，分析抗體上升規(guī)律;之后每2月采血1次，測(cè)定AI-HI抗體的持續(xù)期。試驗(yàn)分別在肉鴨場(chǎng)和蛋鴨場(chǎng)進(jìn)行。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?雛鴨母源抗體消長(zhǎng)情況的測(cè)定結(jié)果

分別對(duì)3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行母源抗體測(cè)定，結(jié)果（表1）表明，5～7日齡雛鴨AI-HI母源抗體水平維持在較高水平，此后1周快速下降，15～17日齡母源抗體水平降至4.0 log2以下。

2.2 ?疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn)結(jié)果

由表2、表3可見，肉鴨和蛋鴨分別在7、14日齡免疫，2周后可檢測(cè)到AI-HI抗體，4周時(shí)抗體達(dá)到4.0log2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達(dá)不到5log2;抗體水平持續(xù)4周之后開始下降，母源抗體對(duì)疫苗免疫效果影響不大。

2.3 ?不同日齡雛鴨首免效果觀察

由表4、表5可見，鴨3～5日齡免疫時(shí)抗體上升慢，免疫效果差，AI-HI抗體水平為3～5log2。7～19日齡免疫時(shí)抗體水平在免疫后2周開始上升，4～6周達(dá)高峰。根據(jù)母源抗體情況，肉鴨7～9日齡首免較好，蛋鴨14～19日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。

3.4 ?肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定

由表6、表7可見，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時(shí)間8個(gè)月（300日齡），二次免疫后8個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為5.6log2，最高抗體水平為9.0log2;三次免疫2周后其抗體水平持續(xù)上升，持續(xù)時(shí)間10個(gè)月以上（420日齡），三次免疫后10個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為7.6log2以上，最高抗體水平為11.0log2。肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨分別在60日齡和120日齡進(jìn)行二次和三次免疫效果基本一致。

3 ?小結(jié)與討論

1）本研究表明，不同品種的雛鴨，母源抗體水平在5～7日齡維持在較高水平，此后1周快速下降。不同日齡雛鴨首免效果觀察結(jié)果表明，3～5日齡免疫時(shí)鴨抗體水平上升慢，免疫效果差，7～19日齡免疫時(shí)鴨抗體水平在2周時(shí)開始上升，4～6周達(dá)高峰。根據(jù)母源抗體情況，肉鴨7～9日齡首免較好，蛋鴨14～19日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn)結(jié)果表明，肉鴨和蛋鴨分別在7、14日齡免疫，2周后可檢測(cè)到AI-HI抗體，4周時(shí)其抗體水平達(dá)到4.0log2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達(dá)不到5.0log2;抗體水平持續(xù)4周之后開始下降;母源抗體對(duì)疫苗免疫效果影響不大。而二次免疫后AI-HI抗體滴度明顯上升，且維持時(shí)間長(zhǎng)。因此，在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中必須對(duì)鴨進(jìn)行二次免疫，尤其是種用鴨最好在開產(chǎn)前2～3周根據(jù)情況進(jìn)行三免，確保有效抗體的持續(xù)時(shí)間。

2）關(guān)于鴨禽流感免疫有效抗體問題，根據(jù)姜北宇等[6]所做的H5亞型禽流感疫苗免疫后HI抗體與攻毒保護(hù)率的關(guān)系的研究結(jié)果，當(dāng)免疫雞HI≤23時(shí)，攻毒后全部發(fā)病死亡;HI=24時(shí)，攻毒保護(hù)率為77.4%;HI=25時(shí)，攻毒保護(hù)率為97.4%;HI≥26時(shí)，攻毒保護(hù)率為100%。這與其他一些研究人員所得結(jié)果基本一致。由于條件的限制，本研究未做抗體水平與攻毒保護(hù)率關(guān)系的相關(guān)性試驗(yàn)，國(guó)內(nèi)也尚未見相關(guān)報(bào)道，但根據(jù)作者多年對(duì)水禽的臨床診斷經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，以上的相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果可用于評(píng)價(jià)禽流感疫苗免疫效果時(shí)參考。

3）肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定結(jié)果表明，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時(shí)間8個(gè)月（300日齡），二次免疫后8個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為5.6log2，最高抗體水平為9.0log2;三次免疫2周后鴨抗體水平持續(xù)上升，持續(xù)時(shí)間10個(gè)月以上（420日齡），三次免疫后10個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為7.6log2以上，最高抗體水平為11.0log2。因此商品蛋鴨推薦二次免疫程序，種鴨推薦三次免疫程序，商品肉鴨推薦7～9日齡首免。

4）堅(jiān)持定期檢測(cè)鴨群AI-HI抗體，是確保鴨禽流感疫苗免疫成功的關(guān)鍵措施，不同年齡、不同品種、不同飼養(yǎng)條件鴨群的禽流感疫苗免疫效果均會(huì)有一定的差異，應(yīng)根據(jù)不同情況，制定適合本場(chǎng)的禽流感免疫程序，確保養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1] [美]B W卡爾尼克.禽病學(xué)[M].第十版.高 ?福，劉文軍 ?譯.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999.743-746.

[2] 劉秀梵.家養(yǎng)水禽A型流感病毒和新城疫病毒的感染和臨床疾病[A].第15屆世界禽病大會(huì)暨中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C].北京：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)，2007.87-95.

[3] 于康震.中國(guó)的禽流感[A].第15屆世界禽病大會(huì)暨中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C].北京：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)，2007.134-137.

[4] 甘孟侯.全球禽流感的流行形勢(shì)[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2004，26（6）：468-470.

[5] 中國(guó)獸藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)獸藥典（2005年版）[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006.

[6] 姜北宇，劉月煥，?？〗?，等.H5亞型禽流感疫苗對(duì)特禽及水禽的免疫效果觀察[J].中國(guó)獸藥雜志，2005，39（9）：23-25.

（責(zé)任編輯 ?曾德芳）

禽流感滅活疫苗（H5亞型）選擇國(guó)內(nèi)批準(zhǔn)的生產(chǎn)廠家疫苗;用于檢測(cè)AI-HI抗體的抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。AI-HI抗體檢測(cè)方法按常規(guī)方法[5]進(jìn)行。

1.2 ?試驗(yàn)鴨

雛鴨、青年鴨和成年產(chǎn)蛋鴨來自湖北省內(nèi)蛋鴨場(chǎng)和肉鴨場(chǎng)，試驗(yàn)前均未進(jìn)行禽流感免疫。大部分試驗(yàn)結(jié)合當(dāng)?shù)厣a(chǎn)完成。

1.3 ?試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 ?雛鴨母源抗體消長(zhǎng)情況的測(cè)定 ?分別對(duì)3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行母源抗體測(cè)定，每批1日齡雛鴨80只，每2 d采血1次，測(cè)定雛鴨母源抗體，直到AI-HI≤3log2。

1.3.2 ?疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn) ?分別選擇3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的7～14日齡雛鴨進(jìn)行試驗(yàn)，每組免疫60只，首次免疫劑量：每只鴨頸背部皮下注射0.3 mL;免疫后1、2、3、4、6、8、10周各采血一次，測(cè)定AI-HI抗體的消長(zhǎng)情況，確定抗體最早產(chǎn)生時(shí)間。同時(shí)各組分別設(shè)30只條件相同的鴨不免疫禽流感疫苗作對(duì)照。

1.3.3 ?不同日齡雛鴨首免效果觀察 ?試驗(yàn)選擇肉種鴨商品代和產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行試驗(yàn)，分別于3、5、7、9、14、19日齡進(jìn)行免疫，每組免疫60只，各組在半開放鴨舍中隔離飼養(yǎng)，免疫劑量為0.3 mL/只。免疫前檢測(cè)母源抗體水平，免疫后每周采血1次，測(cè)定AI-HI抗體的消長(zhǎng)情況，觀察分析不同品種鴨的最佳免疫日齡。

1.3.4 ?種鴨的免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定 ? 1 000只肉種鴨和1 000只地方產(chǎn)蛋種鴨全部進(jìn)行二次免疫（7～14日齡初免，60日齡二次免疫），在120日齡時(shí)各組均分為兩部分，其中500只進(jìn)行第三次免疫（在二次免疫基礎(chǔ)上，120日齡加強(qiáng)免疫一次）。首免劑量為0.3 mL/只，二次和三次免疫均為0.5 mL/只。免疫后1～4周每周檢測(cè)抗體1次，分析抗體上升規(guī)律;之后每2月采血1次，測(cè)定AI-HI抗體的持續(xù)期。試驗(yàn)分別在肉鴨場(chǎng)和蛋鴨場(chǎng)進(jìn)行。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?雛鴨母源抗體消長(zhǎng)情況的測(cè)定結(jié)果

分別對(duì)3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行母源抗體測(cè)定，結(jié)果（表1）表明，5～7日齡雛鴨AI-HI母源抗體水平維持在較高水平，此后1周快速下降，15～17日齡母源抗體水平降至4.0 log2以下。

2.2 ?疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn)結(jié)果

由表2、表3可見，肉鴨和蛋鴨分別在7、14日齡免疫，2周后可檢測(cè)到AI-HI抗體，4周時(shí)抗體達(dá)到4.0log2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達(dá)不到5log2;抗體水平持續(xù)4周之后開始下降，母源抗體對(duì)疫苗免疫效果影響不大。

2.3 ?不同日齡雛鴨首免效果觀察

由表4、表5可見，鴨3～5日齡免疫時(shí)抗體上升慢，免疫效果差，AI-HI抗體水平為3～5log2。7～19日齡免疫時(shí)抗體水平在免疫后2周開始上升，4～6周達(dá)高峰。根據(jù)母源抗體情況，肉鴨7～9日齡首免較好，蛋鴨14～19日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。

3.4 ?肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定

由表6、表7可見，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時(shí)間8個(gè)月（300日齡），二次免疫后8個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為5.6log2，最高抗體水平為9.0log2;三次免疫2周后其抗體水平持續(xù)上升，持續(xù)時(shí)間10個(gè)月以上（420日齡），三次免疫后10個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為7.6log2以上，最高抗體水平為11.0log2。肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨分別在60日齡和120日齡進(jìn)行二次和三次免疫效果基本一致。

3 ?小結(jié)與討論

1）本研究表明，不同品種的雛鴨，母源抗體水平在5～7日齡維持在較高水平，此后1周快速下降。不同日齡雛鴨首免效果觀察結(jié)果表明，3～5日齡免疫時(shí)鴨抗體水平上升慢，免疫效果差，7～19日齡免疫時(shí)鴨抗體水平在2周時(shí)開始上升，4～6周達(dá)高峰。根據(jù)母源抗體情況，肉鴨7～9日齡首免較好，蛋鴨14～19日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn)結(jié)果表明，肉鴨和蛋鴨分別在7、14日齡免疫，2周后可檢測(cè)到AI-HI抗體，4周時(shí)其抗體水平達(dá)到4.0log2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達(dá)不到5.0log2;抗體水平持續(xù)4周之后開始下降;母源抗體對(duì)疫苗免疫效果影響不大。而二次免疫后AI-HI抗體滴度明顯上升，且維持時(shí)間長(zhǎng)。因此，在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中必須對(duì)鴨進(jìn)行二次免疫，尤其是種用鴨最好在開產(chǎn)前2～3周根據(jù)情況進(jìn)行三免，確保有效抗體的持續(xù)時(shí)間。

2）關(guān)于鴨禽流感免疫有效抗體問題，根據(jù)姜北宇等[6]所做的H5亞型禽流感疫苗免疫后HI抗體與攻毒保護(hù)率的關(guān)系的研究結(jié)果，當(dāng)免疫雞HI≤23時(shí)，攻毒后全部發(fā)病死亡;HI=24時(shí)，攻毒保護(hù)率為77.4%;HI=25時(shí)，攻毒保護(hù)率為97.4%;HI≥26時(shí)，攻毒保護(hù)率為100%。這與其他一些研究人員所得結(jié)果基本一致。由于條件的限制，本研究未做抗體水平與攻毒保護(hù)率關(guān)系的相關(guān)性試驗(yàn)，國(guó)內(nèi)也尚未見相關(guān)報(bào)道，但根據(jù)作者多年對(duì)水禽的臨床診斷經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，以上的相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果可用于評(píng)價(jià)禽流感疫苗免疫效果時(shí)參考。

3）肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定結(jié)果表明，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時(shí)間8個(gè)月（300日齡），二次免疫后8個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為5.6log2，最高抗體水平為9.0log2;三次免疫2周后鴨抗體水平持續(xù)上升，持續(xù)時(shí)間10個(gè)月以上（420日齡），三次免疫后10個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為7.6log2以上，最高抗體水平為11.0log2。因此商品蛋鴨推薦二次免疫程序，種鴨推薦三次免疫程序，商品肉鴨推薦7～9日齡首免。

4）堅(jiān)持定期檢測(cè)鴨群AI-HI抗體，是確保鴨禽流感疫苗免疫成功的關(guān)鍵措施，不同年齡、不同品種、不同飼養(yǎng)條件鴨群的禽流感疫苗免疫效果均會(huì)有一定的差異，應(yīng)根據(jù)不同情況，制定適合本場(chǎng)的禽流感免疫程序，確保養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

[1] [美]B W卡爾尼克.禽病學(xué)[M].第十版.高 ?福，劉文軍 ?譯.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999.743-746.

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[3] 于康震.中國(guó)的禽流感[A].第15屆世界禽病大會(huì)暨中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C].北京：中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)，2007.134-137.

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[6] 姜北宇，劉月煥，?？〗埽?H5亞型禽流感疫苗對(duì)特禽及水禽的免疫效果觀察[J].中國(guó)獸藥雜志，2005，39（9）：23-25.

（責(zé)任編輯 ?曾德芳）

禽流感滅活疫苗（H5亞型）選擇國(guó)內(nèi)批準(zhǔn)的生產(chǎn)廠家疫苗;用于檢測(cè)AI-HI抗體的抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。AI-HI抗體檢測(cè)方法按常規(guī)方法[5]進(jìn)行。

1.2 ?試驗(yàn)鴨

雛鴨、青年鴨和成年產(chǎn)蛋鴨來自湖北省內(nèi)蛋鴨場(chǎng)和肉鴨場(chǎng)，試驗(yàn)前均未進(jìn)行禽流感免疫。大部分試驗(yàn)結(jié)合當(dāng)?shù)厣a(chǎn)完成。

1.3 ?試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.3.1 ?雛鴨母源抗體消長(zhǎng)情況的測(cè)定 ?分別對(duì)3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行母源抗體測(cè)定，每批1日齡雛鴨80只，每2 d采血1次，測(cè)定雛鴨母源抗體，直到AI-HI≤3log2。

1.3.2 ?疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn) ?分別選擇3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的7～14日齡雛鴨進(jìn)行試驗(yàn)，每組免疫60只，首次免疫劑量：每只鴨頸背部皮下注射0.3 mL;免疫后1、2、3、4、6、8、10周各采血一次，測(cè)定AI-HI抗體的消長(zhǎng)情況，確定抗體最早產(chǎn)生時(shí)間。同時(shí)各組分別設(shè)30只條件相同的鴨不免疫禽流感疫苗作對(duì)照。

1.3.3 ?不同日齡雛鴨首免效果觀察 ?試驗(yàn)選擇肉種鴨商品代和產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行試驗(yàn)，分別于3、5、7、9、14、19日齡進(jìn)行免疫，每組免疫60只，各組在半開放鴨舍中隔離飼養(yǎng)，免疫劑量為0.3 mL/只。免疫前檢測(cè)母源抗體水平，免疫后每周采血1次，測(cè)定AI-HI抗體的消長(zhǎng)情況，觀察分析不同品種鴨的最佳免疫日齡。

1.3.4 ?種鴨的免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定 ? 1 000只肉種鴨和1 000只地方產(chǎn)蛋種鴨全部進(jìn)行二次免疫（7～14日齡初免，60日齡二次免疫），在120日齡時(shí)各組均分為兩部分，其中500只進(jìn)行第三次免疫（在二次免疫基礎(chǔ)上，120日齡加強(qiáng)免疫一次）。首免劑量為0.3 mL/只，二次和三次免疫均為0.5 mL/只。免疫后1～4周每周檢測(cè)抗體1次，分析抗體上升規(guī)律;之后每2月采血1次，測(cè)定AI-HI抗體的持續(xù)期。試驗(yàn)分別在肉鴨場(chǎng)和蛋鴨場(chǎng)進(jìn)行。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?雛鴨母源抗體消長(zhǎng)情況的測(cè)定結(jié)果

分別對(duì)3批肉種鴨商品代和3批產(chǎn)蛋鴨商品代的雛鴨進(jìn)行母源抗體測(cè)定，結(jié)果（表1）表明，5～7日齡雛鴨AI-HI母源抗體水平維持在較高水平，此后1周快速下降，15～17日齡母源抗體水平降至4.0 log2以下。

2.2 ?疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn)結(jié)果

由表2、表3可見，肉鴨和蛋鴨分別在7、14日齡免疫，2周后可檢測(cè)到AI-HI抗體，4周時(shí)抗體達(dá)到4.0log2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達(dá)不到5log2;抗體水平持續(xù)4周之后開始下降，母源抗體對(duì)疫苗免疫效果影響不大。

2.3 ?不同日齡雛鴨首免效果觀察

由表4、表5可見，鴨3～5日齡免疫時(shí)抗體上升慢，免疫效果差，AI-HI抗體水平為3～5log2。7～19日齡免疫時(shí)抗體水平在免疫后2周開始上升，4～6周達(dá)高峰。根據(jù)母源抗體情況，肉鴨7～9日齡首免較好，蛋鴨14～19日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。

3.4 ?肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定

由表6、表7可見，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時(shí)間8個(gè)月（300日齡），二次免疫后8個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為5.6log2，最高抗體水平為9.0log2;三次免疫2周后其抗體水平持續(xù)上升，持續(xù)時(shí)間10個(gè)月以上（420日齡），三次免疫后10個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為7.6log2以上，最高抗體水平為11.0log2。肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨分別在60日齡和120日齡進(jìn)行二次和三次免疫效果基本一致。

3 ?小結(jié)與討論

1）本研究表明，不同品種的雛鴨，母源抗體水平在5～7日齡維持在較高水平，此后1周快速下降。不同日齡雛鴨首免效果觀察結(jié)果表明，3～5日齡免疫時(shí)鴨抗體水平上升慢，免疫效果差，7～19日齡免疫時(shí)鴨抗體水平在2周時(shí)開始上升，4～6周達(dá)高峰。根據(jù)母源抗體情況，肉鴨7～9日齡首免較好，蛋鴨14～19日齡首免較好（非禽流感流行區(qū)）。疫苗首次免疫鴨抗體產(chǎn)生期試驗(yàn)結(jié)果表明，肉鴨和蛋鴨分別在7、14日齡免疫，2周后可檢測(cè)到AI-HI抗體，4周時(shí)其抗體水平達(dá)到4.0log2以上，但抗體水平不一致，抗體平均幾何滴度達(dá)不到5.0log2;抗體水平持續(xù)4周之后開始下降;母源抗體對(duì)疫苗免疫效果影響不大。而二次免疫后AI-HI抗體滴度明顯上升，且維持時(shí)間長(zhǎng)。因此，在臨床生產(chǎn)實(shí)踐中必須對(duì)鴨進(jìn)行二次免疫，尤其是種用鴨最好在開產(chǎn)前2～3周根據(jù)情況進(jìn)行三免，確保有效抗體的持續(xù)時(shí)間。

2）關(guān)于鴨禽流感免疫有效抗體問題，根據(jù)姜北宇等[6]所做的H5亞型禽流感疫苗免疫后HI抗體與攻毒保護(hù)率的關(guān)系的研究結(jié)果，當(dāng)免疫雞HI≤23時(shí)，攻毒后全部發(fā)病死亡;HI=24時(shí)，攻毒保護(hù)率為77.4%;HI=25時(shí)，攻毒保護(hù)率為97.4%;HI≥26時(shí)，攻毒保護(hù)率為100%。這與其他一些研究人員所得結(jié)果基本一致。由于條件的限制，本研究未做抗體水平與攻毒保護(hù)率關(guān)系的相關(guān)性試驗(yàn)，國(guó)內(nèi)也尚未見相關(guān)報(bào)道，但根據(jù)作者多年對(duì)水禽的臨床診斷經(jīng)驗(yàn)認(rèn)為，以上的相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果可用于評(píng)價(jià)禽流感疫苗免疫效果時(shí)參考。

3）肉種鴨及產(chǎn)蛋種鴨免疫程序及抗體消長(zhǎng)規(guī)律的測(cè)定結(jié)果表明，二次免疫1周后鴨抗體水平開始上升，持續(xù)時(shí)間8個(gè)月（300日齡），二次免疫后8個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為5.6log2，最高抗體水平為9.0log2;三次免疫2周后鴨抗體水平持續(xù)上升，持續(xù)時(shí)間10個(gè)月以上（420日齡），三次免疫后10個(gè)月其AI-HI平均抗體水平為7.6log2以上，最高抗體水平為11.0log2。因此商品蛋鴨推薦二次免疫程序，種鴨推薦三次免疫程序，商品肉鴨推薦7～9日齡首免。

4）堅(jiān)持定期檢測(cè)鴨群AI-HI抗體，是確保鴨禽流感疫苗免疫成功的關(guān)鍵措施，不同年齡、不同品種、不同飼養(yǎng)條件鴨群的禽流感疫苗免疫效果均會(huì)有一定的差異，應(yīng)根據(jù)不同情況，制定適合本場(chǎng)的禽流感免疫程序，確保養(yǎng)鴨業(yè)健康發(fā)展。

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（責(zé)任編輯 ?曾德芳）