朱裕林， 陳衛(wèi)東 ， 張冬梅， 習斌斌

(1. 蚌埠醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院，安徽 蚌埠233004;2. 安徽中醫(yī)藥大學，安徽 合肥230031)

淫羊藿含有多種生物活性成分，主要包括黃酮類化合物、多糖、生物堿、木脂素、揮發(fā)油、萜類化合物及鋅、銅、鈣、錳等微量元素［1-3］?！吨袊幍洹?010 年版［4］收載淫羊藿為小檗科淫羊藿屬的淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭葉淫羊藿 Epimedium sagittatum (Sieb. Et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.或朝鮮淫羊藿Epimedium koreanum Nakai 的干燥葉?，F(xiàn)代藥理研究表明，淫羊藿具有抗勃起功能障礙、抗骨質(zhì)疏松、免疫調(diào)節(jié)、改善心功能、抗腫瘤、抗衰老等作用［5-9］。黃酮類化合物為主要有效成分，其中淫羊藿苷為淫羊藿藥材定性定量的指標［10］。淫羊藿苷溶于乙醇、乙酸乙酯，難溶于水，目前多用乙醇溶液進行提取［11-13］。本課題組前期研究淫羊藿水提取工藝，結(jié)果表明淫羊藿苷提取率較高。本實驗以淫羊藿苷提取率為指標，采用L9(34)正交設(shè)計優(yōu)選淫羊藿醇提取和水提取工藝條件。

1 儀器與材料

1.1 試劑與藥品 藥材購于亳州市萬珍中藥飲片廠，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學劉守金教授鑒定為柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim. 的干燥葉。淫羊藿苷對照品(icariin)，由中國食品藥品檢定研究院提供，批號110737-200415;乙腈為色譜純，其他試劑為分析純，純凈水(娃哈哈飲料有限公司)。

1.2 儀器 LC-15 型高效液相色譜儀(日本島津公司);SPD-M20A 型紫外檢測器(日本島津公司);Cosmosil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。

2 方法與結(jié)果

2.1 淫羊藿苷測定 根據(jù)預試驗方法［14］，對淫羊藿藥材中淫羊藿苷進行定量測定。色譜條件為Cosmosil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);流動相為乙腈-水(30 ∶70);體積流量1 mL /min;柱溫25 ℃;檢測波長270 nm，進樣量20 uL。

2.2 醇提取工藝優(yōu)選 根據(jù)預試驗，淫羊藿藥材吸收約3倍量的乙醇溶液，考慮到淫羊藿藥材比較疏松，故第1 次回流時多加入3 倍乙醇溶液。采用L9(34)正交設(shè)計優(yōu)選淫羊藿的醇提取工藝，試驗安排見表1，試驗結(jié)果見表2，方差分析見表3。

表1 醇提取因素水平

以淫羊藿苷提取率為指標，極差R 表明各影響因素程度為D ＞C ＞A ＞B。方差分析顯示因素A、C、D 均具有顯著性差異。各因素影響趨勢為D3＞D1＞D2，C2＞C1＞C3，A3＞A1＞A2。確定最優(yōu)方案為A3B1C2D3即8 倍量70%乙醇回流提取3 次，每次2 h，第1 次需多加入3 倍70%乙醇。

表2 醇提取正交試驗結(jié)果

表3 醇提取方差分析

2.3 水提取工藝優(yōu)選 第1 次煎煮時多加入3 倍水。采用L9(34)正交設(shè)計優(yōu)選淫羊藿的水提取工藝，試驗安排見表4，試驗結(jié)果見表5，方差分析見表6。

表4 因素水平

表5 水提取正交試驗結(jié)果

表6 水提取方差分析

以淫羊藿苷提取率為指標，極差R 表明各影響因素程度為為C ＞A ＞B。方差分析顯示因素C 具有顯著性差異。各因素影響趨勢:C2＞C3＞C1，A3＞A2＞A1。確定最優(yōu)方案為A3B1C2即8 倍量水煎煮2 次，每次1 h，第1 次需多加入3 倍水。

2.4 驗證試驗 按正交設(shè)計優(yōu)選方案分別對醇提取和水提取工藝進行驗證，結(jié)果見表7。

表7 醇提取與水提取工藝驗證結(jié)果

3 討論

預實驗選擇藥材時，本實驗考察了淫羊藿地上部分(葉)和地下部分(仙靈脾)中淫羊藿苷的分布情況，結(jié)果淫羊藿地下部分(仙靈脾)淫羊藿苷的含量僅為淫羊藿葉的1/8，且遠低于《中國藥典》2010 年版標準，表明淫羊藿苷具有明顯的部位分布選擇性［15］。符合《中國藥典》對淫羊藿部位的要求即:“干燥葉”。淫羊藿雖無“道地藥材”之說，但實際上由于淫羊藿地理分布廣泛，品種較多的緣故，市售淫羊藿藥材的質(zhì)量良莠不齊，控制藥材質(zhì)量成為選擇中藥材的關(guān)鍵。

水煎煮法淫羊藿苷提取率為77.22%，與余曉輝等［16］報道的乙醇回流法基本一致，表明傳統(tǒng)水煎煮法能夠?qū)⒃撍幉挠行С煞殖浞痔崛。瑥亩蔀槠鋫鹘y(tǒng)湯劑發(fā)揮藥效學的基礎(chǔ)。

本實驗中水提取法淫羊藿苷提取率雖低于醇提取法，但提取率仍然較高;兩者出膏率無明顯差別;水提取法溶劑為水，耗時耗材(2 h，水)均明顯低于醇提取(6 h，70%乙醇)，能耗和原料成本較低，為其在工業(yè)化大生產(chǎn)的推廣應(yīng)用提供了一定參考依據(jù)。

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