驢人工授精技術(shù)的研究與應(yīng)用

肖海霞玉山江帕熱哈提江托乎提·阿及德丁 旭

（1.新疆畜牧科學(xué)院畜牧所,新疆烏魯木齊 830000；2.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,新疆石河子 832000；3.新疆昌吉市六公鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,新疆昌吉 831100）

驢人工授精技術(shù)的研究與應(yīng)用

肖海霞1玉山江1帕熱哈提江1托乎提·阿及德*丁 旭3

（1.新疆畜牧科學(xué)院畜牧所,新疆烏魯木齊 830000；2.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,新疆石河子 832000；3.新疆昌吉市六公鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,新疆昌吉 831100）

人工授精技術(shù)作為家畜改良的一項(xiàng)重要的技術(shù)，在牛、羊等畜種已成熟應(yīng)用，并取得了巨大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。但我國驢人工授精的研究工作起步較晚，人工授精技術(shù)因各種原因未能在養(yǎng)驢業(yè)中發(fā)揮相應(yīng)的作用。項(xiàng)目實(shí)施技術(shù)小組通過實(shí)驗(yàn)攻關(guān)，從種公驢人工采精專用假陰道的設(shè)計(jì)、顆粒和細(xì)管凍精制作過程優(yōu)化及冷凍稀釋劑選擇等幾個(gè)方面不斷探索和完善驢精液的冷凍技術(shù)和凍后精液品質(zhì)，使驢冷凍精液保存技術(shù)不斷成熟。結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，為避免雜菌污染，提高受胎率，研制開發(fā)了驢細(xì)管凍精。目前，制作的驢顆粒凍精和細(xì)管凍精活力均達(dá)到0.3以上。通過對(duì)驢精液冷凍保存技術(shù)的研究，打破種公驢使用的時(shí)間和空間的限制，加速品種改良步伐。

1 種公驢人工采精專用假陰道的設(shè)計(jì)

因我國驢的研究工作起步較晚，未有供人工授精中采精所用的必須設(shè)備假陰道，所以，進(jìn)行了假陰道的試制與發(fā)明。經(jīng)多次試驗(yàn)、測量，最終確定了驢專用的假陰道外殼的尺寸：總長：53 cm、上口內(nèi)徑：13.5 cm、下口內(nèi)徑8.5 cm，采用0.8 mm鐵皮委托工廠加工而成。該產(chǎn)品在生產(chǎn)實(shí)際中得到了技術(shù)人員和農(nóng)牧民的認(rèn)可和歡迎。該發(fā)明于2008年11月獲國家實(shí)用新型專利證書。

2 人工采精專用假臺(tái)驢的制作

近年來，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和人們生活水平的提高，人們不只滿足于吃牛、羊、豬、雞等肉食品，對(duì)傳統(tǒng)的驢肉及其副產(chǎn)品也特別感興趣，如，阿膠、驢奶等產(chǎn)品倍受青睞，驢資源的稀缺，說明開發(fā)前景看好，但是，目前良種驢的利用率低，只要是優(yōu)良種公驢數(shù)量少，飼養(yǎng)成本高，自然繁殖力低是制約驢產(chǎn)業(yè)發(fā)展重要的瓶頸。

現(xiàn)有人工授精技術(shù)一般使用假臺(tái)畜作為人工采精輔助工具，假臺(tái)畜是模仿母畜體型高低大小，選用鋼管或木料等做成一個(gè)具有一定支撐力的支架，然后，在架背上鋪以適當(dāng)厚度的竹絨、棉絮或泡沫塑料等有適當(dāng)彈性的填充物，其表面再包裹一層備皮或麻袋、人造革。有的則完全模仿制成如同類母畜的模樣。有的還將假陰道固定安裝在其內(nèi)相應(yīng)部位——假臺(tái)畜的后下部，并可隨意調(diào)節(jié)其角度。在西歐一些國家使用機(jī)械假臺(tái)牛（又稱采精車）采精，采精員坐在椅子上，下設(shè)軌道，可以自動(dòng)進(jìn)退，將假陰道方位角度調(diào)整好后，即可順利地采取公牛精液。教科書等公開了馬、豬等家畜采精用假臺(tái)畜，但對(duì)于驢的人工授精研究和實(shí)踐較少，還未見到假臺(tái)驢的相關(guān)報(bào)告。目前，利用母驢誘惑公驢進(jìn)行人工采精的方法存在公驢射精不充分，射精量不穩(wěn)定；人畜不安全，采精人員的勞動(dòng)強(qiáng)度大以及公母驢直接接觸，有疾病傳播的風(fēng)險(xiǎn)，因此，假臺(tái)驢的應(yīng)用可以有效地規(guī)避風(fēng)險(xiǎn)。課題組經(jīng)多次試驗(yàn)、測量，設(shè)計(jì)了人工采精專用假臺(tái)驢，該發(fā)明于2014年9月11日獲國家實(shí)用新型專利授權(quán)。

3 驢人工授精技術(shù)

3.1 凍精顆粒的制作

為提高優(yōu)良種畜的利用率，加快品種改良和選育的進(jìn)程，進(jìn)行了驢凍精顆粒的制作和生產(chǎn)應(yīng)用。制作過程如下：

3.1.1 原精液的處理

原精液用等溫的緩沖液按1∶1的比例稀釋。

3.1.2 精液濃縮與稀釋

將稀釋后的精液分裝進(jìn)行離心處理，制成精子粥，再按照1∶1的比例用“三糖”血清液稀釋。

3.1.3 平衡

置于6℃～8℃，保持25～30 min。

3.1.4 滴凍

在降溫的鋁板上滴成0.5 ml的顆粒，置于液氮面1 cm處5 min，之后投入液氮中保存。

3.1.5 解凍

將凍精顆粒投入到升溫到40℃的解凍液中，復(fù)蘇10 min后，鏡檢0.3級(jí)以上即可輸精。

3.2 細(xì)管凍精的制作

3.2.1 原精液的處理

原精液用等溫的緩沖液按1：1的比例稀釋。

3.2.2 精液濃縮與稀釋

將稀釋后的精液分裝進(jìn)行離心處理，制成精子粥，稀釋液為I液和Ⅱ液。

I液：基礎(chǔ)液加入一定量的卵黃和抗生素配制而成，用作精液第一次稀釋。

Ⅱ液：Ⅱ液中加入甘油等抗凍劑，配制而成用作精液第2次稀釋。

3.2.3 平衡

加入I液置于3℃～4℃，保持2～3 h。加入Ⅱ液置于3℃～4℃，保持2～2.5 h。

3.2.4 冷凍

精液吸入0.5 ml細(xì)管封口后，置于液氮面3 cm處8 min，之后投入液氮中保存。

3.2.5 解凍

將細(xì)管凍精放入39℃水浴15 s，鏡檢0.3級(jí)以上即可輸精。

3.3 人工授精技術(shù)的研究和應(yīng)用

3.3.1 人工授精程序

包括采精、精液稀釋、精液分裝、精液保存、檢查、輸精等基本環(huán)節(jié)。

3.3.1.1 直腸檢查

通過直腸檢查，觸摸卵巢來確定母驢的發(fā)情配種適期。

3.3.1.2 采精

①臺(tái)驢的選擇與保定：選擇處在發(fā)情期，體格健壯、溫順、經(jīng)產(chǎn)母驢。將選定好的臺(tái)驢保定在采精欄旁。②假陰道的準(zhǔn)備：安裝好假陰道，先用75%酒精消毒內(nèi)胎及集精杯，待揮發(fā)后，再用稀釋液沖洗。灌入1 500～2 000 ml的42℃的溫水，使假陰道內(nèi)壁溫度保持在39℃～41℃。吹氣加壓，使內(nèi)胎縮成三角形為宜。用玻璃棒蘸潤滑劑抹至假陰道內(nèi)壁的前1/3。③清洗公驢外生殖器：用軟毛巾蘸溫水清洗種公驢外生殖器。④采精：采精員站在臺(tái)畜右側(cè)，右手握采精筒，待種公驢陰莖勃起，爬上臺(tái)驢后，順勢輕托公驢陰莖，導(dǎo)入假陰道。公驢射精后，立即將假陰道的氣孔打開，慢慢放氣，假陰道隨即逐漸豎起，使全部精液流入集精杯內(nèi)，以紗布封口，送到精液處理室。

3.3.1.3 精液檢查

①肉眼觀察：精液用四層紗布過濾到集精杯內(nèi)，以便除去膠質(zhì)，隨即用肉眼觀察，如發(fā)現(xiàn)異常色要分析原因，停止使用。同時(shí)記錄射精量。②鏡檢：用顯微鏡觀察精子活力，并計(jì)算密度和畸形鏡子數(shù)，同時(shí)分別記錄。

3.3.1.4 輸精

將受配母驢保定，對(duì)外陰部消毒后，再用煮沸涼溫水沖洗，并用消毒紗布擦干。輸精時(shí)，輸精員站在母畜后方偏左側(cè)，右手握輸精膠管，五指形成錐形，緩慢插入母畜陰道內(nèi)，快速握住子宮頸，將精液膠管插入子宮頸口內(nèi)，輕緩注入精液。然后緩慢抽出輸精膠管，并用手指輕輕按捏子宮頸外口以刺激子宮頸收縮，防止精液外流。經(jīng)多次觀察、試驗(yàn)，驢的最佳輸精時(shí)間為有發(fā)情表現(xiàn)后24～48h。

在烏拉泊科創(chuàng)畜牧繁育中心和項(xiàng)目區(qū)色也克鄉(xiāng)、策勒鄉(xiāng)建立了種公驢凍精實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行凍精顆粒的制作，共計(jì)制作2.16萬劑凍精，在喀什、和田等地進(jìn)行推廣。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，人工授精較自然交配，其繁殖受胎率提高10%，驢人工授精技術(shù)在新疆首次成功應(yīng)用，極大地促進(jìn)了土種驢的良種化進(jìn)程。

3.3.2 技術(shù)要點(diǎn)

3.3.2.1 發(fā)情鑒定

在季節(jié)性多次發(fā)情家畜中，驢由于受生殖激素的作用和神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)出現(xiàn)周期性發(fā)情。與牛不同的是在激素類型上是屬于促卵泡素（FSH）占優(yōu)勢的類型，所以發(fā)情期較長，間情期較短。因此驢的發(fā)情鑒定較牛、羊、豬等難掌握。為確保適時(shí)配種時(shí)機(jī)和減少配種次數(shù)，提高母驢的受胎率，掌握發(fā)情鑒定技術(shù)尤為重要。母驢的發(fā)情鑒定以直腸檢查為主，結(jié)合試情法、外部觀察法和陰道檢查確定適宜的配種時(shí)間。

3.3.2.2 適時(shí)輸精

驢的發(fā)情季節(jié)多在2～8月份，以5、6月份居多。發(fā)情周期為22～25 d，每次發(fā)情持續(xù)7～14 d，排卵多在發(fā)情的第7～10 d內(nèi)，而常于發(fā)情停止前的12～24 h排卵，給母驢配種應(yīng)在排卵前1～36 h進(jìn)行。

3.3.3 注意事項(xiàng)

3.3.3.1 輸精注意事項(xiàng)

①輸精部位應(yīng)在子宮體或子宮角基部為宜，不要過深，一般輸精管插入子宮頸口5～7 cm為好。

②輸精量為15～20 ml，但要保證輸入有效精子數(shù)為2億～5億個(gè)。

③輸精速度要慢，以防精液倒流。注射器內(nèi)不要混入空氣，防止感染。發(fā)現(xiàn)精液倒流時(shí)，可用手捏住宮頸，輕輕按摩，促使子宮收縮，或輕壓背腰部，使其伸展，并牽行運(yùn)動(dòng)。

3.3.3.2 為避免疾病的傳播，應(yīng)使用一次性輸精器材。

國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（201003075）、自治區(qū)科技興新項(xiàng)目（2011039A13）、自治區(qū)重大專項(xiàng)項(xiàng)目（201230116—8）、自治區(qū)高新項(xiàng)目（201411106）。

肖海霞（1975.11—），女，副研究員，在職博士，主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖的研究。

托乎提·阿及德，研究員。