閆慧嬌，趙 偉，耿巖玲，王岱杰，劉建華，王 曉*

1山東省中藥質(zhì)量控制技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(籌)山東省分析測試中心;2 山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，濟(jì)南 250014

牡丹(Paeonia suffruticosaAndr.)屬毛茛科芍藥屬灌木，為中國特有名貴觀賞花卉和藥用植物。其根皮，又稱牡丹皮、丹皮，是一味應(yīng)用廣泛的傳統(tǒng)中藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》列為中品，具有清熱涼血，活血化瘀之功效，現(xiàn)代研究證明其在臨床治療中可起到止痛，止痙攣，抗凝和抗氧化等作用［1-3］。牡丹花作為特色的天然生物資源和新資源食品，在我國有悠久的藥用和食用歷史，《四川中藥志》載:牡丹花性平、苦、淡，具有調(diào)經(jīng)活血的功能，主治月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)。前期研究證明，牡丹花花瓣富含黃酮類化合物［4，5］，但系統(tǒng)的化學(xué)成分研究報(bào)道較少。為了進(jìn)一步利用牡丹花資源，我們對牡丹花的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離，從中的到7 個(gè)單萜糖苷類化合物，分別為吡啶芍藥苷(1)、paeodanin B(2)、芍藥新苷(3)、乙酰芍藥苷(4)、芍藥苷(5)、苯甲酰芍藥苷(6)和氧化芍藥苷(7)，及2 個(gè)酚酸類化合物，分別為沒食子酸(8)和沒食子酸甲酯(9)?；衔?～7 均首次從牡丹花中分離得到，這是第一次從牡丹花瓣中分離得到芍藥苷單萜糖苷類化合物。

1 儀器與材料

Varian INOVA-400 型核磁共振波譜儀(美國Varian 公司，以TMS 為內(nèi)標(biāo));Agilent5973 型質(zhì)譜儀(美國Agilent 公司);島津1200 分析型高效液相(日本島津公司);島津LC 6AD 制備型高效液相(日本島津公司，色譜柱為Shim-park RP-C18column，200 ×20 mm)。柱色譜用C18填料(日本YMC 公司);Sephadex LH-20(Amersham Biosciences 公司);柱色譜用硅膠(200～300 目)以及G254硅膠薄層板(青島海洋化工);乙醇(分析純，德州恒業(yè)化工有限公司);甲醇、二氯甲烷，分析純(天津市化學(xué)試劑廠);甲醇、乙腈(色譜純，山東禹王試劑有限公司)。

牡丹花采自山東菏澤，經(jīng)鑒定為毛茛科芍藥屬植物牡丹(Paeonia suffruticosaAndr.)的花。

2 提取與分離

取干燥后的牡丹花瓣3.0 kg，粉碎后于70%乙醇中60 ℃溫浸三次，每次4 h，合并提取液，減壓濃縮至無醇味。浸膏分散于水中(1 L)成懸濁液，用乙酸乙酯萃取三次(3 × 1 L)，得乙酸乙酯萃取物20 g。乙酸乙酯部分采用硅膠常壓柱，以二氯甲烷-甲醇(50∶1～2∶1)梯度洗脫，分段收集，其中二氯甲烷-甲醇(20∶1～10∶1)段經(jīng)TLC 檢測后分為A-C 三個(gè)組分。組分A(二氯甲烷-甲醇20∶1 段)經(jīng)常壓反相C-18 柱甲醇-水梯度洗脫(5%到70%甲醇)得5個(gè)組分(Fr.A1-A5)。Fr.A1(10%甲醇洗脫部位)經(jīng)過制備液相得到化合物9(5.0 mg)，F(xiàn)r.A3(50%甲醇洗脫部位)經(jīng)過制備液相得到化合物3(7.0 mg)和4(6.0 mg)，F(xiàn)r.A5(70%甲醇洗脫部位)經(jīng)過制備液相得到化合物6(32.0 mg)。組分B(二氯甲烷:甲醇15∶1 段)經(jīng)常壓反相C-18 柱甲醇-水梯度洗脫(5%到70%甲醇)分為5 個(gè)組分(Fr.B1-B5)。Fr.B2(30% 甲醇洗脫部位)經(jīng)過Sephadex LH-20(甲醇)得化合物5(60.0 mg)，F(xiàn)r.B3(50%甲醇洗脫部位)經(jīng)過制備液相得化合物2(8.0 mg)。組分C(二氯甲烷∶甲醇10∶1 段)經(jīng)常壓反相C-18 柱甲醇-水梯度洗脫(5% 到70% 甲醇)得到3 個(gè)組分(Fr.C1-C3)。Fr.C1(10% 甲醇洗脫部位)經(jīng)過Sephadex LH-20(甲醇)得化合物8(21.0 mg)，F(xiàn)r.C2 經(jīng)過Sephadex LH-20(甲醇)，后經(jīng)制備液相得化合物1(4.0 mg)和化合物7(14.0 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:482［M+H］+;1H NMR (DMSO，400MHz):δH2.05(1H，d，J=12.0 Hz，H-3a)，1.65 (1H，d，J=12.0 Hz，H-3b)，2.47 (1H，d，J=6.4 Hz，H-5)，2.37(1H，dd，J=10.6，6.8 Hz，H-7a)，1.82 (1H，d，J=10.6 Hz，H-7b)，4.66 (2H，d，J=15.6 Hz，H-8)，5.35 (1H，s，H-9)，1.24 (3H，s，H-10)，4.37 (1H，d，J=7.7 Hz，H-1')，2.97 (1H，m，H-2')，2.98(1H，m，H-4')，3.07 (2H，m，H-3'，5')，3.65 (1H，m，H-6'a)，3.35 (1H，m，H-6'b)，9.12 (1H，d，J=1.5 Hz，H-2'')，8.31 (1H，dt，J=7.9，1.8 Hz，H-4'')，7.60 (1H，dd，J=7.9，4.8 Hz，H-5'')，8.84(1H，dd，J=4.8，1.5 Hz，H-6'');13C NMR (DMSO，100MHz):δC88.0 (C-1)，85.4 (C-2)，44.0 (C-3)，105.2 (C-4)，42.7 (C-5)，70.7 (C-6)，22.4 (C-7)，61.4 (C-8)，100.4 (C-9)，19.6 (C-10)，99.1(C-1')，73.9 (C-2')，77.4 (C-3')，70.3 (C-4')，77.4 (C-5')，61.7 (C-6')，154.2 (C-2'')，126.1(C-3'')，137.4 (C-4'')，124.4 (C-5'')，150.6 (C-6'')，165.1 (C-7'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為吡啶芍藥苷。

化合物2 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:495［M+H］+;1H NMR (DMSO，400 MHz):δH2.89(1H，d，J=18.0 Hz，H-3a)，2.34 (1H，d，J=18.0 Hz，H-3b)，3.04 (1H，m，H-5)，3.00 (1H，m，H-7a)，2.10 (1H，d，J=10.6 Hz，H-7b)，4.68 (2H，m，H-8)，5.02 (1H，s，H-9)，1.33 (3H，s，H-10)，4.45 (1H，d，J=8.0 Hz，H-1')，3.66 (1H，d，J=11.0 Hz，H-6'a)，3.08-3.46 (5H，m，H-2'-6'b)，7.96(2H，d，J=7.5 Hz，H-2''，6'')，7.55 (2H，t，J=7.5 Hz，H-3''，5'')，7.68 (1H，t，J=7.0 Hz，H-4'')，3.20 (3H，s，9-OMe);13C NMR (DMSO，100 MHz):δC87.2 (C-1)，86.3 (C-2)，48.9 (C-3)，205.7 (C-4)，47.0 (C-5)，63.2(C-6)，26.3 (C-7)，63.2 (C-8)，106.3 (C-9)，20.6 (C-10)，98.9 (C-1')，73.9(C-2')，77.5 (C-3')，70.7 (C-4')，77.3 (C-5')，61.7 (C-6')，130.1 (C-1'')，129.7 (C-2''，6'')，129.3 (C-3''，C-5'')，133.9 (C-4'')，166.2 (C-7'')。以上波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］對照基本一致，故鑒定為paeodanin B。

化合物3 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:463［M+H］+;1H NMR (DMSO，400MHz):δH2.77(1H，m，H-3a)，2.45 (1H，d，J=18.0 Hz，H-3b)，2.78 (1H，m，H-5)，2.38 (1H，t，J=13.0 Hz，H-7a)，2.08 (1H，d，J=13.0，4.0 Hz，H-7b)，4.71(2H，s，H-8)，4.84 (1H，s，H-9)，1.40 (3H，s，H-10)，4.49 (1H，d，J=7.6 Hz，H-1')，3.14 (3H，s，H-3'，4'，5')，3.63 (1H，d，J=10.2 Hz，H-6'a)，3.43 (1H，d，J=10.2 Hz，H-6'b)，7.99 (2H，d，J=8.0 Hz，H-2''，6'')，7.56 (2H，t，J=7.2 Hz，H-3''，5'')，7.68 (1H，t，J=7.2 Hz，H-4'');13C NMR(DMSO，100 MHz):δC85.2 (C-1)，102.8 (C-2)，44.6 (C-3)，217.1 (C-4)，37.4 (C-5)，55.4 (C-6)，30.6 (C-7)，62.7 (C-8)，80.0 (C-9)，16.5 (C-10)，95.2 (C-1')，75.4 (C-2')，79.5 (C-3')，70.6(C-4')，73.2 (C-5')，61.2 (C-6')，129.7 (C-1'')，129.7 (C-2''，6'')，129.4 (C-3''，C-5'')，134.1 (C-4'')，166.0 (C-7'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為芍藥新苷。

化合物4 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:523［M+H］+;1H NMR (DMSO，400MHz):δH1.95(1H，d，J=12.5 Hz，H-3a)，1.67 (1H，d，J=12.5 Hz，H-3b)，2.44 (1H，d，J=6.0 Hz，H-5)，2.41(1H，m，H-7a)，1.70 (1H，d，J=10.6 Hz，H-7b)，4.63 (2H，d，J=12.0 Hz，H-8)，5.34 (1H，s，H-9)，1.20 (3H，s，H-10)，4.42 (1H，d，J=7.4 Hz，H-1')，4.28 (1H，d，J=10.5 Hz，H-6'a)，4.02 (1H，dd，J=10.5，7.5 Hz，H-6'b)，2.95-3.18 (5H，m，H-2'-5')，7.99 (2H，d，J=7.5 Hz，H-2''，6'')，7.56(2H，t，J=7.0 Hz，H-3''，5'')，7.68 (1H，t，J=7.5 Hz，H-4'')，2.01 (3H，s，H-COCH3);13C NMR (DMSO，100MHz):δC88.1 (C-1)，85.2 (C-2)，44.1 (C-3)，105.1 (C-4)，42.7 (C-5)，70.7 (C-6)，22.3(C-7)，60.8 (C-8)，100.5 (C-9)，19.4 (C-10)，99.0 (C-1')，74.0 (C-2')，77.0 (C-3')，70.3 (C-4')，73.8 (C-5')，64.0 (C-6')，130.1 (C-1'')，129.7 (C-2''，6'')，129.2 (C-3''，C-5'')，133.9 (C-4'')，166.2 (C-7'')，170.6 (COCH3)，21.1(COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為乙酰芍藥苷。

化合物5 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:481［M+H］+;1H NMR (DMSO，400MHz):δH2.05(1H，d，J=12.0 Hz，H-3a)，1.66 (1H，d，J=12.0 Hz，H-3b)，2.45 (1H，d，J=6.0 Hz，H-5)，2.38(1H，dd，J=10.6，6.5 Hz，H-7a)，1.82 (1H，d，J=10.6 Hz，H-7b)，4.65 (2H，d，J=12.4 Hz，H-8)，5.33 (1H，s，H-9)，1.25 (3H，s，H-10)，4.39 (1H，d，J=6.4 Hz，H-1')，3.66 (1H，m，H-6'a)，3.18-3.45 (5H，m，H-2'-6'b)，7.99 (2H，d，J=8.0 Hz，H-2''，6'')，7.55 (2H，t，J=7.2 Hz，H-3''，5'')，7.67 (1H，t，J=6.8 Hz，H-4'');13C NMR (DMSO，100 MHz):δC87.5 (C-1)，85.0 (C-2)，43.6 (C-3)，104.8 (C-4)，42.3 (C-5)，70.3 (C-6)，22.0 (C-7)，60.5 (C-8)，100.1 (C-9)，19.1 (C-10)，98.6(C-1')，74.5 (C-2')，76.9 (C-3')，70.0 (C-4')，76.9 (C-5')，61.2 (C-6')，129.7 (C-1'')，129.3(C-2''，6'')，128.8 (C-3''，C-5'')，133.5 (C-4'')，165.8 (C-7'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為芍藥苷。

化合物6 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:585［M+H］+;1H NMR (DMSO，400 MHz):δH1.70(1H，d，J=12.5 Hz，H-3a)，1.56 (1H，m，H-3b)，2.39 (1H，m，H-5)，2.39 (1H，m，H-7a)，1.56 (1H，m，H-7b)，4.62 (2H，d，J=9.0 Hz，H-8)，5.31(1H，s，H-9)，1.14 (3H，s，H-10)，4.47 (1H，d，J=7.5 Hz，H-1')，3.50 (1H，t，J=8.0 Hz，H-6'a)，3.00-3.25 (6H，m，H-2'-6'b)，7.98 (4H，d，J=7.2 Hz，H-2''，6''，2'''，6''')，7.56 (2H，d，J=8.0 Hz，H-3''，5'')，7.51 (2H，d，J=8.0 Hz，H-3'''，5''')，7.66 (2H，m，H-4''，4''');13C NMR (DMSO，100 MHz):δC88.1 (C-1)，85.2 (C-2)，43.9 (C-3)，105.0 (C-4)，42.6 (C-5)，70.2 (C-6)，22.0 (C-7)，60.8 (C-8)，100.4 (C-9)，19.4 (C-10)，99.0(C-1')，74.0 (C-2')，77.0 (C-3')，70.2 (C-4')，73.8 (C-5')，64.7 (C-6')，130.2 (C-1'')，129.7(C-2''，6'')，129.2 (C-3''，C-5'')，133.9 (C-4'')，166.2 (C-7'')，130.1 (C-1''')，129.5 (C-2'''，6''')，129.2 (C-3'''，C-5''')，133.9 (C-4''')，165.9(C-7''')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為苯甲酰芍藥苷。

化合物7 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:497［M+H］+;1H NMR (DMSO，400 MHz):δH2.04(1H，d，J=12.0 Hz，H-3a)，1.64 (1H，d，J=12.5 Hz，H-3b)，2.42 (1H，d，J=4.0 Hz，H-5)，2.35(1H，m，H-7a)，1.80 (1H，d，J=10.4 Hz，H-7b)，4.58 (2H，s，H-8)，5.29 (1H，s，H-9)，1.24 (3H，s，H-10)，4.39 (1H，d，J=8.0 Hz，H-1')，3.66 (1H，d，J=11.5 Hz，H-6'a)，2.95-3.17 (6H，m，H-2'-6'b)，7.84 (2H，d，J=8.0 Hz，H-2''，6'')，6.87 (2H，d，J=8.0 Hz，H-3''，5'');13C NMR (DMSO，100 MHz):δC87.9 (C-1)，85.4 (C-2)，44.1 (C-3)，105.2 (C-4)，42.8 (C-5)，70.7 (C-6)，22.5 (C-7)，60.2 (C-8)，100.6 (C-9)，19.6 (C-10)，99.1(C-1')，74.0 (C-2')，77.4 (C-3')，70.5 (C-4')，77.4 (C-5')，61.7 (C-6')，120.6 (C-1'')，132.0(C-2''，6'')，115.8 (C-3''，C-5'')，162.7(C-4'')，166.1(C-7'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為氧化芍藥苷。

化合物8 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:171［M+H］+;1H NMR (DMSO，400 MHz):δH6.92(2H，s，H-2，6)，9.31 (3H，brs，OH);13C NMR (DMSO，100 MHz):δC121.2 (C-1)，109.2 (C-2)，145.9(C-3)，138.4 (C-4)，145.9 (C-5)，109.2 (C-6)，168.1 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為沒食子酸。

化合物9 白色粉末(甲醇)，ESI-MSm/z:185［M+H］+.1H NMR (DMSO，400 MHz):δH6.96(2H，s，H-2，6)，3.76 (3H，s，Me)，9.18 (3H，brs，OH);13C NMR (DMSO，100 MHz):δC119.8 (C-1)，109.0 (C-2)，146.1 (C-3)，138.9 (C-4)，146.1 (C-5)，109.0 (C-6)，166.8 (C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］報(bào)道對照基本一致，故鑒定化合物為沒食子酸甲酯。

4 結(jié)果與討論

芍藥屬植物含有豐富的芍藥苷類單萜化合物。在傳統(tǒng)的牡丹產(chǎn)業(yè)中，大量的牡丹花被丟棄在田間地頭，造成巨大的資源浪費(fèi)。牡丹根皮是一味應(yīng)用廣泛的珍貴藥材，作為丹皮中的主要成分之一，芍藥苷類化合物在丹皮的藥理活性中發(fā)揮很大的作用。一直以來，牡丹花的研究都集中在黃酮類化合物的提取和分離上，我們的研究證明，牡丹花中除了含有黃酮類之外，同樣含有豐富的芍藥苷單萜糖苷類化合物，或?yàn)榻忉屇档せㄉ锘钚晕镔|(zhì)基礎(chǔ)及牡丹花資源開發(fā)和高值化利用提供參考。

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