腎陰虛證的代謝組學(xué)研究

王 彬，韓永龍

上海市第六人民醫(yī)院，上海 200233

腎陰虛證的代謝組學(xué)研究

王 彬，韓永龍△

上海市第六人民醫(yī)院，上海 200233

從腎陰虛機(jī)理研究現(xiàn)狀及成就探討代謝組學(xué)在腎陰虛研究中的意義，為多角度、多視角進(jìn)一步認(rèn)識(shí)腎陰虛的本質(zhì)提供了重要的方法基礎(chǔ)和技術(shù)條件。

腎陰虛；代謝組學(xué)；研究進(jìn)展

中醫(yī)認(rèn)為腎在人體是一個(gè)極其重要而又包涵多種功能的臟器，內(nèi)藏元陰元陽(腎之陰陽的別稱)為水火之宅，是先天之本，生命之根。腎陰是一身陰氣之本，具有滋養(yǎng)全身臟腑陰氣的作用，“五臟之陰氣，非此不能滋”，腎陰充足，則全身臟腑之陰皆充足。腎陰虧虛則可導(dǎo)致全身臟腑之陰亦虛。而任何臟腑陰陽的偏衰，日久也會(huì)累及腎之陰陽，導(dǎo)致腎之陰陽的不足。近年來，在中醫(yī)證候?qū)嵸|(zhì)研究中已初步證實(shí)腎陰虛證具有現(xiàn)代病理生理學(xué)基礎(chǔ)。本文對腎陰虛臨床表現(xiàn)、研究機(jī)制及研究方法等進(jìn)行總結(jié)歸納。

1 腎陰虛的癥狀表現(xiàn)

腎陰虛證為中醫(yī)學(xué)的基本證型之一，臨床主要表現(xiàn)為干咳少痰、短氣喘息、口燥咽干、五心煩熱、潮熱盜汗、頭暈耳鳴、眩暈?zāi)繚?、牙齒松動(dòng)或疼痛、腰膝酸痛、失眠多夢、遺精早泄、性欲亢進(jìn)、顴紅目赤、大便干結(jié)、小便短少等癥狀，在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中常見于糖尿病，急、慢性腎炎，高血壓病、結(jié)核病、骨質(zhì)疏松癥、甲狀腺功能亢進(jìn)等病。腎陰為命門之水，滋養(yǎng)機(jī)體五臟六腑之陰，調(diào)補(bǔ)腎陰可能通過改善神經(jīng)內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)從而對各系統(tǒng)疾病發(fā)揮治療作用。

2 腎陰虛的機(jī)制研究

眾多學(xué)者運(yùn)用現(xiàn)代技術(shù)和方法對腎陰虛證本質(zhì)進(jìn)行研究，現(xiàn)從神經(jīng)-內(nèi)分泌、免疫、微量元素和骨密度、血液流變學(xué)、能量代謝等生化方面闡釋腎陰虛的發(fā)生機(jī)制及其科學(xué)性，為腎陰虛證的客觀指標(biāo)評(píng)價(jià)提供參考。

2.1 神經(jīng)-內(nèi)分泌 腎陰虛與激素和神經(jīng)肽的關(guān)系是眾多學(xué)者研究的焦點(diǎn)，研究成果形成了較為一致的結(jié)論［1］：1)下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸-胸腺(HP A T)軸上基因組的改變；2)下丘腦-垂體-甲狀腺軸功能的亢進(jìn)；3)下丘腦-垂體-性腺軸呈現(xiàn)出紊亂狀態(tài)。有報(bào)道慢性胃炎腎陰虛證型患者尿中17-羥類固醇(17-O H C S)含量顯著低于正常人［2］；肝腎陰虛證血清中下丘腦TR H、T3、T4分泌增加，游離三碘甲腺原氨酸(F T3)、游離四碘甲腺原氨酸(F T4)、垂體促甲狀腺素(T S H)和血清T S H、血漿內(nèi)啡肽都降低［3-5］；原發(fā)性骨質(zhì)疏松腎陰虛證中，女性患者性激素睪酮、T/E2升高、雌二醇逐漸降低，而男性患者正好相反［6-7］；狼瘡性腎炎腎陰虛證患者男女2組E2、黃體生成素及F S H均較對照組升高［8］；左旋單鈉谷氨酸大鼠血漿C O RT、A C T H和下丘腦C R H含量明顯升高，下丘腦單胺類遞質(zhì)中多巴胺、去甲腎上腺素等含量顯著降低［9］。

2.2 免疫功能 陰虛影響免疫功能，研究表明陰虛陽盛患者機(jī)體的免疫功能下降，I g M、I g G顯著升高［10］，出現(xiàn)各種類型的免疫缺陷病或容易產(chǎn)生自身免疫性疾病。陳小鋒等［11］采用酶聯(lián)免疫法測定腎虛患者的血清，發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素-2(I L-2)低于正常對照組，而白細(xì)胞介素-6(I L-6)高于正常對照組；徐俊等［12］運(yùn)用紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)實(shí)驗(yàn)和125I標(biāo)記的方法，檢測了67例腎虛患者的紅細(xì)胞免疫功能和補(bǔ)體C R A，顯示腎虛患者紅細(xì)胞免疫功能和補(bǔ)體C R A均降低。

2.3 微量元素、骨密度 研究發(fā)現(xiàn)［13］腎陰虛證患者血漿中鋅銅含量均較同齡健康組明顯升高，說明鋅銅含量同時(shí)升高是腎陰虛的辨證指標(biāo)之一；朱秀英等［14］的陰虛小白鼠實(shí)驗(yàn)也支持此觀點(diǎn)。郭金瑞等［15］發(fā)現(xiàn)腎陰虛患者唾液中K+濃度高于正常人，Na+濃度明顯低于正常人，腎陰虛證患者Na+/K+明顯低于正常人。相關(guān)研究［16］檢測了319例青少年屈光不正患者頭發(fā)中微量元素含量，發(fā)現(xiàn)肝腎陰虛者占51.40%，多與缺鈣相關(guān)；原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥也表現(xiàn)腎陰虛癥狀，腎虛證骨密度明顯低于正常值，趙詠芳指出［17］應(yīng)按“腎主骨”的理論論治；也有研究提示［18］腎陰虛患者骨密度較腎陽虛、腎氣虛低，較正常人更低。

2.4 血液流變學(xué) “腎虛則精虧”“精血同源”，腎陰虛起初表現(xiàn)為紅細(xì)胞變形能力減弱，隨之出現(xiàn)腎虛衰退表現(xiàn)。血液屬陰，腎陰虛則化生血液功能失常。研究發(fā)現(xiàn)腎陰虛患者紅細(xì)胞變形能力受到嚴(yán)重?fù)p傷［19］；腎陰虛證患者紅細(xì)胞變形指數(shù)明顯低于正常人［15］。

2.5 能量代謝 能量代謝是生物體內(nèi)物質(zhì)代謝過程中所伴隨的能量釋放、轉(zhuǎn)移和利用等的變化反應(yīng)。腎陰虛影響能量代謝，從代謝產(chǎn)物中反向分析疾病或藥物對機(jī)體的作用機(jī)制。腎陰虛證患者［20］血清中異檸檬酸脫氫酶活性明顯升高，乳酸脫氫酶活性明顯降低，此結(jié)果吻合了中醫(yī)理論“陰虛生內(nèi)熱”的理論，腎陰虛證患者有氧代謝增強(qiáng)、無氧酵解反應(yīng)減弱、機(jī)體能量代謝增加。朱方石［22］研究發(fā)現(xiàn)腎陰虛證患者血清T G、LDL-C h含量升高，紅細(xì)胞和血漿超氧化物歧化酶、全血谷胱甘肽過氧化物酶活力降低，而血中丙二醛含量升高，進(jìn)一步證明腎陰虛者機(jī)體抗氧化能力減弱；肝腎陰虛型肝硬化患者血清總蛋白、白蛋白及白球蛋白比例顯著低于正常人［22］。腎陰虛與腎氣虛、腎陽虛、脾虛證組比較，顯示腎陰虛證組患者甘油三酯、膽固醇、收縮壓、舒張壓、脈壓差、平均動(dòng)脈壓增高最顯著，高密度脂蛋白膽固醇降低顯著［23］。王彬等［24］研究甲亢陰虛大鼠尿液發(fā)現(xiàn)大鼠體內(nèi)三羧酸循環(huán)發(fā)生障礙，糖、脂質(zhì)、氨基酸等物質(zhì)能量代謝出現(xiàn)紊亂。

3 腎陰虛代謝組學(xué)研究成果

代謝組學(xué)是20世紀(jì)90年代中期發(fā)展起來的一門新興學(xué)科，在生命活動(dòng)的動(dòng)態(tài)過程中，搜集代謝產(chǎn)物的變化資料，考察生物體受刺激或擾動(dòng)后其代謝產(chǎn)物的變化規(guī)律，從而揭示機(jī)體生命活動(dòng)本質(zhì)。代謝組學(xué)采用全面、系統(tǒng)的研究方法，與中醫(yī)“整體觀念”思想和“司外揣內(nèi)”思維模式有諸多相通之處，可實(shí)現(xiàn)中醫(yī)藥生物效應(yīng)的整體性和動(dòng)態(tài)性評(píng)價(jià)［25］。很多研究工作人員將代謝物組學(xué)方法引入腎陰虛證的現(xiàn)代研究，根據(jù)腎陰虛證目前研究進(jìn)展和存在的問題，著重從動(dòng)物模型著手，選用病證結(jié)合的動(dòng)物模型，采用的技術(shù)有色譜［26］、質(zhì)譜［27］、核磁共振［28］、毛細(xì)管電泳［29］、紅外光譜［30］對血樣或尿樣等代謝產(chǎn)物進(jìn)行檢測(最常用NM R和L C-M S方法)，根據(jù)代謝產(chǎn)物標(biāo)記物(b i om a r k e rs)了解和發(fā)現(xiàn)代謝產(chǎn)物變化與臟腑生理、病理的相互關(guān)系，使治療腎陰虛的中藥或中成藥的整體性作用機(jī)制和療效得到充分的展示和“挖掘”［31］。

3.1 NMR方法的應(yīng)用及其成果 NM R方法對于樣品的前處理較為簡單和便捷，分析時(shí)間周期短，無損傷，不破壞樣品的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，能完成代謝產(chǎn)物中大多數(shù)化合物的檢測，能滿足代謝組學(xué)對盡可能多的化合物進(jìn)行檢測的目的［32］。高崗［33］采用NM R方法對氫化可的松導(dǎo)致的腎陰虛模型大鼠尿液分析發(fā)現(xiàn)肌氨酸酐、琥珀酸含量升高，二甲胺、天冬氨酸、牛黃酸、馬尿酸含量降低；對其血漿分析發(fā)現(xiàn)乳酸、醋酸、丙酮、膽堿、酪氨酸含量升高，琥珀酸、檸檬酸、甲酸含量降低。李英帥［34］采用NM R研究陰虛體質(zhì)患者的尿液，其中尿肌酰、二甲胺、檸檬酸、氧化三甲胺濃度降低，甘氨酸，葡萄糖濃度升高；血漿中乳酸、丙氨酸、葡萄糖、脂類化合物濃度降低。

3.2 LC-MS方法的應(yīng)用及其成果 L C-M S技術(shù)法具有更低的檢測限，更高的靈敏度，適合于生物樣本中復(fù)雜代謝產(chǎn)物的檢測和潛在標(biāo)記物的鑒定，對含量低的代謝產(chǎn)物研究具有獨(dú)特優(yōu)勢，被越來越多地用于代謝組學(xué)研究［35-36］。高崗［33］采用L C-Q T O F-M S分析手段對氫化可的松導(dǎo)致大鼠腎陰虛模型進(jìn)行研究，根據(jù)化合物的準(zhǔn)確質(zhì)量數(shù)在H M D B，K E GG，M E T L IN，L I P I D M A P S，P u b C h e m等數(shù)據(jù)庫中查詢可能的化合物結(jié)構(gòu)，對標(biāo)記物進(jìn)行分析。尋找到馬尿酸、色胺酸、N1-Met h y l-2-p yr i do n e-5-c a rbo x a mi d e(C7H8N2O2)、芥子醇等4種標(biāo)志物。采用相同方法對血漿研究尋找到1-棕櫚酰-s n-甘油-3-磷酸膽堿，L yso P C［18∶1(9Z)］兩種脂類標(biāo)志物。

綜上所述，代謝組學(xué)研究從整體角度對腎陰虛的生物特征進(jìn)行了探索，腎陰虛與機(jī)體的各項(xiàng)活動(dòng)有密切關(guān)系，影響了人體生物功能的調(diào)節(jié)，使代謝產(chǎn)物發(fā)生潛移默化的變化，尋找腎陰虛的指標(biāo)性物質(zhì)對腎陰虛的治療也有一定的重要意義。

［1］ 沈自尹,陳瑜,黃建華,等.以藥測證繪制腎虛證兩大基因網(wǎng)絡(luò)調(diào)控路線圖譜［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,26（6)：521-525.

［2］ 祁建生,黃恒清,吳作干,等.慢性胃炎女性患者腎陰虛證型機(jī)理初步探討［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1995,5（4)：15-16.

［3］ 周清發(fā),喬成林,楊世興,等.慢性腎小球疾病中醫(yī)分型與甲狀腺素的關(guān)系［J］.中醫(yī)研究,1996,9（4)：11-12.

［4］ 任小巧,盧躍卿,鄧偉.加味一貫煎對實(shí)驗(yàn)性肝腎陰虛證大鼠下丘腦- 垂體- 甲狀腺軸的影響［J］.中國中藥雜志,2000, 25（3)：172-174.

［5］ 胡隨瑜,夏大勝,尤勁松.肝陽上亢證患者心理特征及血漿-內(nèi)啡肽水平研究［J］.湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,20（4)：6-8.

［6］ 何成奇,謝薇,熊素芳,等.女性原發(fā)性骨質(zhì)疏松腎虛三證與性激素變化關(guān)系的臨床研究［J］.華西醫(yī)學(xué),2003,18（1)：14-15.

［7］ 何成奇,熊恩富,熊素芳,等.男性原發(fā)性骨質(zhì)疏松腎虛三證與性激素變化關(guān)系的臨床研究［J］.中醫(yī)研究,2000,13（4)：23-24.

［8］ 孫彪,馬澤聲.狼瘡性腎炎腎陰虛證與性激素及臨床病理相關(guān)性［J］.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,1995,5（4)：3.

［9］ 蔡定芳,劉彥芳,陳曉紅,等.左歸丸對單鈉谷氨酸大鼠下丘腦-垂體-腎上腺軸的影響［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志, 1999,5（2)：24-27.

［10］陳梅芳,張慶怡,吳志英,等.尿毒癥腎虛與內(nèi)分泌及免疫狀態(tài)的關(guān)系［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志,1983,3（6)：328-329.

［11］陳小鋒.許少鋒.腎虛患者的細(xì)胞因子研究［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2000,10（2)：12-13.

［12］徐俊,王培訓(xùn),林炳夔,等.腎虛與紅細(xì)胞免疫和補(bǔ)體溶解免疫復(fù)合物功能的關(guān)系［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志,1988,8（9)：519.

［13］劉晶霞,朱秀英,楊潔茹,等.六味地黃湯治療老年腎陰虛證血漿中鋅銅含量的觀察［J］.中醫(yī)藥信息,1995（3)：50.

［14］朱秀英,曲福君,何樹莊,等.六味地黃沖劑對腎陰虛小白鼠血漿CAMP、E2、T、Zn2+、Cu2+含量的影響［J］.中醫(yī)藥學(xué)報(bào),1995（1)：51-52.

［15］郭金瑞,嚴(yán)惠芳.慢性腎炎唾液Na+、K+紅細(xì)胞變形能力改變與腎陰虛證相關(guān)性研究［J］.中醫(yī)藥學(xué)刊,2003,21（11)：1900-1901.

［16］周虎,周萍,俞慶福.慢性病毒性肝炎T 淋巴細(xì)胞亞群、免疫球蛋白變化與中醫(yī)證候關(guān)系探討［J］.江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2001,13（2)：49-50.

［17］趙詠芳,張戈,史萬忠,等.骨質(zhì)疏松癥中醫(yī)癥型的初步臨床報(bào)告［J］.中醫(yī)正骨,1998,10（5)：9-10.

［18］陳訓(xùn)華,邢美榮.女性腎虛證患者腰椎骨密度分析比較［J］.福建中醫(yī)藥,1998,29（3)：1.

［19］申春娣.腎虛證與紅細(xì)胞鋼性的研究［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志,1995,1（2)：28.

［20］任小巧,蔣士卿,盧躍卿,等.肝腎陰虛證與血脂、能量代謝、自由基反應(yīng)關(guān)系探討［J］.河南中醫(yī),1996,16（6)：346-348.

［21］黃昌亞,余秉治,邵朝弟.慢性腎衰竭中醫(yī)辨證分型與氧自由基代謝的關(guān)系［J］.武漢大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版,2002,23（4)：346-348.

［22］朱方石,陸偉,朱海杭,等.肝硬化不同證型對TP、ALB、A/G比值的影響［J］.中醫(yī)藥研究,1997,13（3)：13-15.

［23］林炳輝,方素欽,葉盈,等.中老年人脾腎虛證實(shí)質(zhì)的探討［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2002,22（1)：33-36.

［24］王彬,沈嵐,從文娟,等.基于代謝組學(xué)的六味地黃丸干預(yù)大鼠甲亢模型的作用研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào),2013,29（5)：632-637.

［25］周明眉,劉平,賈偉,等.基于代謝網(wǎng)絡(luò)變化的中藥整體效應(yīng)評(píng)價(jià)方法研究［J］.世界科學(xué)技術(shù)：中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2006,8（6)：113-119.

［26］Yang J,Xu GW,Zheng YF,et a1.Diagnosis of 1iver cancer using HPLC-based metabonomics avoiding fa1sepositive resu1t f rom hepatitis and hepatocirrhosis diseases［J］.J Chromatogr B,2004,813（1-2)：59-65.

［27］Det tmer K,Aronov PA,Hammock BD,et a1.Mass spect romet ry-based metabo1omics［J］.Mass Spect romet ry Reviews,2007,26（1)：51-78.

［28］Govi1 G.Metabonomics：a new frontier of nuc1ear magnetic resonance（NMR)［J］.Nat1 Acad Sci Let t India, 2004,27（9210)：289-299.

［29］Ramautar R,Demircia,de Jong GJ.Capi11ary e1ectrophoresisin metabo1omics［J］.Trac Trends Ana1 Chem, 2006,25（5)：455-466.

［30］Lasch P,Boese M,Paci fico A,et a1.FT-IR spectroscopic investigations of sing1e ce11s on the subce11u1ar 1eve1［J］.Vib Spect rosc,2002,28（1)：147-157.

［31］賈偉,蔣健,劉平,等.代謝組學(xué)在中醫(yī)藥復(fù)雜理論體系研究中的應(yīng)用［J］.中國中藥雜志,2006,31（8)：621-624.

［32］Antti H,Ebbe1s TMD,Keun HC,et a1.Statistica1 experimenta1 design and par tia1 1east squares regression ana1ysis of biof1uid metabonomic NMR and c1inica1 chemistry data for screening of adverse drug ef fects［J］.Chemom Inte11 Lab Syst,2004,73（1)：139-149.

［33］高崗.腎虛證代謝組學(xué)及六味地黃湯的干預(yù)研究［D］.上海：上海第二軍醫(yī)大學(xué),2009.

［34］李英帥.陽虛、陰虛體質(zhì)理論及代謝組學(xué)比較研究［D］.北京：北京中醫(yī)藥大學(xué),2009.

［35］ Wi1son ID,P1umb R,Granger J,et a1.HPLC-MS-based methods for the study of metabonomics［J］.J Chromatogr B,2005,817（1)：67-76.

［36］Wagner S,Scho1z K,Sieber M,et a1.Too1s in metabonomics：an integrated va1idation approach for LCMS metabo1ic prof i1ing of mercapturic acids in human urine［J］.J Ana1 Chem,2007,79（7)：2918-2926.

M etabonom icsResearch Progresson the Syndrom e of K idney-Yin Deficiency

WANG Bin,HAN Yonglong△
The Shanghai Sixth People′s Hospital,Shanghai200233,China

Themeaning ofmetabonom ics in the researchesof the syndrome of kidney-Yin deficiency wasexplored by concluding the current research situation and achievements ofmechanisms of kidney-Yin deficiency syndrome,which provides importantmethodology bases and technical conditions for the further know ledge of the essentiality of kidney-Yin deficiency syndrome from themultiple pointsof view.

kidney-Yin deficiency;metabonomics;research progress

R289

A

1004-6852(2015)03-0143-03

2014-02-27

王彬（1986—),女,碩士學(xué)位,藥師。研究方向：代謝組學(xué)研究。

△通訊作者：韓永龍（1975—),男,博士學(xué)位,副主任藥師。研究方向：臨床藥學(xué)。