趙文娟 雷 英

（太原動(dòng)物園,山西太原 030009）

太原動(dòng)物園蠻羊布氏桿菌病血清學(xué)調(diào)查

趙文娟 雷 英

（太原動(dòng)物園,山西太原 030009）

采用ELISH法對(duì)我園食草區(qū)飼養(yǎng)的23只蠻羊，進(jìn)行布氏桿菌病檢測(cè)，結(jié)果顯示:發(fā)現(xiàn)17號(hào)和20號(hào)兩個(gè)樣本檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，其他樣本均為陰性。結(jié)論表明:ELISH法是一種敏感、特異的診斷方法，我園飼養(yǎng)的蠻羊流產(chǎn)和死胎均是由于感染布魯氏桿菌造成的，對(duì)布魯氏桿菌病的早期診斷及防治提供了有利的依據(jù)。

ELISH法 早期診斷 防治

布氏桿菌病是由布魯氏菌引起的一種人畜共患傳染病，也是一種自然疫源性疾病。此病牛、羊、豬、鹿等均有易感性，主要侵害生殖系統(tǒng)和關(guān)節(jié)，以出現(xiàn)傳染性流產(chǎn)為典型臨床癥狀。人也有感染此病的可能，輕者可出現(xiàn)疲乏、頭疼、關(guān)節(jié)肌肉疼痛等癥狀，重者伴有流產(chǎn)、睪丸炎，嚴(yán)重影響其生殖能力，甚至?xí)适Щ镜膭趧?dòng)能力，目前，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織將此病列為B類傳染性疾病，我國(guó)將其列為二類動(dòng)物疫病。這些年來(lái)，隨著畜牧業(yè)的規(guī)模化、產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，畜禽間調(diào)運(yùn)異常頻繁，由此布病傳染病例有上升趨勢(shì)，人間傳染此病的病例也大增趨勢(shì)[1]。國(guó)際上將布氏桿菌屬分為6個(gè)種，20個(gè)生物型，各以本動(dòng)物主要感染對(duì)象，病畜和帶菌動(dòng)物為主要傳染源。病菌主要隨感染的母畜的胎衣、羊水、胎兒、精液、陰道分泌物和乳汁排出。污染飼料、飲水、環(huán)境、土壤、用具等。病原菌通過(guò)破損的皮膚、黏膜侵入機(jī)體，經(jīng)呼吸道、消化道或生殖系統(tǒng)黏膜感染。羊、牛和豬對(duì)本病的易感性最高，人感染具有明顯的職業(yè)性，以密切接觸動(dòng)物的人多發(fā)[2]。針對(duì)我園飼養(yǎng)的蠻羊發(fā)生多起無(wú)外傷的情況下，母畜發(fā)生流產(chǎn)、死胎的病例。獸醫(yī)考慮是布病的可能，馬上對(duì)我園所飼養(yǎng)的23只蠻羊進(jìn)行血清學(xué)檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料

一般采集病畜流產(chǎn)后7～15d內(nèi)，新鮮的血液。布氏桿菌抗原、200701標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清，200601國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、陰性血清200601國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品，均由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所細(xì)菌室提供，0.5%石炭酸生理鹽水，pH7.0，Mezle緩沖液，pH8.9。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

太原動(dòng)物園食草區(qū)飼養(yǎng)的23只蠻羊。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

麻醉動(dòng)物后采血并編號(hào)，以防重復(fù)采血。采集血清標(biāo)本23個(gè)，離心析出血清，-20℃冷凍備用，進(jìn)行試管凝集實(shí)驗(yàn)。

1.3.1 鏡檢

采集流產(chǎn)胎兒的羊水。涂片后采用柯氏染色法，細(xì)小的短棒狀成球桿狀的小桿菌，呈紅色，而其他菌及羊水組織等呈綠色。革蘭陰性菌，不產(chǎn)生芽孢，無(wú)運(yùn)動(dòng)性。

1.3.2 試管凝集試驗(yàn)

（1）取反應(yīng)管5只，立于試管架上，其中一只供稀釋被檢血清用，4支做檢查用。（2）用玻璃鉛筆在每支反應(yīng)管上標(biāo)記血清號(hào)及試管號(hào)。（3）用5mL吸管吸取 0.5%石炭酸生理鹽水，于血清稀釋管內(nèi)加2.3ml，第二管內(nèi)不加，第三、四、五管內(nèi)各加0.5ml。（4）用1ml吸管吸取被檢血清0.2ml，放入血清稀釋管內(nèi)，充分混合后，吸取1ml分別放入第二、第三管內(nèi)各0.5ml。將第三管混勻，吸0.5ml加入第四管，以此類推，至第五管混合后棄去0.5ml。（5）血清稀釋完畢后，除血清稀釋管不加抗原外，其余各管各加10倍稀釋抗原0.5mL。加入抗原后，血清稀釋度從第二管起，依次為1：25、1：50、1：75、和1：100四個(gè)稀釋度，每管總量都是1ml。（6）與此同時(shí)，做一對(duì)照組，即抗原對(duì)照管，陽(yáng)性血清和陰性血清（1：25）對(duì)照管。（7）各成分加完后充分震蕩混合，于37～38℃溫箱內(nèi)放4～10小時(shí)，取出后再于室溫中放置22～24h（共28h）然后判定。

1.3.3 結(jié)果判定

在陽(yáng)性和陰性對(duì)照成立的前提下，50%以上凝集現(xiàn)象的最高稀釋度為判為血清抗體效價(jià)。抗體效價(jià)1：50以上判為陽(yáng)性；出現(xiàn)抗體效價(jià)1：25判為疑似反應(yīng)，無(wú)凝集現(xiàn)象，液體均為混濁者為陰性。

表1 試管凝集試驗(yàn)的陽(yáng)性血清

結(jié)果：

通過(guò)血清學(xué)檢測(cè)，可判定為布氏桿菌感染的蠻羊2例，17號(hào)試管和20號(hào)試管均是陽(yáng)性，占總樣本數(shù)的8.70%。其他試管均為陰性見(jiàn)表1。

2 防治

（1）我園對(duì)陽(yáng)性布病的蠻羊，及時(shí)進(jìn)行了淘汰撲殺無(wú)害化處理，對(duì)流產(chǎn)胎兒、胎衣、羊水及分泌物和排泄物做了焚燒處理[3]。污染的圈舍、場(chǎng)地、飲水池，用10%的石灰乳進(jìn)行徹底消毒。產(chǎn)羔、產(chǎn)犢高峰時(shí)期，母畜流產(chǎn)，沒(méi)有妥善處理胎衣、胎兒、胎水，使得布魯氏桿菌以通過(guò)媒介傳染給其他畜體，造成4個(gè)母畜先后流產(chǎn)、死胎。周圍其他品種沒(méi)有發(fā)生該病。

（2）加強(qiáng)我園散放的飼養(yǎng)食草動(dòng)物，定期布魯氏桿菌病的檢疫，正規(guī)化定期地進(jìn)行布病的防疫和檢疫工作。檢測(cè)時(shí)間劃定必須有針對(duì)性，成年羊只每年檢測(cè)至少兩次，懷孕母畜與頭胎產(chǎn)后15d至30d，羊只五月齡以上，牛只8月齡以上，進(jìn)行疾病監(jiān)測(cè)。對(duì)新生的羊5月齡進(jìn)行檢疫，一年兩次監(jiān)測(cè)。每年9月份定期接種羊三聯(lián)苗，采取預(yù)防為主的方針。監(jiān)測(cè)的數(shù)量按照50%的比例進(jìn)行抽檢。并結(jié)合血清學(xué)檢測(cè)。人的預(yù)防，對(duì)其獸醫(yī)和飼養(yǎng)員到山西醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院進(jìn)行對(duì)布魯氏桿菌病的檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果都為陰性。日常工作做相關(guān)人員要加強(qiáng)個(gè)人防護(hù)，穿工作服、膠靴、戴口罩和膠皮手套。工作后要對(duì)各種物品進(jìn)行84消毒液處理后使用。

[1] 袁開(kāi)早.牛羊布病綜合防治措施[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2014，208（9）：（47）

[2] 徐建平，劉麗潔，李霞，等.牛羊布魯氏菌病流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2008，44（8）：78-79.

[3] 鄭明球.布魯氏桿菌病的檢疫[J].家畜傳染病學(xué)，2001，（5）：38-39.