春石斛試管花芽分化與開花的影響因素

董璐 李青

(北京林業(yè)大學(xué)，北京，100083)

責(zé)任編輯:任 俐。

春石斛為蘭科石斛屬植物，在南方或北方溫室內(nèi)早春開花，其園藝栽培品種花色艷麗、觀賞期長，具有較高的觀賞價(jià)值，但由于花期受限，目前只在年宵時(shí)暢銷［1］。近年有關(guān)春石斛組織培養(yǎng)的研究方向主要集中在組培快繁體系的建立以及離體培養(yǎng)條件的優(yōu)化［1－8］上，少有試管開花報(bào)道［2，9－10］。根據(jù)春石斛的市場(chǎng)銷售現(xiàn)狀，研究如何豐富其反季節(jié)產(chǎn)品種類對(duì)提高春石斛銷售額具有實(shí)際意義。本試驗(yàn)針對(duì)開發(fā)春石斛試管花卉，研究不同因素對(duì)春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)試管花芽分化的影響，以期篩選出誘導(dǎo)較高試管花芽分化率的培養(yǎng)基配方，探索出一種較為穩(wěn)定的離體成花體系，能人為控制開花時(shí)間，擺脫季節(jié)對(duì)其花期的限制，縮短開花周期，為探索石斛花芽分化、開花機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料與方法

以組織培養(yǎng)獲得的、經(jīng)叢生芽途徑繼代5次、苗高為1．6～1．8 cm的春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)無菌試管苗為試驗(yàn)材料。

不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比對(duì)春石斛試管開花的影響:選擇兩種細(xì)胞分裂素，即6－BA(6－芐氨基嘌呤)、TDZ(噻苯隆)，各設(shè)置3個(gè)質(zhì)量濃度水平(表1)，分別與各設(shè)置2個(gè)質(zhì)量濃度水平(表1)的兩種生長素，即NAA(萘乙酸)、2，4－D(2，4－二氯苯氧乙酸)，兩兩配比，同時(shí)附加1．0 mg·L－1PP333(多效唑)，進(jìn)行完全隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)。以不添加PP333的MS+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1的培養(yǎng)基作對(duì)照。培養(yǎng)120d后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率及正常開花率。

不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響:各處理培養(yǎng)基中附加0．2 mg·L－1TDZ、0．1 mg·L－1NAA，以及1．0 mg·L－1PP333。以MS作對(duì)照，通過對(duì)MS基本培養(yǎng)基中大量元素減半、或改變KNO3與KH2PO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，研究不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響。培養(yǎng)90 d后統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

表1 細(xì)胞分裂素與生長素質(zhì)量濃度水平設(shè)計(jì) mg·L－1

不同培養(yǎng)溫度對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響:設(shè)置培養(yǎng)溫度分別為A．恒溫為10℃條件下培養(yǎng)30 d后，再轉(zhuǎn)至23℃條件下繼續(xù)培養(yǎng);B．恒溫為23℃;C．晝/夜溫度為23℃/10℃。將無菌苗接種在MS+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1+PP3331．0 mg·L－1的培養(yǎng)基上，在上述條件下培養(yǎng)120 d，定期統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同莖節(jié)數(shù)對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響:將莖節(jié)數(shù)分別為0、1、2、3的試管苗，轉(zhuǎn)接到改良1/2MS+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1+PP3331．0 mg·L－1培養(yǎng)基上，在恒溫為10℃條件下培養(yǎng)30 d后，轉(zhuǎn)為恒溫23℃條件下培養(yǎng)60 d，統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

不同莖粗對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響:將莖節(jié)數(shù)為3、莖粗分別為3、4、5、6、7 mm的試管苗轉(zhuǎn)接到改良1/2MS+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1+PP3331．0 mg·L－1的培養(yǎng)基上，在恒溫為10℃條件下培養(yǎng)30 d后，轉(zhuǎn)為恒溫23℃條件下培養(yǎng)60 d，統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率。

培養(yǎng)條件:光照強(qiáng)度2 000 lx，光照時(shí)間14 h·d－1。培養(yǎng)基中其他成分為3．0%蔗糖、0．6%瓊脂，pH值為5．6。

數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì):花芽分化率=(花芽數(shù)/總試管苗數(shù))×100%;正常開花率=(正常開花數(shù)/總花芽分化數(shù))×100%。每個(gè)處理接10個(gè)培養(yǎng)瓶，每瓶接種3株試管苗，重復(fù)3次。用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，用LSD法進(jìn)行多重比較，檢驗(yàn)各影響因素的差異顯著性(P≤0．05)。

2 結(jié)果與分析

2．1 不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比對(duì)春石斛試管開花的影響

植物的離體培養(yǎng)中，外源激素的調(diào)控對(duì)器官的形成、生長極為重要，尤其細(xì)胞分裂素在離體花的形成過程中起十分重要的作用。將生長健壯、苗高一致的無菌苗接種到附加有不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比組合的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)120 d統(tǒng)計(jì)試管內(nèi)花芽分化率及正常開花率(表2)。

表2 不同細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比對(duì)春石斛試管開花的影響

培養(yǎng)120 d的結(jié)果顯示，細(xì)胞分裂素與生長素相比，其為春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)花芽分化的主導(dǎo)影響因素，不同細(xì)胞分裂素種類對(duì)誘導(dǎo)其花芽分化影響差異顯著。在附加有PP333的條件下，不同質(zhì)量濃度6－BA與任一生長素(NAA或2，4－D)配比組合，幾乎無花芽分化，僅誘導(dǎo)出腋芽與叢生芽，且增殖出的新芽莖基部膨大(圖1A)。培養(yǎng)基MS+6－BA3．0 mg·L－1+2，4－D0．1 mg·L－1+PP3331．0 mg·L－1上的植株雖在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)花芽分化，但花芽分化率極低，僅為0．59%，且花芽畸形，花瓣葉型(圖1B)不能正常開放。而對(duì)應(yīng)條件下，不同質(zhì)量濃度TDZ與任一生長素(NAA或2，4－D)配比組合，均有花芽分化;在TDZ質(zhì)量濃度相同的條件下，附加NAA配比組合的花芽分化率均高于附加2，4－D配比組合的花芽分化率。單獨(dú)對(duì)TDZ作花芽分化率的多重比較，發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度TDZ對(duì)花芽分化率影響差異不顯著，但整體花芽分化率隨TDZ質(zhì)量濃度的升高，呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，以0．2 mg·L－1TDZ作用下花芽分化率最高。當(dāng)TDZ質(zhì)量濃度固定時(shí)，低質(zhì)量濃度(即0．1 mg·L－1)生長素作用下的花芽分化率顯著高于高質(zhì)量濃度(即0．2 mg·L－1)生長素作用下的花芽分化率。即當(dāng)TDZ的質(zhì)量濃度為0．2 mg·L－1時(shí)，以添加生長素NAA0．1 mg·L－1誘導(dǎo)春石斛試管內(nèi)花芽分化率最高，為36．91%，顯著高于其他組合的花芽分化率。對(duì)TDZ作正常開花率的多重比較，發(fā)現(xiàn)不同質(zhì)量濃度TDZ對(duì)正常開花率影響差異顯著，0．1～0．2 mg·L－1TDZ作用下的正常開花率顯著高于0．5 mg·L－1TDZ作用下的正常開花率。培養(yǎng)基MS+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1+PP3330．1 mg·L－1中，試管內(nèi)花芽幾乎全部正常開放(圖1C);當(dāng)TDZ質(zhì)量濃度增加到0．5 mg·L－1時(shí)，正常開花率顯著降低，出現(xiàn)花梗短縮(圖1D)、花瓣呈綠色(圖1E)、花上成花(圖1F)等畸形現(xiàn)象。對(duì)照組MS+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1試管內(nèi)無花芽分化現(xiàn)象。綜合考慮，在添加有PP333的條件下，2．0 mg·L－1TDZ與0．1 mg·L－1NAA為適宜的細(xì)胞分裂素、生長素種類及質(zhì)量濃度配比組合，能有效誘導(dǎo)春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)試管開花。

圖1 春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)的試管開花

2．2 不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響

將生長一致的無菌苗接種到含有不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)90 d后比較試管內(nèi)花芽分化的情況(表3)。對(duì)表3進(jìn)行方差分析，將花芽分化率進(jìn)行兩兩比較，不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)誘導(dǎo)春石斛花芽分化影響差異顯著。3號(hào)改良培養(yǎng)基(即MS大量元素中除KNO3與KH2PO4外，其他無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)減半)與4號(hào)改良培養(yǎng)基(即MS大量元素中KNO3與KH2PO4質(zhì)量分?jǐn)?shù)加倍)上培養(yǎng)的試管苗花芽分化率顯著高于其他培養(yǎng)基，分別為52．18%與51．61%，且長勢(shì)較好，莖基部有少量黃葉現(xiàn)象;2號(hào)培養(yǎng)基(即MS大量元素?zé)o機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)均減半)由于培養(yǎng)基中大量元素的減少，未對(duì)植株提供充足的營養(yǎng)物質(zhì)，從而影響了植株的長勢(shì)與成花，所培養(yǎng)的試管苗花芽分化率最低，僅為30．74%;對(duì)照MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)的植株雖長勢(shì)好，但花芽分化率顯著低于3、4號(hào)改良培養(yǎng)基，為37．31%。從結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，增加P、K的質(zhì)量分?jǐn)?shù)比例，能有效促進(jìn)花芽的形成，花芽分化率顯著增加，P、K質(zhì)量分?jǐn)?shù)為其他大量元素質(zhì)量分?jǐn)?shù)的2倍時(shí)，春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)的花芽分化率最高。

表3 不同無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)對(duì)春石斛花芽分化的影響

2．3 不同培養(yǎng)溫度對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響

自然條件下，春石斛早春開花，低溫春化作用是誘導(dǎo)其花芽分化的有效因素。將長勢(shì)一致、苗高為1．6～1．8 cm的試管苗轉(zhuǎn)接到MS+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1+PP3331．0 mg·L－1培養(yǎng)基中，在3種培養(yǎng)溫度條件下進(jìn)行培養(yǎng)。通過不同培養(yǎng)周期觀察并記錄花芽分化率，花芽分化率隨培養(yǎng)周期的增長而升高，相同培養(yǎng)周期內(nèi)的3種培養(yǎng)溫度條件下的花芽分化率兩兩比較，均差異顯著(表4)。60 d時(shí)發(fā)現(xiàn)在A培養(yǎng)條件(恒溫為10℃下培養(yǎng)30 d后，轉(zhuǎn)至恒溫為23℃)下培養(yǎng)的試管苗，與在C培養(yǎng)條件(晝溫/夜溫為23℃/10℃)下培養(yǎng)的試管苗開始有花芽分化，此時(shí)花芽分化率較低，分別為7．69%與13．46%，而在B培養(yǎng)條件(恒溫為23℃)下培養(yǎng)的試管苗無花芽分化;培養(yǎng)至75 d時(shí)，A培養(yǎng)條件下的試管苗花芽分化率為33．96%，顯著高于C培養(yǎng)條件下30．77%的花芽分化率，B條件下培養(yǎng)的試管苗仍無花芽分化。培養(yǎng)至90 d時(shí)，在A培養(yǎng)條件與C培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的試管苗花芽分化率分別增加到41．51%、37．74%，此后30 d內(nèi)，花芽分化的增加速度有所減緩，在120 d時(shí)，A培養(yǎng)條件下的試管苗花芽分化率趨于穩(wěn)定，為43．40%，與C培養(yǎng)條件下的花芽分化率(42．83%)差異不顯著。而在B培養(yǎng)條件下培養(yǎng)的試管苗，培養(yǎng)至90 d時(shí)，才開始有花芽分化，花芽分化率為8．57%;培養(yǎng)至120 d時(shí)，花芽分化率增加到36．59%，但仍顯著低于A、C培養(yǎng)條件下的花芽分化率。試驗(yàn)說明春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)對(duì)低溫春化要求并非絕對(duì)的，其在23℃的恒溫條件下培養(yǎng)120 d能誘導(dǎo)出較高的花芽分化率;而相比于常溫恒溫，低溫或晝夜溫差處理能使植株提前30 d開花，花芽分化率明顯增加。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，篩選出恒溫10℃下培養(yǎng)30 d，轉(zhuǎn)至恒溫23℃繼續(xù)培養(yǎng)60 d，為誘導(dǎo)春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)試管花芽分化的適宜培養(yǎng)條件，使其能在較短時(shí)間內(nèi)誘導(dǎo)出較高的花芽分化率。

表4 不同培養(yǎng)溫度對(duì)春石斛花芽分化的影響

2．4 植株不同莖節(jié)數(shù)對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響

試管苗的莖節(jié)數(shù)對(duì)試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)影響顯著。將不同莖節(jié)數(shù)的無菌苗接種到1/2MS(50%KNO3+50%KH2PO4)+TDZ0．2 mg·L－1+NAA0．1 mg·L－1+PP3331．0 mg·L－1培養(yǎng)基上，在上述試驗(yàn)篩選出的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)90 d，結(jié)果表明，莖節(jié)數(shù)少于2個(gè)的三植株無花芽分化現(xiàn)象;而莖節(jié)數(shù)為2或3的植株有花芽分化，且花芽分化率較高，分別為50．65%與52．11%。由此可見，春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)植株的莖節(jié)數(shù)影響花芽分化，2個(gè)莖節(jié)是其營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件。

2．5 不同莖粗對(duì)春石斛試管內(nèi)花芽分化的影響

植株的莖粗對(duì)試管內(nèi)成花數(shù)量影響顯著(表5)，花朵數(shù)量隨莖粗度增加而呈上升趨勢(shì)，兩兩比較，差異顯著;花芽分化率也隨莖粗的增加呈上升趨勢(shì)。莖粗為7 mm的試管苗成花數(shù)量顯著高于其他莖粗植株的成花數(shù)量，為3．31朵，此時(shí)花芽分化率也最高，為56．92%。由此可推測(cè)，植株莖粗直接影響植株體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)存貯狀況，莖粗越粗，存貯營養(yǎng)越多，花芽分化時(shí)能供應(yīng)的營養(yǎng)越多，此時(shí)花芽分化率增加，花朵數(shù)量增多。

表5 不同莖粗對(duì)春石斛花芽分化的影響

3 結(jié)論與討論

植物花芽分化和開花是一個(gè)受內(nèi)部因素和外部環(huán)境共同調(diào)控的十分復(fù)雜的生理過程，植物開花受如光照、溫度、水分、肥料等外界環(huán)境條件及內(nèi)部如植物年齡、激素平衡等狀況及其相互間的作用的影響［11－12］。要誘導(dǎo)植物在離體條件下花芽分化并正常開花，既要考慮植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、培養(yǎng)基成分等條件對(duì)植物體內(nèi)激素的調(diào)控，又需要研究培養(yǎng)環(huán)境對(duì)其營養(yǎng)、生殖生長的影響。

不同細(xì)胞分裂素種類對(duì)誘導(dǎo)春石斛花芽分化影響有差異。6－BA與1．0 mg·L－1PP333的組合，與生長素配比不能誘導(dǎo)花芽分化;而TDZ表現(xiàn)出很高的細(xì)胞分裂素活性［13］，附加有不同質(zhì)量濃度TDZ與1．0 mg·L－1PP333的組合，在與不同質(zhì)量濃度NAA、2，4－D配比試驗(yàn)中，均有花芽分化，其中添加1．0 mg·L－1PP333、0．2 mg·L－1TDZ與0．1 mg·L－1NAA配比時(shí)，春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)的花芽分化率最高，且全部開放正常?；ㄑ糠只孰STDZ質(zhì)量濃度的升高，呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì);激素質(zhì)量濃度過高可能導(dǎo)致畸形花或者花芽不能正常開放，這與李璐［14］研究石斛蘭開花機(jī)制的結(jié)果相一致。自然條件下，在已知五大類植物激素中，赤霉素對(duì)開花的影響最大［15］，在后續(xù)的研究中，可進(jìn)一步研究赤霉素在離體條件下對(duì)春石斛開花的影響。

大量元素在植物生長過程中起著重要作用。許多離體開花誘導(dǎo)研究發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基中低質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氮有利于促進(jìn)開花，而較高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的N抑制開花［16－23］;改變P元素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)可影響甚至提高花芽分化率［24－25］;通過調(diào)整基本培養(yǎng)基中N、P、K比例，可以促進(jìn)金釵石斛與細(xì)莖石斛試管開花［26－27］;提高P離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)、降低N離子質(zhì)量分?jǐn)?shù)，對(duì)開花有利［28］;也有研究發(fā)現(xiàn)，P、K質(zhì)量分?jǐn)?shù)的減半可增加成花數(shù)量［29－30］。本試驗(yàn)以未改變成分的MS基本培養(yǎng)基作為對(duì)照，發(fā)現(xiàn)增加KNO3與KH2PO4在大量元素中的相對(duì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)，間接降低N質(zhì)量分?jǐn)?shù)，改變N、P、K比例，能有效促進(jìn)花芽的形成，顯著增加了春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)的花芽分化率。

花的發(fā)生和花芽的分化都需要一定的溫度，溫度對(duì)于植物成花的影響是多方面的。因種間差異，不同植物的成花有各自一定范圍的溫度需求［31］。一些植物需要低溫春化作用才能促進(jìn)成花［22－23，30，32］，一些植物需要高溫?zé)峒ぬ幚碚T導(dǎo)花芽分化，一些植物對(duì)晝夜溫差有一定的要求，也有許多屬(Arethusa，Calypso，Cymbidium，Dendrobium，Oncidium，Sarcochilus)包括一些具有溫周期的植物，通過持續(xù)培養(yǎng)在高溫，即無低溫的誘導(dǎo)作用即可成花［10－33］。本試驗(yàn)在恒高溫、恒低溫以及晝夜溫差3種培養(yǎng)溫度條件下，驗(yàn)證了無低溫誘導(dǎo)，春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)也能成花，且得出相較于常溫恒溫、低溫或晝夜溫差處理能提前開花，且開花率顯著增加的結(jié)果。

植物由營養(yǎng)生長轉(zhuǎn)變?yōu)樯成L，前期需要積累一定的營養(yǎng)物質(zhì)，苗高等生理指標(biāo)代表植株體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)存貯狀況，對(duì)試管內(nèi)花芽誘導(dǎo)有較大影響［6－7，14，16］。本 試 驗(yàn) 對(duì) 春 石 斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)的莖節(jié)數(shù)與莖粗兩個(gè)生理指標(biāo)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)莖節(jié)數(shù)對(duì)花芽分化影響顯著，具2個(gè)莖節(jié)是其營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)化的臨界條件。而莖粗則直接影響試管內(nèi)成花數(shù)量，莖粗越粗，花朵數(shù)量越增加。關(guān)于成花數(shù)量的報(bào)道還有發(fā)現(xiàn)低質(zhì)量濃度TDZ誘導(dǎo)的花芽多為頂生單花，高質(zhì)量濃度TDZ誘導(dǎo)的花芽多為總狀花序［34］。

在所研究的影響因素中，春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)自身芽體的營養(yǎng)生長狀態(tài)是其花芽分化的基礎(chǔ)前提條件，即試管苗本身必須存貯足夠的營養(yǎng)物質(zhì)，才能完成由營養(yǎng)生長向生殖生長的轉(zhuǎn)變;否則即使提供適宜的培養(yǎng)基及培養(yǎng)條件，也無法誘導(dǎo)其花芽分化;其次激素種類及質(zhì)量濃度的配比是關(guān)鍵因素，尤其細(xì)胞分裂素的種類對(duì)于春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)花芽分化是否能分化作用極為顯著;無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與培養(yǎng)條件對(duì)花芽分化率影響顯著，適宜的無機(jī)鹽質(zhì)量分?jǐn)?shù)與適宜的培養(yǎng)條件可有效提高花芽分化率，但并非誘導(dǎo)春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)由營養(yǎng)生長向生殖生長的充要條件。培養(yǎng)基成分中還有其他種類外源激素、不同碳源、蔗糖濃度、瓊脂濃度等因素也有可能影響春石斛(Dendrobium nobile‘Huoniao’)花芽分化，在后續(xù)的試驗(yàn)中，可以進(jìn)一步探索其他因素對(duì)其試管開花的影響。

［1］李秋玲，李青，劉燕，等．春石斛繼代培養(yǎng)主要影響因素［J］．東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，42(7):69－73．

［2］何靜茹．春石斛離體快繁體系的優(yōu)化與試管內(nèi)開花的研究［D］．雅安:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2013．

［3］賈夢(mèng)雪，徐瑾，葉香娟，等．春石斛優(yōu)良品種‘森禾2006’組培快繁體系的建立［J］．植物生理學(xué)報(bào)，2013，49(12):1363－1367．

［4］李媛，朱丹紅，潘會(huì)堂，等．3種石斛蘭以莖段為外植體的離體快繁技術(shù)［J］．東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，41(8):77－81．

［5］吳高杰，賴鐘雄．春石斛試管苗離體再生體系的優(yōu)化研究［J］．園藝與種苗，2012，39(12):29－31．

［6］孟金玲．春石斛(Dendrobium nobile)組織培養(yǎng)快繁體系的構(gòu)建［D］．杭州:浙江農(nóng)林大學(xué)，2011．

［7］李璐，賴鐘雄，翁浩．春石斛和鐵皮石斛試管苗壯苗生根條件的優(yōu)化［J］．福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2011，40(1):31－36．

［8］張愛香，左利兵，劉會(huì)清，等．春石斛蘭愈傷組織的誘導(dǎo)及分化培養(yǎng)基的篩選［J］．河北北方學(xué)院學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2011，27(1):36－37．

［9］吳高杰，賴鐘雄．春石斛離體培養(yǎng)條件優(yōu)化及其試管開花研究［J］．熱帶作物學(xué)報(bào)，2013，34(3):451－458．

［10］邢琳．石竹、月季、春石斛試管開花組培技術(shù)研究［D］．北京:北京林業(yè)大學(xué)，2010．

［11］Iain SD，Dennis F．Experimental control of floral reversion in isolated shoot apices of the long-day plant Silene coei-rosa［J］．Physiologia Plantarum，2006，92(2):329－335．

［12］Duan JX，Yazawa S．In vitro floral development in×Dorielln Tiny(Doritis pulcherrima×Kingiella philippinensis)［J］．Scientia Horticulturae，1994，59:253－264．

［13］李丙智，郭立．TDZ對(duì)蘋果葉片光合功能、開花座果及果實(shí)發(fā)育的影響［J］．北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)，1999，14(3):11－14．

［14］李璐．石斛蘭試管開花及其分子機(jī)制研究［D］．福州:福建農(nóng)林大學(xué)，2010．

［15］蕭浪濤，王三根．植物生理學(xué)［M］．北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2004．

［16］Zeng S，Liang S，Zhang Y Y，et al．In vitro flowering red miniature rose［J］．Biologia Plantarum，2013，57(3):401－409．

［17］褚劍峰，鄭琪，孫葉芳，等．玫瑰試管花技術(shù)研究及商品化生產(chǎn)［J］．上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008，24(1):130－132．

［18］劉燕，陳訓(xùn)．影響西洋杜鵑離體試管苗開花的幾個(gè)因素［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36(22):9405－9407．

［19］師素恩，張曦良．香石竹試管內(nèi)開花現(xiàn)象初報(bào)［J］．植物生理學(xué)通訊，1995，31(4):281－285．

［20］王軍玲，陸方方，陳曉梅，等．雞冠花試管開花初探［J］．熱帶農(nóng)業(yè)科技，2007，30(4):34－35，44．

［21］余沛濤，何劍鋒．誘導(dǎo)何氏鳳仙試管內(nèi)開花的幾種生理因素［J］．植物生理學(xué)通訊，2000，36(6):532．

［22］鄭麗屏，王玲仙，孫一丁，等．重瓣絲石竹試管花的誘導(dǎo)［J］．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2004，17(增刊):58－61．

［23］馮瑩．石斛蘭ACS反義基因的遺傳轉(zhuǎn)化及離體開花的研究［D］．福州:福建農(nóng)林大學(xué)，2008．

［24］孫朝輝，龍美珍，段秀梅，等．‘香檳’月季的組織培養(yǎng)和試管開花誘導(dǎo)［J］．植物生理學(xué)報(bào)，2013，49(11):1261－1266．

［25］周俊輝，楊寅桂，劉義存，等．微型月季的試管開花誘導(dǎo)研究［J］．江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，30(3):504－508．

［26］王再花．金釵石斛和細(xì)莖石斛試管開花研究［D］．廣州:華南師范大學(xué)，2005．

［27］王琳．金釵石斛試管開花研究［D］．廣州:華南師范大學(xué)，2004．

［28］Tee C S，Maziah M，Tan C S．Induction of in vitro flowering in the orchid Dendrobium sonia 17［J］．Biologia Plantarum，2008，52(4):723－726．

［29］陳達(dá)菊．蘭花試管開花的誘導(dǎo)及其發(fā)生機(jī)理的研究［D］．廣州:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2006．

［30］Vaz A P A，Kerbauy G B．Effects of mineral nutrients on in vitro growth and flower formation of Psymorchispusilla(Orchidaceae)［J］．Acta Hort(ISHS)，1998，520(2000):149－156．

［31］王利琳，龐基良，胡江琴，等．溫度對(duì)植物成花的影響［J］．植物學(xué)通報(bào)，2002，19(2):176－183．

［32］Wang Y．Phalaenopsis orchid light requirement during the induction of spiking［J］．HortScience，1995，30:59－61．

［33］陳肖英，徐明全，鄭平，等．蘭花試管開花研究進(jìn)展［J］．華南熱帶農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，12(4):27－31．