黃 山，胡聯(lián)章，楊先才，戈清強(qiáng)，陳雪峰，李玉霞

(1．四川省石棉縣畜牧局，四川石棉625400 2．四川省石棉縣科技局，四川石棉625400)

微生物的污染是影響豬肉品質(zhì)的重要因素之一，肉及肉制品被微生物污染后細(xì)菌、細(xì)菌毒素常常引起人們食物中毒［1］。菌落總數(shù)是用來判定食品被細(xì)菌污染的程度及衛(wèi)生質(zhì)量的每克(或毫升)檢樣中形成的微生物菌落總數(shù)，可反映食品是否符合衛(wèi)生要求，菌落總數(shù)的多少在一定程度上反映著食品衛(wèi)生質(zhì)量的優(yōu)劣。菌落總數(shù)越高，代表食品中細(xì)菌數(shù)量越多，食品腐敗變質(zhì)的速度就越快。通過檢測(cè)菌落總數(shù)，可以了解屠宰生豬胴體被污染的程度(即肉品的清潔衛(wèi)生狀態(tài))?；诖耍P者通過對(duì)石棉縣畜禽定點(diǎn)屠宰場(chǎng)宰殺的生豬胴體進(jìn)行菌落總數(shù)檢測(cè)，以了解石棉縣畜禽定點(diǎn)屠宰場(chǎng)的衛(wèi)生質(zhì)量狀況，從而為改善石棉縣生豬屠宰加工的衛(wèi)生管理和提高產(chǎn)品品質(zhì)提供可借鑒的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

1．1．1 無菌生理鹽水。在石棉縣畜牧局實(shí)驗(yàn)室內(nèi)按照以下步驟配制無菌生理鹽水:稱取8．5 g NaCl溶于1 000 ml蒸餾水中，于 121 ℃下高壓滅菌 15 min［2］。

1．1．2 樣品。2014年3月、5月和7月，分3次從石棉縣畜禽定點(diǎn)屠宰場(chǎng)隨機(jī)采集屠宰生豬胴體表面擦拭樣品共計(jì)60份(每頭豬采集1份樣品)。每次采樣20份，其中胴體經(jīng)過清潔流水漂洗后的樣品4份。

1．1．3 培養(yǎng)基。平板計(jì)數(shù)瓊脂(plate count agar，PCA)，購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。

1．1．4 儀器。超凈工作臺(tái)、高壓滅菌器、無菌棉簽、便攜式采樣箱、滅菌采樣瓶、滅菌試管、恒溫水浴鍋(46±1℃)、電熱恒溫培養(yǎng)箱(36±1℃)、電子天平(感量0．1 g)、微生物顯微鏡、可調(diào)節(jié)移液器(配槍頭)、振蕩器、無菌錐形瓶(500 ml)、滅菌培養(yǎng)皿(直徑 90 mm)、燒杯、量筒(10、50和 500 ml)、試管及試管架等。以上儀器設(shè)備均由石棉縣畜牧局實(shí)驗(yàn)室提供。

1．2 試驗(yàn)方法

1．2．1 采樣。用胴體體表棉拭采樣法［3］，即用滅菌棉簽蘸少量滅菌生理鹽水略濕潤(rùn)后，在胴體表面約5 cm2的范圍內(nèi)橫豎往返各擦拭5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉簽，然后立即剪斷并投入盛有50 ml滅菌生理鹽水的滅菌采樣瓶中，充分搖勻，后作為樣品原液。另選胴體，如此重復(fù)60次，完成60份采樣。

1．2．2 菌落總數(shù)檢測(cè)。依照 GB 4789．2 －2010［2］標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行菌落總數(shù)檢測(cè)。

1．2．2．1 不同稀釋度樣品勻液的制備。用量筒量取25 ml樣品原液，置于盛有225 ml生理鹽水的無菌錐形瓶，充分搖勻，制成1∶10的樣品勻液。用可調(diào)節(jié)移液器吸取1∶10的樣品勻液1 ml，沿管壁緩緩注入盛有9 ml生理鹽水的無菌試管中，充分搖勻，制成1∶100的樣品勻液。用可調(diào)節(jié)移液器吸取1∶100的樣品勻液1 ml，沿管壁緩緩注入盛有9 ml生理鹽水的無菌試管中，充分搖勻，制成1∶1 000的樣品勻液。

1．2．2．2 接種。選擇1∶100 和1∶1 000 稀釋度，每個(gè)稀釋度接種2個(gè)無菌平皿，每皿1 ml。同時(shí)，分別吸取1 ml生理鹽水加入2個(gè)平皿作為空白對(duì)照(CK)。

及時(shí)將20 ml冷卻至46℃的平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基(PCA)傾注平皿，并且小心轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。

1．2．2．3 培養(yǎng)。待瓊脂凝固后，將平皿翻轉(zhuǎn)，置于(36±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(48±2)h。

1．2．2．4 計(jì)數(shù)。菌落計(jì)數(shù)以菌落形成單位(Colony-forming units，CFU)表示。選取菌落數(shù)在30～300 CFU、無蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)采用2個(gè)平板的平均值。出抗寒家系。由于家系內(nèi)不同的單株間亦存在顯著差異，僅進(jìn)行家系篩選是不夠的，家系間和家系內(nèi)聯(lián)合進(jìn)行配合選擇［17］是篩選優(yōu)良抗寒單株的最佳方法。

(2)該試驗(yàn)是在一年生苗冬季假植的二年生實(shí)生苗群體中進(jìn)行的評(píng)定與篩選，而進(jìn)行一年生苗的假植費(fèi)工費(fèi)事，在生產(chǎn)中無法大規(guī)模實(shí)施。為結(jié)合北方大葉女貞的生產(chǎn)育苗，家系及單株的抗寒性篩選可在一年生苗及經(jīng)平茬后再生長(zhǎng)的“二年生根一年生干”的苗木群體中進(jìn)行。此外，大葉女貞苗木的抗寒性受環(huán)境的影響很大，田間試驗(yàn)的邊緣效應(yīng)十分明顯，試驗(yàn)中應(yīng)盡可能地保持環(huán)境條件的一致性，才能得到可靠的結(jié)果。

(3)由于苗木的抗寒性和生長(zhǎng)量不存在相關(guān)性，所以抗寒性的篩選必須在經(jīng)過冬天后春季進(jìn)行，一年生苗時(shí)的早期篩選沒有意義。而在生產(chǎn)實(shí)踐中，通常是抗寒性強(qiáng)且生長(zhǎng)量大的單株更具有應(yīng)用價(jià)值，所以生長(zhǎng)量的選擇應(yīng)在抗寒單株的基礎(chǔ)上進(jìn)行。

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