基于蒼術(shù)屬植物水溶性成分HPLC指紋圖譜的化學(xué)親緣關(guān)系研究

芮夢(mèng)玨，歐陽(yáng)臻*，彭華勝，趙 明，葉 丹，邵 揚(yáng)，江 珊，楊淑芳，袁 婷

(1.江蘇大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；3.中國(guó)中醫(yī)研究院 中藥資源中心，北京 100700)

基于蒼術(shù)屬植物水溶性成分HPLC指紋圖譜的化學(xué)親緣關(guān)系研究

芮夢(mèng)玨1，歐陽(yáng)臻1*，彭華勝2,3，趙 明1，葉 丹1，邵 揚(yáng)1，江 珊1，楊淑芳1，袁 婷1

(1.江蘇大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，安徽 合肥 230031；3.中國(guó)中醫(yī)研究院 中藥資源中心，北京 100700)

采用高效液相色譜法建立不同產(chǎn)地的蒼術(shù)屬植物水提物不同極性部位的指紋圖譜，并運(yùn)用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”及SPSS軟件對(duì)其進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)及綜合聚類(lèi)分析，以探討蒼術(shù)屬7種植物的種間親緣關(guān)系。結(jié)果顯示：茅蒼術(shù)與羅田蒼術(shù)聚為一類(lèi)，北蒼術(shù)與朝鮮蒼術(shù)、部分茅蒼術(shù)聚為一類(lèi)，關(guān)蒼術(shù)與白術(shù)聚為一類(lèi)，鄂西蒼術(shù)單獨(dú)聚為一類(lèi)，該聚類(lèi)分析結(jié)果與以揮發(fā)性成分為指標(biāo)的聚類(lèi)分析結(jié)果一致。蒼術(shù)屬植物水溶性成分HPLC指紋圖譜的建立及聚類(lèi)分析可為蒼術(shù)屬植物的分類(lèi)，尋找蒼術(shù)屬植物親緣關(guān)系提供可靠依據(jù)。

蒼術(shù)屬；親緣關(guān)系；HPLC；指紋圖譜；綜合聚類(lèi)分析

菊科蒼術(shù)屬植物為多年生草本植物，主要分布在亞洲東部地區(qū)。我國(guó)有5種、1變種、1亞種[1-3]，即茅蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb.) DC.、白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.、鄂西蒼術(shù)Atractylodescarlinoides(Hand.-Mazz.) Kitam.、關(guān)蒼術(shù)AtractylodesjaponicaKoidz.、朝鮮蒼術(shù)Atractylodescoreana(Nakai) Kitam.、北蒼術(shù)Atractylodeschinensis(DC.) Koidz.和羅田蒼術(shù)Atractylodeslanceasubsp.luotianensisS.L. Hu et X. F. Feng。蒼術(shù)屬植物是重要的藥用類(lèi)群，除了鄂西蒼術(shù)外，其它所有類(lèi)群的根狀莖均作藥用。中國(guó)是蒼術(shù)屬植物的主要分布區(qū)，長(zhǎng)期以來(lái)，種間親緣關(guān)系問(wèn)題一直存在爭(zhēng)議。肖培根[4]在藥用植物親緣學(xué)中提出植物親緣關(guān)系與化學(xué)成分、療效間存在一定的聯(lián)系性。因此，探索蒼術(shù)屬植物化學(xué)成分的分布規(guī)律以探求其種間親緣關(guān)系，對(duì)蒼術(shù)屬植物的合理利用具有重要指導(dǎo)意義。

目前，關(guān)于蒼術(shù)屬植物親緣關(guān)系的研究主要集中在形態(tài)學(xué)、分子學(xué)及化學(xué)成分等方面，化學(xué)成分方面以揮發(fā)油為其主要研究對(duì)象，而對(duì)其水溶性成分方面的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本課題組前期對(duì)蒼術(shù)屬植物的揮發(fā)性成分進(jìn)行了GC-MS分析和指紋圖譜研究，探討了蒼術(shù)屬植物之間的親緣關(guān)系，從揮發(fā)性成分的角度為蒼術(shù)屬植物的分類(lèi)提供了依據(jù)。本研究采用HPLC法對(duì)7種37個(gè)不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物的三個(gè)不同極性部位進(jìn)行分析，利用“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004版A”及SPSS20.0軟件分析處理數(shù)據(jù)，構(gòu)建親緣關(guān)系系統(tǒng)圖，從水溶性成分的角度探討蒼術(shù)屬植物之間的親緣關(guān)系，以期為蒼術(shù)屬植物的分類(lèi)提供參考。

1 材 料

JASCO LC1500高效液相色譜儀(日本分光公司)；LXQ線性離子阱質(zhì)譜儀(賽默飛世爾科技公司)；AE240分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；BuchiR-200型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi公司)；甲醇(色譜純，國(guó)藥集團(tuán))；雙蒸水(娃哈哈飲用純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán))；石油醚、乙酸乙酯、正丁醇(分析純，國(guó)藥集團(tuán))。

試驗(yàn)收集不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物共37批，其中13批茅蒼術(shù)A.lancea、9批北蒼術(shù)A.chinensis、1批羅田蒼術(shù)A.lanceasubsp.luotianensis、3批朝鮮蒼術(shù)A.coreana、7批關(guān)蒼術(shù)A.japonica、3批白術(shù)A.macrocephala、1批鄂西蒼術(shù)A.carlinoides，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)彭華勝教授鑒定。藥材來(lái)源見(jiàn)表1。

表1 藥材來(lái)源

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品溶液的制備

取蒼術(shù)屬植物藥材粉末5 g，精密稱定，加入15倍劑量的蒸餾水進(jìn)行水煎煮，煎煮兩次，第一次1.5 h，第二次1 h，合并濾液，濃縮至含生藥量1 g/mL。依次采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇對(duì)藥材水煎液進(jìn)行萃取，有機(jī)溶劑與水煎液的比例為1 ∶1，每一部位均萃取4次，合并萃取液并回收溶劑至干燥，分別加甲醇定容至2 mL、5 mL、5 mL，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，取續(xù)濾液，分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位供試品溶液。

2.2 蒼術(shù)屬植物水提物石油醚部位HPLC指紋圖譜研究

2.2.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil-C18色譜柱(4. 6 mm×250 mm，5μm)；流動(dòng)相甲醇(A)-水(B，含0.2%冰醋酸)梯度洗脫，0 min～12 min， 34%～42% A，12 min～25 min， 42%～54% A，25 min～38 min，54%～58% A，38 min～50 min，58%～60% A，50 min～55 min，60%～61% A，55 min～73 min，61%～71% A，73 min～83 min，71%～79% A，83 min～95 min，79%～85% A；流速為1.0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)313 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量20 μL。

2.2.2 方法學(xué)考察

取本屬代表物種茅蒼術(shù)水提物石油醚部位供試品溶液進(jìn)行方法學(xué)考查，結(jié)果符合指紋圖譜要求。精密度試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.09%～1.47%和0.53%～2.31%(n=5)；24小時(shí)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.47%～2.24%和0.11%～2.43%(n=5)；重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.08%～2.47%和0.51%～2.16%(n=5)。

2.2.3 共有模式圖的建立

以13批茅蒼術(shù)樣品指紋圖譜為基礎(chǔ)，生成共有模式圖(圖1)，根據(jù)各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，確定12個(gè)共有峰，其中8號(hào)峰保留時(shí)間適中、分離效果好且峰面積較大，因此選8號(hào)峰為參比峰。

圖1 茅蒼術(shù)水提物石油醚部位共有模式圖

2.2.4 指紋圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià)

將不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物石油醚部位樣品的HPLC數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜計(jì)算機(jī)相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004版A”，生成蒼術(shù)屬植物水提物石油醚部位指紋圖譜(圖2)。以茅蒼術(shù)的共有指紋圖譜為參照?qǐng)D譜，對(duì)37批不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物石油醚部位指紋圖譜進(jìn)行了相似度分析，其結(jié)果見(jiàn)表2。由表可知，與共有模式圖相比，茅蒼術(shù)、羅田蒼術(shù)的相似度較高，其平均相似度分別為94.3%、92.6%；其次為北蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)，平均相似度分別為82.7%、81.9%、60.44%、48.3%；鄂西蒼術(shù)相似度最低，為25.9%。

圖2 蒼術(shù)屬植物水提物石油醚部位指紋圖譜

樣號(hào)相似度/%樣號(hào)相似度/%樣號(hào)相似度/%L197.9H192.6J165.5L297.3B187.9J258.2L397.2B287.3J364.4L496.7B386.2J464.1L596.3B484.6J563.8L695.8B583.9J657.0L795.2B680.5J750.1L894.2B779.7M151.0L993.1B879.4M247.9L1092.5B978.1M346.1L1191.5C183.8M425.9L1289.8C281.3L1388.8C380.8

2.3 蒼術(shù)屬植物水提物乙酸乙酯部位HPLC指紋圖譜研究

2.3.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil-C18色譜柱(4. 6 mm×250 mm，5μm)；流動(dòng)相甲醇(A)-水(B，含0.2%冰醋酸)梯度洗脫，0 min～6 min，12%～18% A， 6 min～17 min，18%～24% A，17 min～27 min，24%～30% A，27 min～37 min，30%～35% A，37 min～47 min，35%～41% A，47 min～57 min，41%～50% A，57 min～67 min，50%～63% A，67 min～83 min，63%～73% A，83 min～95 min，73%～83% A；流速1. 0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng) 313 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量20 μL。

2.3.2 方法學(xué)考察

取本屬代表物種茅蒼術(shù)水提物乙酸乙酯部位供試品溶液進(jìn)行方法學(xué)考查，結(jié)果符合指紋圖譜要求。精密度試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.3%～1.62%與0.64%～2.57%(n=5)；24 h穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.05%～1.68%與0.38%～2.58%(n=5)；重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.16%～2.56%與0.38%～2.26%(n=5)。

2.3.3 共有模式圖的建立

以13批茅蒼術(shù)樣品指紋圖譜為基礎(chǔ)，生成共有模式圖(圖3)，根據(jù)各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，確定14個(gè)共有峰，其中5號(hào)峰保留時(shí)間適中、分離效果好且峰面積較大，因此選5號(hào)峰為參比峰。

圖3 茅蒼術(shù)水提物乙酸乙酯部位共有模式圖

2.3.4 指紋圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià)

將不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物乙酸乙酯部位樣品的HPLC數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜計(jì)算機(jī)相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004版A”，生成蒼術(shù)屬植物水提物乙酸乙酯部位指紋圖譜(圖4)。以茅蒼術(shù)的共有指紋圖譜為參照?qǐng)D譜，對(duì)37批不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物乙酸乙酯部位指紋圖譜進(jìn)行了相似度分析，其結(jié)果見(jiàn)表3。由表可知，與共有模式圖相比，茅蒼術(shù)、羅田蒼術(shù)的相似度較高，其平均相似度分別為93.4%、89.8%；其次為北蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)，平均相似度分別為81.2%、80.7%、62.0%、61.1%；鄂西蒼術(shù)相似度最低，為36.8%，此結(jié)果與石油醚部位的相似度評(píng)價(jià)一致。

圖4 蒼術(shù)屬植物水提物乙酸乙酯部位指紋圖譜

樣號(hào)相似度/%樣號(hào)相似度/%樣號(hào)相似度/%L197.5H189.8J164.9L297.3B188.0J264.0L396.3B287.4J366.9L496.8B383.0J465.8L596.3B481.2J558.8L694.6B580.0J656.7L793.8B679.8J756.9L893.4B777.8M160.6L994.3B876.7M262.2L1090.8B976.9M360.4L1189.2C181.3M436.8L1288.8C279.1L1385.9C381.9

2.4 蒼術(shù)屬植物水提物正丁醇部位HPLC指紋圖譜研究

2.4.1 色譜條件

色譜柱為Kromasil-C18色譜柱(4.6 mm ×250 mm，5μm)；流動(dòng)相甲醇(A)-水(B，含0.2%冰醋酸)梯度洗脫，0 min～10 min，1%～5% A，10 min～22 min，5%～7% A，22 min～28 min，7%～18% A，28 min～37 min，18%～21% A，37 min～50 min，21%～29% A，50 min～60 min，29%～37% A，60 min～70 min，37%～44% A，70 min～79 min，44%～62% A，79 min～84min，62%～69% A，84 min～99 min，69%～88% A，99 min～105min，88%～97% A；流速1. 0 mL·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng) 282 nm；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量20 μL。

2.4.2 方法學(xué)考察

取本屬代表物種茅蒼術(shù)水提物正丁醇部位供試品溶液進(jìn)行方法學(xué)考查，結(jié)果符合指紋圖譜要求。精密度試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.41%～2.25%與0.26%～2.84%(n=5)；24 h穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.39%～2.96%與0.20%～2.03%(n=5)；重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果：各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積RSD分別為0.16%～1.85%與0.08%～2.93%(n=5)。

2.4.3 共有模式圖的建立

以13批茅蒼術(shù)樣品指紋圖譜為基礎(chǔ)，生成共有模式圖(圖5)，根據(jù)各色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間，確定14個(gè)共有峰，其中7號(hào)峰保留時(shí)間適中、分離效果好且峰面積較大，因此選7號(hào)峰為參比峰。

2.4.4 指紋圖譜的建立及相似度評(píng)價(jià)

將不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物正丁醇部位樣品的HPLC數(shù)據(jù)導(dǎo)入“中藥色譜指紋圖譜計(jì)算機(jī)相似性評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004版A”，生成蒼術(shù)屬植物水提物正丁醇部位指紋圖譜(圖6)。以茅蒼術(shù)的共有指紋圖譜為參照?qǐng)D譜，對(duì)37批不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物正丁醇部位指紋圖譜進(jìn)行了相似度分析，其結(jié)果見(jiàn)表7。由表可知，與共有模式圖相比，茅蒼術(shù)、羅田蒼術(shù)的相似度較高，其平均相似度分別為95.0%、90.0%；其次為北蒼術(shù)、朝鮮蒼術(shù)、關(guān)蒼術(shù)、白術(shù)，平均相似度分別為84.9%、83.7%、72.5%、72.0%；鄂西蒼術(shù)相似度最低，為54.5%。此結(jié)果與石油醚部位及乙酸乙酯部位的相似度評(píng)價(jià)一致。

圖5 茅蒼術(shù)水提物正丁醇部位共有模式圖

圖6 蒼術(shù)屬植物水提物正丁醇部位指紋圖譜

樣號(hào)相似度/%樣號(hào)相似度/%樣號(hào)相似度/%L198.1H190.0J176.6L297.2B189.8J274.1L397.6B287.9J375.1L496.7B386.7J471.3L596.6B486.3J571.0L696.1B585.1J669.7L796.0B684.3J769.9L895.6B782.6M172.6L995.4B881.3M272.5L1093.7B980.5M371.1L1191.3C184.5M454.5L1290.6C283.7L1390.4C383.1

2.5 蒼術(shù)屬植物水提物不同極性部位綜合聚類(lèi)分析

將不同產(chǎn)地的37批蒼術(shù)屬植物樣品水提物石油醚部位的12個(gè)共有特征指紋峰，相對(duì)于參照峰(8號(hào)峰)的峰面積進(jìn)行量化，得到37×12階原始數(shù)據(jù)矩陣；乙酸乙酯部位的14個(gè)共有特征指紋峰，相對(duì)于參照峰(5號(hào)峰)的峰面積進(jìn)行量化，得到37×14階原始數(shù)據(jù)矩陣；正丁醇部位的14個(gè)共有特征指紋峰，相對(duì)于參照峰(7號(hào)峰)的峰面積進(jìn)行量化，得到37×14階原始數(shù)據(jù)矩陣；綜合37個(gè)樣品的三個(gè)不同極性部位共有特征峰的相對(duì)峰面積量化數(shù)據(jù)，可以得到37×40階原始數(shù)據(jù)矩陣，由SPSS軟件作聚類(lèi)分析，結(jié)果見(jiàn)圖7。

注：J1～J7關(guān)蒼術(shù)；M1～M3：白術(shù)；B1～B9：北蒼術(shù)；C1～C3：朝鮮蒼術(shù)；L5～L13：茅蒼術(shù)；H1：羅田蒼術(shù)；E1：鄂西蒼術(shù)

圖7 不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物綜合聚類(lèi)分析

從圖7可以看出，37批樣品可以聚為四類(lèi)：安徽、湖北、河南茅蒼術(shù)與羅田蒼術(shù)聚為一類(lèi)；江蘇茅蒼術(shù)與北蒼術(shù)及朝鮮蒼術(shù)聚為一類(lèi)；關(guān)蒼術(shù)與白術(shù)聚為一類(lèi)；鄂西蒼術(shù)單獨(dú)聚為一類(lèi)。其中茅蒼術(shù)和羅田蒼術(shù)先與北蒼術(shù)和朝鮮蒼術(shù)聚為一類(lèi)后，再與關(guān)蒼術(shù)和白術(shù)聚類(lèi)，最后與鄂西蒼術(shù)聚類(lèi)。

3 討 論

我國(guó)擁有豐富的蒼術(shù)屬資源，但其親緣關(guān)系研究一直存在爭(zhēng)議，目前已有的分類(lèi)研究結(jié)果不完全一致，且收集的藥材樣品都不夠全面，沒(méi)有包含蒼術(shù)屬植物所有的類(lèi)群。本實(shí)驗(yàn)收集了蒼術(shù)屬植物全部7個(gè)類(lèi)群，對(duì)37個(gè)不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物不同極性部位進(jìn)行綜合聚類(lèi)分析，結(jié)果表明：茅蒼術(shù)與羅田蒼術(shù)聚為一類(lèi)，關(guān)蒼術(shù)與白術(shù)聚為一類(lèi)，北蒼術(shù)與朝鮮蒼術(shù)以及部分茅蒼術(shù)聚為一類(lèi)，鄂西蒼術(shù)單獨(dú)聚為一類(lèi)，該結(jié)果與本課題組前期對(duì)不同產(chǎn)地的蒼術(shù)屬植物揮發(fā)油類(lèi)成分的分析結(jié)果相一致。

茅蒼術(shù)與北蒼術(shù)、羅田蒼術(shù)的親緣關(guān)系 2010年版《中國(guó)藥典》[5]記載蒼術(shù)為茅蒼術(shù)或北蒼術(shù)的干燥根莖。傅舜謨[6]對(duì)蒼術(shù)屬植物的揮發(fā)油進(jìn)行分析，認(rèn)為將北蒼術(shù)定為變種較合適。郭蘭萍[7]等用RAPD方法在分子水平上對(duì)南北蒼術(shù)的劃分進(jìn)行探討，認(rèn)為以地域?yàn)榻鐒澐帜媳鄙n術(shù)有一定道理。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示安徽、湖北、河南的茅蒼術(shù)樣品聚為一類(lèi)，河北、遼寧、山東、陜西、山西、內(nèi)蒙的北蒼術(shù)樣品另聚一類(lèi)，支持前人將南、北蒼術(shù)劃分開(kāi)的觀點(diǎn)，該結(jié)果與本課題組[8]前期采用GC-MS對(duì)南北蒼術(shù)揮發(fā)油成分進(jìn)行分析的聚類(lèi)結(jié)果一致，與鄒小興[9]通過(guò)ITS區(qū)序列構(gòu)建的系統(tǒng)樹(shù)表明茅蒼術(shù)和北蒼術(shù)遺傳關(guān)系較遠(yuǎn)的結(jié)果也一致。

胡世林[2]依據(jù)形態(tài)特征及揮發(fā)油含量的差異，將分布于大別山區(qū)海拔600 m以上的蒼術(shù)定名為新的地理亞種—羅田蒼術(shù)。鄒小興[9]通過(guò)ITS序列分析與atpB- rbcL、psbB-psbF 和trnL-trnF間隔區(qū)的序列分析，表明羅田蒼術(shù)與茅蒼術(shù)兩者之間的遺傳距離值非常小，親緣關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，羅田蒼術(shù)與茅蒼術(shù)聚為一類(lèi)且相似度最高，支持鄒小興羅田蒼術(shù)與茅蒼術(shù)親緣關(guān)系較近的觀點(diǎn)。

北蒼術(shù)與朝鮮蒼術(shù)的親緣關(guān)系。朝鮮蒼術(shù)與北蒼術(shù)在形態(tài)上非常相似，僅葉片的分裂程度略有不同[1]。已有文獻(xiàn)顯示二者有較近的親緣關(guān)系：Shiba等[10]研究表明用ITS序列無(wú)法對(duì)其進(jìn)行區(qū)分；葛燕芬[11]對(duì)二者trnL-F序列進(jìn)行測(cè)定及比較分析，結(jié)果表明北蒼術(shù)與朝鮮蒼術(shù)遺傳關(guān)系較近。本實(shí)驗(yàn)中北蒼術(shù)與朝鮮蒼術(shù)聚為一類(lèi)，與前人研究結(jié)果一致，均表明北蒼術(shù)與朝鮮蒼術(shù)親緣關(guān)系相近。

白術(shù)與關(guān)蒼術(shù)的親緣關(guān)系。關(guān)蒼術(shù)在日本作為白術(shù)藥用，在韓國(guó)和朝鮮既作白術(shù)又作蒼術(shù)。國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)此進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)關(guān)蒼術(shù)在化學(xué)成分方面更接近白術(shù)：潘希陵[12]等對(duì)術(shù)類(lèi)藥材的揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，結(jié)果表明關(guān)蒼術(shù)與白術(shù)聚為一類(lèi)后再與茅蒼術(shù)聚類(lèi)；陳彥[13]應(yīng)用高分辨氣相色譜-模糊聚類(lèi)分析法對(duì)蒼術(shù)屬藥材進(jìn)行色譜分析，研究結(jié)果也顯示白術(shù)和關(guān)蒼術(shù)具有較近的親緣關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC對(duì)蒼術(shù)屬植物的水溶性成分進(jìn)行研究，結(jié)果顯示關(guān)蒼術(shù)與白術(shù)聚為一類(lèi)，親緣關(guān)系相近。

鄂西蒼術(shù)與蒼術(shù)屬其它植物的親緣關(guān)系。在形態(tài)學(xué)上，鄂西蒼術(shù)與其他類(lèi)群均有顯著差異：根狀莖不發(fā)達(dá)，成熟植株具有基生葉。馬起鳳[14]等對(duì)鄂西蒼術(shù)化學(xué)成分進(jìn)行研究，認(rèn)為鄂西蒼術(shù)是蒼術(shù)屬內(nèi)較原始種，其他各種由其分化而來(lái)。本文研究表明，鄂西蒼術(shù)單獨(dú)聚為一類(lèi)，表現(xiàn)了與其它蒼術(shù)屬植物較遠(yuǎn)的親緣關(guān)系。這與鄒小興[9]對(duì)蒼術(shù)屬植物ITS和葉綠體基因間隔區(qū)的序列進(jìn)行研究，認(rèn)為鄂西蒼術(shù)與屬內(nèi)其余植物親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的觀點(diǎn)也一致。

本文采用高效液相色譜法建立不同產(chǎn)地蒼術(shù)屬植物水提物不同極性部位的指紋圖譜，并進(jìn)行綜合聚類(lèi)分析，研究蒼術(shù)屬植物親緣關(guān)系，結(jié)果與課題組前期以揮發(fā)油成分為指標(biāo)的研究結(jié)果一致。綜合分析水溶性和揮發(fā)性化學(xué)成分的特征，能夠更全面地從化學(xué)成分的角度為蒼術(shù)屬植物親緣關(guān)系的研究提供理論依據(jù)。

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Analysis on Chemical Genetic Relationship ofAtractylodesBased on HPLC Fingerprint Spectra of Water-soluble Components

Rui Mengjue1, Ouyang Zhen1,*, Peng Huasheng2,3, Zhao Ming1,Ye Dan, Shao Yang1, Jiang Shan1, Yang Shufang1, Yuan Ting1

(1.School of Pharmacy, Jiangsu University, Zhenjiang 212013, China;2.School of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Hefei 230031, China；3.National Resource Centre of Chinese Materia Medica, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)

High-performance liquid chromatography was used to establish the chromatographic fingerprints of the different polar extracts obtained from Atractylodes. Traditional Chinese Medicine (TCM) chromatographic fingerprint similarity evaluation system and SPSS was used to analyze the similarity evaluation and cluster analysis, in order to probe the genetic relationship ofAtractylodes. Cluster analysis outcomes demonstrated that Atractylodes can be divided into four categories:Atractylodeslancea (Thunb.) DC. andAtractylodeslanceasubsp.luotianensisS.L. Hu et X.F. Feng;AtractylodesmacrocephalaKoidz. andAtractylodesjaponicaKoidz.; part ofAtractylodeslancea(Thunb.) DC. andAtractylodescoreana(Nakai) Kitam. andAtractylodeschinensis(DC.) Koidz;Atractylodescarlinoides(Hand.-Mazz.) Kitam.The result obtained from the cluster analysis is similar to the one obtained when volatile oil components are used as indicator. Establishing the chromatographic fingerprints of the water-soluble components fromAtractylodesprovided reliable and solid evidence forAtractylodesclassification and the elucidation of the genetic relationship ofAtractylodes.

Atractylodes; genetic relationship; HPLC; fingerprint spectra; cluster analysis

2014-11-21

國(guó)家自然基金項(xiàng)目(81072985/H2801)；江蘇大學(xué)第十三批學(xué)生科研立項(xiàng)一般項(xiàng)目(13A156)。

芮夢(mèng)玨，女，碩士研究生。研究方向：中藥及其制劑質(zhì)量控制研究。 E-mail:15862996627@163.com

*通訊作者：歐陽(yáng)臻，教授，博士生導(dǎo)師。研究方向：中藥活性成分研究及新藥開(kāi)發(fā)。E-mail: zhenouyang@ujs.edu.cn

10.3969/j.issn.1006-9690.2015.03.001

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A

1006-9690(2015)03-0001-06